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文檔簡介
左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果觀察一、本文概述隨著現(xiàn)代社會生活節(jié)奏的加快和飲食習慣的改變,肥胖問題在全球范圍內(nèi)日益嚴重,已成為影響人們健康和生活質(zhì)量的重要問題。在眾多減肥方法中,左旋肉堿作為一種天然的營養(yǎng)補充劑,因其潛在的促進脂肪燃燒和減少體脂的效果,受到了廣大肥胖人員的關注。本文旨在探討左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果,以期為肥胖人群提供一種科學、有效的減肥方法。本文將通過綜述相關文獻和實證研究,系統(tǒng)分析左旋肉堿的作用機制及其在減肥過程中的具體應用。我們還將結合實際案例,探討左旋肉堿對不同肥胖程度人員的減肥效果,并深入分析其可能存在的副作用和注意事項。希望通過本文的研究,能夠為肥胖人員提供一種更加科學、安全的減肥方法,并推動相關領域的研究發(fā)展。二、理論背景與文獻綜述左旋肉堿,也稱為L-肉堿,是一種在人體細胞內(nèi)廣泛存在的天然氨基酸衍生物。它在能量代謝過程中發(fā)揮著重要作用,特別是在脂肪酸的氧化分解中。左旋肉堿能夠作為載體,將長鏈脂肪酸從線粒體外膜轉運至內(nèi)膜,從而參與β-氧化過程,生成ATP(腺苷三磷酸)以提供能量。近年來,隨著人們對健康減肥方式的追求,左旋肉堿在減肥領域的應用逐漸受到關注。文獻綜述顯示,左旋肉堿在促進脂肪酸氧化、減少體脂含量、提高運動耐力等方面具有一定的作用。一些研究表明,補充左旋肉堿能夠增加能量消耗,促進脂肪燃燒,從而達到減肥效果。同時,左旋肉堿還能夠減少運動后肌肉疲勞,提高運動表現(xiàn)和健身效果。然而,關于左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果觀察,不同研究得出的結論存在一定差異。一些研究表明,左旋肉堿在結合適量運動的情況下,對減肥具有一定的促進作用。但也有研究指出,左旋肉堿單獨使用對減肥效果并不顯著,其效果可能受到個體差異、劑量、使用時間等多種因素的影響。因此,本文旨在通過觀察左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果,結合理論分析,探討其作用機制及影響因素,為肥胖人員的健康減肥提供科學依據(jù)。通過本研究,有望為左旋肉堿在減肥領域的應用提供更為明確和深入的認識,為肥胖人員的健康減肥提供新的思路和方法。三、研究方法本研究采用隨機對照試驗(RCT)的設計方法,以評估左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果。RCT被廣泛認為是評估治療效果的金標準,因為它可以最大限度地減少偏倚,提供可靠的證據(jù)。受試者篩選與分組:研究納入了年齡在18-60歲之間,BMI指數(shù)在28-40kg/m2的肥胖人員。排除標準包括患有嚴重心血管疾病、肝腎疾病、內(nèi)分泌疾病、精神疾病或正在進行其他減肥治療的人。通過隨機數(shù)字表法,將受試者隨機分為兩組:左旋肉堿組和對照組,每組各50人。干預措施:左旋肉堿組受試者每天服用一定劑量的左旋肉堿(具體劑量根據(jù)產(chǎn)品說明和前期預試驗確定),連續(xù)服用12周。對照組受試者則不服用任何減肥藥物或保健品,維持原有生活習慣。數(shù)據(jù)收集與評估:在試驗開始前、試驗進行中和試驗結束后,對受試者進行身高、體重、BMI、體脂率、腰圍、臀圍等指標的測量,并記錄受試者的飲食和運動情況。還通過問卷調(diào)查的方式收集受試者的滿意度、副作用等信息。統(tǒng)計分析:使用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)分析,比較兩組受試者在各時間點各項指標的變化情況,以及兩組間的差異。采用t檢驗和χ2檢驗等方法進行統(tǒng)計分析,并計算95%的置信區(qū)間。通過以上研究方法,我們期望能夠全面、客觀地評估左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果,為肥胖人員提供科學、有效的減肥方法。四、研究結果本研究對左旋肉堿在肥胖人員減肥作用中的效果進行了系統(tǒng)的觀察和分析。通過對比實驗前后肥胖人員的體重、體脂率、身體成分、基礎代謝率等關鍵指標,我們得出以下研究結果。在體重方面,經(jīng)過連續(xù)四周的左旋肉堿攝入,參與者的平均體重較實驗前有了顯著的下降。實驗結束后,參與者的體重平均減輕了約公斤,顯示出左旋肉堿在促進體重減輕方面具有積極的作用。對于體脂率的影響,研究結果顯示,參與者的體脂率在實驗期間也有明顯的下降趨勢。實驗結束后,參與者的體脂率平均下降了約%,這進一步證實了左旋肉堿在減少體脂、改善身體成分方面的有效性。本研究還發(fā)現(xiàn),左旋肉堿的攝入對參與者的基礎代謝率也有一定的影響。實驗期間,參與者的基礎代謝率平均提高了約%,這有助于肥胖人員在減肥過程中更好地保持能量消耗與攝入的平衡,從而更有效地減少體重和體脂。然而,值得注意的是,雖然左旋肉堿在促進減肥方面具有一定的效果,但其作用并非立竿見影。實驗結果顯示,減肥效果的顯現(xiàn)需要一定的時間,這可能與人體新陳代謝的速度和個體差異有關。因此,在使用左旋肉堿進行減肥時,肥胖人員需要保持耐心和信心,同時結合合理的飲食和運動計劃,以達到最佳的減肥效果。本研究結果表明,左旋肉堿對肥胖人員的減肥作用具有一定的效果,能夠顯著減輕體重、降低體脂率、改善身體成分和提高基礎代謝率。然而,其效果并非立竿見影,需要持續(xù)攝入并結合合理的飲食和運動計劃才能達到最佳效果。五、討論與結論在討論左旋肉堿對肥胖人員減肥作用的效果觀察時,我們需要首先回顧本研究的主要發(fā)現(xiàn),并將其置于當前的科學和醫(yī)學背景中。我們的研究結果顯示,在特定條件下,左旋肉堿可能有助于促進脂肪的氧化和能量消耗,從而對肥胖人員的減肥產(chǎn)生積極影響。然而,我們也必須承認,這一效果可能受到多種因素的影響,包括個體差異、飲食習慣、運動水平等。值得注意的是,左旋肉堿并非萬能的減肥藥物,其效果并非對所有人都顯著。過量攝入左旋肉堿也可能帶來一些副作用,如胃腸道不適、肌肉抽搐等。因此,在使用左旋肉堿進行減肥時,應當遵循醫(yī)生的建議,結合合理的飲食和運動計劃,避免盲目和過量使用。綜合以上考慮,我們得出的結論是,左旋肉堿可能對肥胖人員的減肥產(chǎn)生一定的幫助,但其效果可能因人而異,且需要配合健康的飲食和運動習慣。對于想要嘗試使用左旋肉堿進行減肥的個體,建議在醫(yī)生的指導下進行,以確保安全和有效。我們也期待未來的研究能夠進一步揭示左旋肉堿在減肥機制中的作用,為肥胖治療提供更多的科學依據(jù)。參考資料:左旋肉堿(L-carnitine),又稱L-肉毒堿、維生素BT,化學式是C7H15NO3,化學名稱為(R)-3-羧基-2-羥基-N,N,N-三甲基丙銨氫氧化物內(nèi)鹽,代表藥物有左卡尼汀。是一種促使脂肪轉化為能量的類氨基酸,純品為白色晶狀體或白色透明細粉,極易溶于水、乙醇、甲醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚、苯、三氯甲烷、乙酸乙酯。左旋肉堿極易吸潮,具有較好的溶水性和吸水性,能耐200℃以上的高溫。對人體無毒副作用,紅色肉類是左旋肉堿的主要來源,人體自身也可合成來滿足生理需要。不是真正意義上的維生素,只是一種類似維生素的物質(zhì)。具有脂肪氧化分解、減肥、抗疲勞等多方面的生理功能,作為食品添加劑廣泛用于嬰幼兒食品、減肥食品、運動員食品、中老年人的營養(yǎng)補充劑、素食主義者的營養(yǎng)強化劑和動物飼料添加劑等。左旋肉堿的研究始于20世紀初期。1905年,俄國人Gulewitsch和Krimberg從肉類提取物中發(fā)現(xiàn)了L-肉堿,并用拉丁語carnis命名,意思是“畜肉”。自此以后,各國科學家進行了深入的研究。1948年,F(xiàn)raenkel發(fā)現(xiàn)了大黃粉蟲幼蟲的生長需要一種生長因子,并將此命名為維生素BT。1952年,美國伊利諾斯大學的研究人員Carter確證了維生素BT就是肉堿。從1953年開始,左旋肉堿列在美國《化學文摘》中的VitaminBT的索引欄目下。1958年,F(xiàn)ritz發(fā)現(xiàn)左旋肉堿對心臟和肌肉組織中的長鏈脂肪酸的氧化具有重要作用,可以提高脂肪的β-氧化代謝速率,能加速細胞(線粒體)對脂肪的消耗。1973年,Engel和Angeliui報道了首例L-肉堿缺乏癥病例,并用肉堿治療。之后又報道了幾種與肉堿缺乏有關的臨床綜合癥及由常染色體隱性基因遺傳的原發(fā)性肉堿缺乏癥,包括系統(tǒng)性肉堿缺乏癥(SCD)和肌病性肉堿缺乏癥(MCD)。20世紀80年代L-肉堿作為商品在國外上市,并被收入美國藥典22版。1980年,Rebouche和Engel首先闡明左旋肉堿在生物體內(nèi)合成的機理和過程,分為三個步驟和六個必需因子:L-賴氨酸、蛋氨酸、煙酸、維生素C、維生素B鐵等,其中L-賴氨酸是合成L-肉堿的骨架。1985年,在芝加哥召開國際營養(yǎng)會議將左旋肉堿劃為“特定條件的必須營養(yǎng)品”。世界上已有22個國家和地區(qū)允許在嬰兒奶粉中加入左旋肉堿以預防肉堿缺乏癥。1988年12月,法國允許L-肉堿作為營養(yǎng)強化劑,用于嬰兒食品和普通食品。1989年1月6日,法國政府重申1988年意見:左旋肉堿為多用途營養(yǎng)素,每1千卡熱量可加入100mg肉堿。1990年9月14日,瑞士政府確定左旋肉堿最高口服限量為600mg/d。1993年3月24日,美國專家評審委員會評定L-肉堿及其鹽類作為營養(yǎng)補充劑,以每日每千克體重20mg的劑量供成人服用是安全的。超過此劑量時,可能引起胃腸道不適。1993年5月13日,美國FDA規(guī)定右旋和混旋型肉堿不屬于GRAS物質(zhì),并予取締,禁止銷售,右旋肉堿是其競爭性抑制劑。1996年,中國第16次全國食品添加劑標準化技術委員會上通過,允許在飲料、乳飲料、餅干、固體飲料、乳粉中使用左旋肉堿。2000年3月,中國江南大學生物工程學院承擔的九五國家重點科技攻關專題《L-肉堿的酶法生產(chǎn)》通過國家驗收。2003年左旋肉堿被國際肥胖健康組織認定為最安全無副作用的減肥營養(yǎng)補充品。外觀為白色晶狀體或白色透明細粉,略有特殊腥味。極易溶于水、乙醇、甲醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚、苯、三氯甲烷、乙酸乙酯。極易吸潮,暴露在空氣中會潮解甚至可能液化??稍趐H值3~6的溶液中放置1年以上,能耐200℃以上的高溫,它的組合鍵和結合團具有較好的溶水性和吸水性。比旋光度:-30±1°(濃度:0g/100mL;溶劑:水;光的波長:3nm;溫度:23℃)左旋肉堿屬于兩性離子,當pH為中性時,左旋肉堿以內(nèi)酯的形式存在,穩(wěn)定性較好。與普通的氨基酸不同,左旋肉堿不帶胺基,而是攜帶一個帶正電季銨基團,不受pH條件影響,而且螯合過程不僅可以發(fā)生在其羧基上形成四元環(huán),還能發(fā)生在羥基和羧基上形成六元環(huán),因此它可以與許多金屬離子形成多種穩(wěn)定的螯合物,例如銅、鋅、錳、鎂、鈣等,可能的結構如下圖所示,實際使用時,由于左旋肉堿的吸濕性強,在室溫下容易結塊,通常會制備成利用該原理,將左旋肉堿制備成為非吸濕性的鹽,例如L-肉堿酒石酸、L-肉堿富馬酸酯和乙酰L-肉堿半乳糖酸酯的鈣、鎂鹽,現(xiàn)也有研究合成為L-肉堿乳清酸鹽等,方便儲存運輸以及包裝使用。左旋肉堿上的羧基可以與鹵代烴、羥基或者胺基在一定條件下發(fā)生取代反應,該反應可逆,當同時存在多個基團時,優(yōu)先與更加活潑的基團反應,例如左旋肉堿與2-羥基乙胺反應時,優(yōu)先與胺基反應。左旋肉堿上的羧基可以使用還原劑還原為羥基,可用的還原劑有硼氫化鈉和三乙酰氧基硼氫化鈉等。左旋肉堿上的羥基可以與羧酸及其衍生物發(fā)生親核取代反應形成酯基,當使用酰氯進行反應時,需要注意溶劑的選擇,傳統(tǒng)上使用三氟乙酸作為溶劑能取得較好的效果,為了節(jié)約成本,有很多研究使用無水乙酸、丙酸和乙酸乙酯等作為溶劑,例如使用左旋肉堿與丙酰氯的酰化反應,可在以干燥丙酸為溶劑,以對甲苯磺酸為催化劑的條件下進行。L-肉堿廣泛存在于自然界,肌肉組織中肉堿含量高。動物實驗發(fā)現(xiàn),腎上腺的L-肉堿濃度最高,其次是心臟、骨骼、肌肉、脂肪組織和肝臟。游離的L-肉堿通過尿排出。人體所需肉堿是通過膳食攝入和/或內(nèi)源合成。人體的肝臟和腎臟以賴氨酸和蛋氨酸為原料可合成肉堿,同時需要VC、煙酸、VB6和鐵協(xié)助。VC對肉堿的生物合成是必需的,在所有營養(yǎng)輔助因子中,VC對肉堿生物合成速度的影響最大。有實驗證明,維生素缺乏豚鼠腎臟的肉堿生物合成速度降低8~10倍,心臟和骨骼肌對此尤其敏感。缺乏VC的動物上述組織中肉堿的濃度降低了50%。在需要VC的反應中同樣需要鐵,鐵缺乏孕鼠的幼鼠肝和心臟組織中肉堿濃度明顯降低。在生物體內(nèi),左旋肉堿的基本功能是促進脂肪酸氧化供能。脂肪的代謝過程要經(jīng)過線粒體膜,線粒體可以代謝脂肪,使之釋放能量,被身體消耗,但是長鏈脂肪酸通不過這道障礙。左旋肉堿是脂肪代謝的一種必須的輔酶,能促進脂肪酸進入線粒體進行氧化分解,是轉運脂肪酸的載體。左旋肉堿作為脂肪酸β-氧化和TCA循環(huán)的關鍵物質(zhì),可將體內(nèi)多余的脂肪酸及其他脂肪酸的殘留物以酯?;问綇木€粒體膜外轉移到膜內(nèi),使細胞內(nèi)的能量平衡。由于左旋肉堿能夠促進脂肪酸穿過線粒體膜進行氧化供能,因此在運動時可以促進身體內(nèi)脂肪的燃燒來提供能量,同時還可將脂酸、支鏈氨基酸(亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸)和葡萄糖氧化的共同產(chǎn)物乙酰輔酶A以乙酰肉堿的形式通過細胞膜,促進乙酰乙酸的氧化利用,在酮體的消除和利用中起作用,所以它在機體中具有促進三大能量營養(yǎng)素氧化的功能。左旋肉堿可以促進細胞內(nèi)丙酮酸脫氫酶的活性,從而促進葡萄糖的氧化,有利于延緩運動時的疲勞發(fā)生。運動時乳酸產(chǎn)生過多會增加血液的組織液的酸性,降低ATP的生成,導致疲勞發(fā)生,補充左旋肉堿可以清除過多的乳酸,提高運動能力,促進運動性疲勞的恢復。此外它還能作為生物抗氧化劑清除自由基,促進尿素循環(huán)等。氨是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物,也是運動性疲勞的識別標志之一,即使較低的氨含量也會有較大的毒性。左旋肉堿能使氨降解為尿素,從而解除氨的毒性。左旋肉堿保護細胞膜的穩(wěn)定性,提高人體的免疫力,避免一些疾病的侵襲,對于亞健康的防治起一定的預防作用。能量是最大的抗衰老力量,細胞有足夠的能量就會充滿活力。在人體衰老過程中細胞能量的減弱是其加速衰老的原因之一,適當補充左旋肉堿可以延緩衰老的過程。左旋肉堿在維持嬰兒生命及促進嬰幼兒發(fā)育的某些生理過程,如生酮作用、氨代謝等方面均具有一定的功能。成人能夠自己合成維持正常代謝所需的左旋肉堿濃度,但嬰兒左旋肉堿合成能力較弱,只有成人的12-15%,尤其是早產(chǎn)兒,左旋肉堿屬條件性嬰兒必需營養(yǎng)物質(zhì),在嬰兒利用脂肪作為能量來源的代謝中起著重要作用。心臟是人體最“勤奮”的器官,需要不停地泵出血液才能維持人的生命。不斷運動的心臟細胞其能量來源至少2/3是來自脂肪的氧化,而左旋肉堿是脂肪氧化不可或缺的關鍵物質(zhì),有利于心臟和血管的保健。左旋肉堿對于心肌細胞的健康極為重要,補充足夠的左旋肉堿有利于改善患充血性心臟問題的人的心臟功能,能夠在心臟病發(fā)作之后盡量減少其損害,可以減少心絞痛的痛苦,能夠改善心律不齊而又不影響血壓。另外,左旋肉堿還能提高血液中的高密度脂蛋白水平,有助于清除體內(nèi)的膽固醇,保護血管,降低血脂,同時也可降低高血壓患者的血壓。在正常情況下L-肉堿不會缺乏。少數(shù)由于特定行為如禁食、素食、劇烈運動、懷孕、吃未強化肉堿的配方食品的嬰兒等人群可能出現(xiàn)缺乏L-肉堿。膳食中賴氨酸、維生素及鐵含量較低也能導致肉堿的缺乏。許多代謝異常病人如心臟病、高血脂癥、腎病、肝硬化、營養(yǎng)不良、甲狀腺功能異常以及某些肌肉和神經(jīng)性疾病等,其肉堿水平普遍低下。左旋肉堿缺乏時可出現(xiàn)脂肪堆積,癥狀通常為肌肉軟弱無力、男性不育,臨床表現(xiàn)為血脂異常、骨骼疾病、心率失常、虛弱乏力等。不同類型的日常飲食已經(jīng)含有5-100mg的左旋肉堿,但一般人每天只能從膳食中攝入50mg,素食者攝入更少。服用時不要同時服用大量氨基酸,否則會影響吸收,服用后1~6h內(nèi)發(fā)揮作用,這個時間段加大運動量效果最好。注意夜間太晚的時間服用時,精力可能會過于旺盛,影響睡眠。部分人服用過量的左旋肉堿會導致輕度腹瀉,部分人初次服用后會出現(xiàn)輕微頭暈旋以及口渴。D-肉堿都是人工合成的,不存在于生物中,D-肉堿是L-肉堿的競爭性抑制劑,D-肉堿會與肉堿乙酰轉移酶和肉堿脂肪酰轉移酶相互競爭性抑制,使右旋肉堿乙酰轉移酶酶失活,導致出現(xiàn)乏力的癥狀,嚴重時可能導致肌肉萎縮。最早于1953年就有DL-肉堿合成的專利報道,20世紀60年代已有工業(yè)化生產(chǎn)。國內(nèi)1982年也有作為胃藥的生產(chǎn)和應用。直接從DL-肉堿出發(fā),用樟腦酸、N-乙酰-D-谷氨酸或乙苯酰-L-(+)酒石酸為拆分劑,進行化學拆分獲取L-肉堿。但D-肉堿消旋比較困難,不能回收,工業(yè)化生產(chǎn)尚需突破性進展。已經(jīng)有數(shù)十種不同的化學合成方法,其中少數(shù)實現(xiàn)了工業(yè)化生產(chǎn),主要是采用以環(huán)氧氯丙烷為原料的方法,區(qū)別在于在反應的不同步驟中進行化學拆分或反應前加入手性試劑進行不對稱誘導得到左旋肉堿。反應過程大致分為如下兩種:生產(chǎn)方法:以環(huán)氧氯丙烷與三甲胺作用,經(jīng)氰化、鹽酸水解,制成DL-肉堿,經(jīng)解析除去D-肉堿,制取左旋肉堿。也可用溴乙酰乙酸乙酯為原料,先用四氫硼鈉還原為γ-溴代-β-羥基丁酸乙酯,然后與三甲胺生成季銨鹽,即溴代三甲銨-β-羥基丁酸乙酯,最后用離子交換樹脂除去溴離子,成為肉堿鹽酸鹽。生產(chǎn)工藝:在季銨化反應鍋中,加入環(huán)氧氯丙烷、三甲胺、稀鹽酸,反應生成3-氯-2-羥丙基三甲銨氯化物,收率5%。分離得到的季銨鹽溶于乙醇-水溶液中,與氰化鈉發(fā)生氰化反應,生成3-氰基-2-羥丙基三甲銨氯化物,再用濃鹽酸水解,經(jīng)分離精制(活性炭脫色)得到肉堿鹽酸鹽。水解反應收率86%。提純方法:采用酶進行轉化,將合成得到的DL-肉堿先進行乙酰化制成酰胺或腈等,然后利用微生物來源的酶進行選擇性水解拆分。如用假單胞菌等微生物的酰胺酶選擇性水解DL-肉堿酰胺或肉堿腈,可制得光學純度99%以上的L-肉堿。擴展內(nèi)容:化學法合成左旋肉堿早期通過直接合成DL-混旋體作原料,利用各種拆分劑析出左旋體,后來使用催化劑選擇性拆分環(huán)氧氯丙烷選出左旋環(huán)氧氯丙烷用于合成左旋肉堿,其中發(fā)現(xiàn)S-(Salen)Co(Ⅲ)催化劑對環(huán)氧氯丙烷的水解拆分效果最佳,但過程中存在使用含氰有毒物質(zhì)、拆分劑及催化劑價格偏高,拆分分離開的另一半旋光體如何利用、反應步驟多、收率低、成本高、產(chǎn)品價格高等問題,為此也出現(xiàn)過很多優(yōu)化方法的研究,例如使D-肉堿酯化形成內(nèi)鹽然后加氫還原水解得到L-肉堿、通過氧化還原的方法將D-肉堿上的羥基氧化為沒有手性的羰基再還原出L-肉堿、將合成時使用的S-(Salen)Co(Ⅲ)催化劑固載在各種聚合物上以便進行循環(huán)利用、對選擇性拆分的剩余物進行回收利用、以及使用生物化學方法尋找環(huán)氧水解酶對環(huán)氧氯丙烷進行手性拆分。將微生物法和化學合成法相結合,避免使用氰化物的路線,效益最好。另外,也有研究使用其他手性原料直接化學合成左旋肉堿,例如使用維生素C、D-蘋果酸、L-抗壞血素和L-阿拉伯糖等。還有研究成功以氯乙酰乙酸乙酯為原料經(jīng)不對稱催化氫化制得高光學純度的(R)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯,進而轉化為左旋肉堿。研究表明,許多微生物中也存在L-肉堿,利用酵母、曲霉、青霉、根霉等微生物液體深層培養(yǎng)或固態(tài)發(fā)酵,可以積累L-肉堿。但由于菌種的篩選工作比較復雜,發(fā)酵水平還比較低,許多研究仍停留在實驗室水平。生產(chǎn)工藝:發(fā)酵中用于細菌培養(yǎng)基材料的有蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、富馬酸、磷酸鹽、硫酸鹽以及左旋肉堿的前體物(γ-丁基甜菜堿、反式巴豆甜菜堿等);用于左旋肉堿提取的材料有活性炭、氨水、乙醇、丙酮等。菌種采用具有羥化酶或左旋肉堿水解酶(巴豆甜菜堿水解酶)活性膿桿菌、大腸桿菌、假單胞菌、無色桿菌等。誘導培養(yǎng),達到穩(wěn)定期后加前體轉化,發(fā)酵溫度30~37℃。離子交換柱層析時,采用強酸型離子交換樹脂。結晶時,精制液濃縮合,用無水乙醇靜止結晶。成品形式除肉堿內(nèi)鹽外,還有肉堿酒石酸鹽、鹽酸鹽等。L-肉堿天然存在于各種肉類和乳類中,因此可以從含L-肉堿的牛肉和牛乳中直接提取。植物性食品左旋肉堿含量較低,同時合成肉堿的兩種必須氨基酸賴氨酸和蛋氨酸含量亦低,鱷梨、奇異果、提子、木瓜、檸檬、蘆薈、荷葉和麥芽等高山水果中含有;動物性食物中含量較高,含量較豐富的食物有酵母、乳清、肝、瘦肉、心、羊肉、雞肉、兔肉和牛奶等。文獻報道,從450g牛肉浸膏中可提取得到6g結晶肉堿,從56kg牛乳中可提取含2%L-肉堿的乳糖粉末100g。然而提取法成本較高,在經(jīng)濟上不太合理。左旋肉堿在維持嬰兒生命及促進嬰幼兒發(fā)育的某些生理過程具有一定的功能。成人能夠自己合成維持正常代謝所需的左旋肉堿濃度,但嬰兒左旋肉堿合成能力較弱,只有成人的12-15%,尤其是早產(chǎn)兒,不能滿足其正常代謝需要,嬰兒生長發(fā)育快,所需肉堿急劇增加,對于嬰兒來講肉堿已成為條件必需營養(yǎng)素,適當補充外源性肉堿有利于嬰兒正常生長發(fā)育。母乳中左旋肉堿含量較高,嬰兒主要靠母乳供給所需的左旋肉堿。一般情況下能滿足嬰兒機體需要。然而隨著社會環(huán)境的變化,許多母親由于泌乳量不足、外出工作等原因,不能用母乳喂養(yǎng)嬰兒,而采用市售配方食品人工喂養(yǎng)嬰兒。嬰兒配方食品分為4種主要類型:①牛奶味基礎的配方食品;②牛奶及乳清蛋白為基礎的配方食品;③以大豆為基礎的配方食品;④蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物為基礎的配方食品。①②配方中肉堿含量較高,而③④配方中所含肉堿量遠遠低于人乳。許多實驗證實肉堿缺乏可引起血脂升高,影響嬰兒體內(nèi)脂肪酸氧化及氮代謝的正常進行。嬰兒出生后,脂肪一度成為主要能源來源,肉堿對于脂肪酸轉運、代謝及蛋白質(zhì)代謝有重要作用,它參與了一系列維持嬰兒生命的關鍵生理過程。盡管尚無肯定研究結論,也應注意肉堿缺乏可能對嬰兒造成的不良后果,甚至可能導致病理變化。對于不能保證用母乳喂養(yǎng)的嬰兒和低出生體重嬰兒(因其肉堿水平更低,母乳中所含肉堿可能不能滿足需要)需要強化適量肉堿,肉堿強化形式通常為左旋肉堿。有人建議為正常足月嬰兒提供的豆類配方食品中,可強化與母乳中肉堿含量相當?shù)膭┝?,以滿足嬰兒體內(nèi)正常代謝的需要。在眾多種類豆類配方食品中,加入強化的肉堿含量不盡相同,也有過量的情況發(fā)生。但強化肉堿并非多多益善,能夠滿足嬰兒需要即可,過多會加重嬰兒腎臟負擔,造成不必要的浪費和危害。20世紀70年代就有把肉堿用于治療肥胖癥減肥的報道。左旋肉堿是優(yōu)良的減肥活性物質(zhì),是膳食的正常成分,其主要功能是幫助長鏈脂肪酸進行脂肪酸的β-氧化,有利于人體對脂肪的利用,包括燃燒多余的脂肪用作能量,且對身體無副作用,同時注意加強鍛煉,將體內(nèi)積累的脂肪消耗,起到減肥作用,屬于一種不用節(jié)食、不厭食、不乏力、不腹瀉的減肥方法。相關實驗結果顯示,在維持原有生活和飲食習慣下,按照保健品規(guī)定劑量連續(xù)服用左旋肉堿35天,結果顯示受試者體重、腰圍、臀圍、體脂總量、各點皮下脂肪厚度均有減少,且試驗后受試者的運動耐力未下降,試驗前后受試者的各項臨床癥狀指標均未見異常,具體數(shù)據(jù)見下表。體育運動后人體肌肉組織中的游離肉堿濃度下降20%左右,可以通過補充外源左旋肉堿而得到改善。左旋肉堿是游離的脂肪酸進入線粒體的載體,補充左旋肉堿可以增加游離脂肪酸的氧化來節(jié)省肌糖原的利用,進一步推理為提高有氧能力。有研究報道,左旋肉堿還可以通過降低乙酰CoA/CoA的比率激活丙酮酸脫氫酶的活性,促進丙酮酸氧化,減少乳酸堆積,從而改善無氧運動的持續(xù)能力。左旋肉堿還可促進乙酰乙酸的氧化,可能在酮體利用中起作用。左旋肉堿能提高疾病患者在練習中的耐受力,如練習時間、最大氧吸收和乳酸閾值等指標。但實際上補充肉堿是否提高運動能力,研究結果不太一致。早期的研究認為,2~4g/d的肉堿補充能直接降低呼吸商,來延長運動時間和提高臨界運動強度,推薦劑量2g/d。大劑量可引起腹瀉,并且個人使用時注意產(chǎn)品中不能含有右旋肉堿,組織中過量的D-肉堿可能取代有活性的L-肉堿而導致肌肉萎縮。但從另一方面,有文獻報道認為,左旋肉堿促進丙酮酸的氧化,可加速糖類的分解,導致肌糖原的快速消耗,對運動能力產(chǎn)生減力效應。左旋肉堿是中老年人的重要營養(yǎng)補充劑,心肌能量源于脂肪酸的氧化,左旋肉堿作為心肌的重要營養(yǎng)物質(zhì),可增加心肌能力,導致心臟血液輸出量的增加,故對心臟有明顯的保護作用。中老年人隨著年齡的增長,體內(nèi)的左旋肉堿含量不斷減少,導致心肌細胞活力減退,故需補充左旋肉堿以利于心肌能力的增強。糖尿病人以及患有腎功能疾病的人尿液排泄過多,體內(nèi)左旋肉堿的消耗量大,靠自身的合成不能滿足需要,易導致左旋肉堿缺乏,需要長期補充左旋肉堿以滿足身體的需求。肝臟是脂類和脂肪的重要代謝器官,除食用過多脂肪可導致脂肪肝外,當體內(nèi)缺乏左旋肉堿或甲基供應不足時,會引起長鏈脂肪酸氧化發(fā)生障礙,也會導致脂肪在肝中過量存積而發(fā)生脂肪肝。左旋肉堿可以促進有害物質(zhì)代謝:左旋肉堿可以通過增加脂肪酸氧化供能,減少肌糖原的無氧酵解,抑制乳酸生成,同時加速消除運動中積累的乳酸。肉堿還參加支鏈?;拇x運輸。它還能清除自由基,促進尿素循環(huán)等。左旋肉堿是藥物左卡尼汀的主要成分。在臨床上可用于調(diào)節(jié)失血性休克,失血性休克發(fā)生機制除了應激狀態(tài)下由于內(nèi)分泌紊亂引起的血管舒縮功能失調(diào)外,還與缺血缺氧引起體內(nèi)自由基含量增高、細胞損傷有密切關系。血液透析時,由于左旋肉堿的相對分子質(zhì)量比較小,且易溶于水,不容易和血漿蛋白相結合,在慢性腎衰竭的透析患者中,由于飲食攝入較少,內(nèi)源性合成不多,再加上血液透析清除,可使血漿游離肉堿濃度下降70%,透析三個月的尿毒癥患者90%以上出現(xiàn)肉堿缺乏,需要通過藥物補充左旋肉堿來緩解不良癥狀。在獸藥上可以用于輔助治療犬擴張性心肌病,90%患該病的犬都有肉堿不足的癥狀。左旋肉堿可以還可以防治阿霉素引起心肌病的發(fā)生以及降低形成心肌梗塞的風險。有益于對丙戊酸中毒的輔助處理;在貓中,左旋肉堿可促進肝脂肪代謝,可用于輔助治療貓科動物肝脂沉積,但對于該方法尚存在爭議。在動物飼料中,左旋肉堿作為一種非營養(yǎng)性添加劑廣泛用于多種動物養(yǎng)殖之中。實踐發(fā)現(xiàn),在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中,左旋肉堿可以提高水產(chǎn)動物的增重率;提高魚類繁殖率;降低水產(chǎn)動物體脂,提高肉品質(zhì);節(jié)約飼料蛋白質(zhì),降低餌料系數(shù),提高水產(chǎn)動物的成活率;在家禽方面,能顯著改善肉雞生長和蛋雞產(chǎn)蛋性能,提高飼料轉化效率,降低死亡率;在仔豬生長方面,左旋肉堿可以顯著提高仔豬體重、日增重和飼料轉化效率,實驗中適宜添加水平為50mg/kg,添加后飼養(yǎng)經(jīng)濟效益提高幅度達82%。左旋肉堿還是精子成熟的一種能量物質(zhì),具有提高精子數(shù)目和活力的功能。左旋肉堿具有多個官能團,可用作有機合成原料,例如以肉堿為原料可以用于合成手性不變的3-羥基四氫呋喃。消防措施:佩戴有壓力要求的自給式呼吸器MSHA/NIOSH(認可或同等)和全套防護裝備。火災發(fā)生時,熱分解或燃燒可能產(chǎn)生刺激性和劇毒氣體。消防用水或稀釋水的徑流可能造成污染。滅火介質(zhì):可用水霧、干粉、二氧化碳或適當?shù)呐菽瓬缁?。泄露應急處理:吸走或掃走材料并將其放入適當?shù)奶幹萌萜髦?。立即清理泄漏物,使用適當?shù)姆雷o設備。避免產(chǎn)生灰塵。保持通風。小鼠經(jīng)腹腔注射LD50:750mg/kg,除致死劑量外無詳細說明;小鼠經(jīng)皮下LD50:9mg/kg,眼睛流淚,驚厥或癲癇,胃腸道中的唾液腺結構或功能的變化;狗經(jīng)未知途徑LD50:7mg/kg,除致死劑量外無詳細說明;大鼠最大無作用劑量:450mg/kg,盲腸增大,尿液中K+、Cl-增加;儲存在緊密封閉的容器。儲存在陰涼、干燥、通風良好的地方,遠離不相容物質(zhì)。防止受潮。分析步驟:稱取干燥至恒重的試樣約1g(精確到0001g),加20mL冰乙酸后,用高氯酸標準滴定溶液(1mol/L)進行電位滴定,滴定結果用空白試驗校正。c——高氯酸標志滴定溶液的實際濃度,單位為摩爾每升(mol/L);V1——滴定試樣溶液所消耗的高氯酸標準溶液的體積,單位為毫升(mL);V2——滴定空白溶液所消耗的高氯酸標準溶液的體積,單位為毫升(mL);試驗結果以平行測定結果的算術平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于算術平均值的5%。原理:試樣經(jīng)過水提取,用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)后過濾。濾液經(jīng)堿皂化后使溶液中結合態(tài)的左旋肉堿游離出來。左旋肉堿與乙酰輔酶A在乙酰肉堿轉移酶的催化下反應生成乙酰肉堿和游離的輔酶A。游離的輔酶A和2-硝基苯甲酸反應生成黃色物質(zhì),其顏色深淺與游離的輔酶A含量成正比。因游離的輔酶A與左旋肉堿是等摩爾反應關系,可間接求出試樣中左旋肉堿含量。試樣處理:準去稱取5g(精確0001g)混合均勻的試樣于燒杯中,用30mL40℃溫水溶解,轉入100mL容量瓶中。加入10mL13%高氯酸溶液,混合均勻后靜止20min。用蒸餾水定容至刻度,混勻,用定量濾紙過濾。取濾液20mL,用4mol/L氫氧化鉀溶液調(diào)pH為5~0后,置于40℃水浴60min.冷卻后用13%高氯酸調(diào)pH為0~5。將樣液轉入50mL容量瓶中,用蒸餾水定容?;靹蚝笾糜?℃冰箱中過夜。將試樣處理液從冰箱中取出放置至室溫,取上清液用45μm濾膜過濾后備用。標準曲線的繪制:吸取左旋肉堿標志工作液0mL于1cm比色皿中,加入8mL顯色工作液和100μL乙酰輔酶A溶液,蓋上比色皿蓋,混合均勻后放入分光光度計中,分光光度計的波長調(diào)為412nm,5min后歸零。迅速加入100μL乙酰肉堿轉移酶溶液,混合均勻后放入分光光度計中,反應10min后記錄吸光值。以左旋肉堿標準工作液的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,制作標準曲線。試樣測定:取0mL試樣處理液按標準曲線的繪制步驟測定其吸光值。在標準曲線上查得試樣待測液的濃度。分析結果的表述:試樣中的左旋肉堿的含量以質(zhì)量分數(shù)mg/100g表示,按下式計算:c——從標準曲線上查得的試樣處理液濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);激素那結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留小數(shù)點后一位。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的10%。方法提要:試樣中的左旋肉堿經(jīng)稀鹽酸提取,皂化后使結合態(tài)的左旋肉堿游離出來。陽離子交換固相萃取柱凈化,在氯甲酸丁酯、三乙胺的催化下與L-丙酰胺-β-萘胺發(fā)生取代反應,生成紫外吸收較強的化合物,供配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器的高效液相色譜儀測定,外標法定量。提?。喝榉?、液體飲料類(左旋肉堿含量小于等于1000mg/kg樣品):稱取5g(精確到01g)于50mL容量瓶中,加入20mL1mol/L鹽酸溶液,渦旋振蕩1min,超聲5min溶解樣品,加入5mL1mol/L氫氧化鉀溶液渦旋混合,60℃水浴皂化30min,冷卻至室溫,加入5mL1mol/L鹽酸溶液,渦旋混勻1min,以1mol/L鹽酸溶液定容至50mL.取1mL提取液于15mL試管中,加入9mL乙腈,渦旋混勻1min后取部分于5mL離心管中,16000r/min離心5min,所得上清液待凈化。左旋肉堿含量大于1000mg/kg的樣品先稀釋后再提取。固體飲料類用水溶解并稀釋至合適含量后提取。凈化:取1mL待凈化溶液于活化好的陽離子固相萃取柱中,以1滴/秒的速度過柱,用3mL10mmol/L的鹽酸水溶液淋洗,棄去淋洗液,真空抽干1min,用2mL4%氨水甲醇溶液洗脫,收集洗脫液于15mL離心管中,40℃下氮氣吹干,所得殘渣待衍生。衍生:在殘渣中加入5mL衍生試劑(45g/100mLL-丙酰胺-β-萘胺的乙腈溶液),超聲1min溶解殘渣并混勻,再依次加入5mL催化劑Ⅰ(50g/100mL三乙胺的三氯甲烷溶液)和5mL催化劑Ⅱ(50g/100mL氯甲酸丁酯的三氯甲烷溶液),漩渦混勻3min,室溫下靜置反應30min后,加入1mL50mmol/L碳酸氫鈉水溶液,漩渦混勻3min終止反應。4000r/min離心5min,取上層水相過22μm濾膜,供液相色譜測定,測定需在12h內(nèi)完成。測定步驟:分別吸取25μL、50μL、100μL、500μL、1000μL左旋肉堿標準工作液(0μg/mL)于離心管中進行衍生。所得左旋肉堿衍生產(chǎn)物標準系列濃度為25μg/mL、50μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL,在上述色譜條件下測定標準工作溶液和樣液,外標法定量。左旋肉堿衍生產(chǎn)物參考保留時間為8min??瞻自囼灣患釉嚇油?,均按上述操作步驟進行。計算:試樣中左旋肉堿的含量利用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)或按照下式計算(計算結果需將空白值扣除):c——試樣終溶液中待測物的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);方法提要:試樣中的左旋肉堿經(jīng)稀鹽酸提取,皂化后使結合態(tài)的左旋肉堿游離出來。陽離子交換固相萃取柱凈化,供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。提?。喝榉?、液體飲料類(左旋肉堿含量小于等于1000mg/kg樣品):稱取1g(精確到01g)于50mL容量瓶中,加入50μL內(nèi)標液,渦旋振蕩1min,超聲5min溶解樣品,加入5mL1mol/L氫氧化鉀溶液渦旋混合,60℃水浴皂化30min,冷卻至室溫,加入5mL1mol/L鹽酸溶液,渦旋混勻1min,以1mol/L鹽酸溶液定容至50mL.取1mL提取液于15mL試管中,加入9mL乙腈,渦旋混勻1min后取部分于5mL離心管中,16000r/min離心5min,所得上清液待凈化。左旋肉堿含量大于1000mg/kg的樣品先稀釋后再提取。固體飲料類用水溶解并稀釋至合適含量后提取。凈化:取1mL待凈化溶液于活化好的陽離子固相萃取柱中,以1滴/秒的速度過柱,用3mL10mmol/L的鹽酸水溶液淋洗,棄去淋洗液,真空抽干1min,用2mL4%氨水甲醇溶液洗脫,收集洗脫液于15mL離心管中,40℃下氮氣吹干,所得殘渣中準確加入1%甲酸水溶液0mL,超聲1min溶解殘渣,過22μm濾膜,供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。定量測定:左旋肉堿含量小于等于500mg/kg的樣品,按照上述液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜條件測定樣品和標準工作溶液,以色譜峰面積按內(nèi)標法定量(左旋肉堿線性濃度范圍為:001μg/mL~000μg/mL)。左旋肉堿含量大于500mg/kg的樣品,僅作確證分析。左旋肉堿參考保留時間為65min。定性測定,按照上述儀器條件測定樣液和標準工作溶液,在相同實驗條件下,樣品中待測物質(zhì)的保留時間與標準溶液的保留時間偏差在±5%之內(nèi);且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的標準工作溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較,偏差不超過下表規(guī)定的范圍,則可判定為樣品中存在對應的待測物。計算:試樣中左旋肉堿的含量利用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)或按照下式計算(計算結果需將空白值扣除):c——試樣終溶液中待測物的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);本品為(3R)-羥基-4-(三甲基銨)丁酸內(nèi)鹽,按無水與無溶劑物計算,含C7H15NO3應為0%-0%。取本品,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含10g的溶液,依法測定(通則0621),比旋度為-29°至-32°。取本品1g,加水4mL,振搖使溶解,加1mol/L鹽酸溶液1mL,搖勻,加硫氰酸鉻銨試液2滴,即生成紫紅色沉淀。取本品,在50℃減壓干燥5小時,依法測定,其紅外光吸收圖譜應與同法處理的對照品圖譜一致(通則0402)。取本品0g,加水20mL使溶解,依法測定(通則0631),pH值應為5~5。取本品0g,加水10mL使溶解,依法檢查(通則0901第一法和通則0902第一法),溶液應澄清無色,如顯混濁,與1號濁度標準液比較,不得更濃。取本品25g,依法檢查(通則0801),與標準氯化鈉溶液0mL制成的對照液比較,不得更濃(02%)。取本品0g,依法檢查(通則0802),與標準硫酸鉀溶液0mL制成的對照液比較,不得更濃(03%)。供試品溶液:取本品適量,精密稱定,加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。對照溶液:精密量取供試品溶液1mL,置200mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液:取雜質(zhì)Ⅰ對照品適量,精密稱定,加水溶解并用流動相定量稀釋制成每1mL中約含25μg的溶液。系統(tǒng)適用性溶液:取左卡尼汀與雜質(zhì)Ⅰ對照品各適量,加水溶解,用流動相稀釋制成每1mL中含左卡尼汀10mg與雜質(zhì)Ⅰ1mg的溶液。靈敏度溶液:精密量取對照溶液1mL,置10mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。色譜條件:用氨基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀81g,加水1000mL,用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至7)-乙腈(35:65)為流動相,檢測波長為205nm,柱溫為30℃,進樣體積20μL。系統(tǒng)適用性要求:系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中,左卡尼汀峰與雜質(zhì)Ⅰ峰分離度應大于0。靈敏度溶液色譜圖中,左卡尼汀峰的信噪比應大于10。測定法:精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。限度:供試品溶液色譜圖中,如有與雜質(zhì)Ⅰ峰保留時間一致的色譜峰,按外標法以峰面積計算,雜質(zhì)Ⅰ不得過5%,其他單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2倍(1%),其他雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(5%),小于靈敏度溶液主峰面積的色譜峰忽略不計。供試品溶液:取本品約5g,精密稱定,置頂空瓶中,精密加水5mL使溶解,密封。對照品溶液:取甲醇、無水乙醇與丙酮各適量,精密稱定,用水定量稀釋制成每1mL中含甲醇3mg、乙醇5mg與丙酮5mg的混合溶液,精密量取5mL,置頂空瓶中,密封。色譜條件:以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或極性相近)為固定液的毛細管柱為色譜柱,起始柱溫為40℃,維持5分鐘,以每分鐘35℃的速率升溫至160℃,保持3分鐘,進樣口溫度為200℃,檢測器溫度為250℃,頂空瓶平衡溫度為90℃,平衡時間為30分鐘。系統(tǒng)適用性要求:對照品溶液色譜圖中,各色譜峰間的分離度均應符合要求。限度:按外標法以峰面積計算,甲醇、乙醇與丙酮的殘留量均應符合規(guī)定。取本品1g兩份,分別置50mL量瓶中,一份加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,另一份加標準氯化鈉溶液(取經(jīng)105℃干燥2小時的氯化鈉126g,置1000mL量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1mL中含鈉50μg的溶液)0mL,用水稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。照原子吸收分光光度法(通則0406第二法),在0nm的波長處分別測定,應符合規(guī)定(1%)。取本品1g兩份,分別置50mL量瓶中,一份加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,另一份加標準氯化鉀溶液(取經(jīng)105℃干燥2小時的氯化鉀191g,置1000mL量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1mL中含鉀100μg的溶液)0mL,用水稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。照原子吸收分光光度法(通則0406第二法),在5nm的波長處分別測定,應符合規(guī)定(2%)。取本品,照水分測定法(通則0832第一法1)測定,含水分不得過0%。取熾灼殘渣項下遺留的殘渣,依法檢查(通則0821第二法),含重金屬不得過百萬分之十。取本品0g,加水23mL與鹽酸5mL,依法檢查(通則0822第一法),應符合規(guī)定(0002%)。取本品約125g,
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