SNT 2533-2010進(jìn)出口化妝品中糖皮質(zhì)激素類與孕激素類檢測(cè)方法

中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)出口化妝品中糖皮質(zhì)激素類與孕激素類檢測(cè)方法Determinationofcorticosteroidsandprogesteronesin2010-03-02發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局I本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C和附錄D均為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)河南出入境檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。1進(jìn)出口化妝品中糖皮質(zhì)激素類與孕激素類檢測(cè)方法1范圍孕酮等11種孕激素類藥物含量檢測(cè)的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC-MS/MS)和液相色譜法(LC)檢測(cè)本標(biāo)準(zhǔn)適用于膏狀、乳狀、水狀化妝品中17種糖皮質(zhì)激素和11種孕激素含量檢測(cè)的液相色譜方法和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜確證方法。本標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法為仲裁法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注明日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方面研究是否可使用這些文件的最新版本…凡是不注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3試樣的制備與保存方法一液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法4方法提要化妝品中糖皮質(zhì)激素、孕激素采用乙腈超聲提取，吹于濃縮后經(jīng)固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜/除特殊注明外，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.4甲醇-水(30+70,體積比)溶液：量取30mL甲醇與70mL水混合。5.510mmol/L乙酸胺溶液：稱取0.77g乙酸胺(5.3),用水溶解并定容至1000mL。5.6乙腈-10mmol/L乙酸胺溶液(70+30,體積比):量取70mL乙腈與30mL10mmol/L乙酸胺溶液(5.5)混合。5.7標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品名稱及CAS號(hào)參見附錄A中表A.1,純度大于等于99%。25.8標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別稱取糖皮質(zhì)激素、孕激素類標(biāo)準(zhǔn)品各0.010g(5.7),用甲醇溶解并定容至5.9標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：準(zhǔn)確移取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液(5.8),用甲醇定1.0μg/mL,該溶液貯存于0℃~4℃,可穩(wěn)定1個(gè)月，7測(cè)定步驟7.1樣品提取準(zhǔn)確稱取1g均勻試樣(精確到0.01g)于20mL聚丙烯離心管中，加入10mL乙腈，混勻后40℃超聲提取20min,每隔5min取出晃動(dòng)一次，超聲后渦旋混勻3min,4000r/min離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至10mL聚丙烯離心管中，置于—18℃冰箱中冷凍30min,取出后立即于-10℃4000r/min離7.1.2水狀樣品超聲提取20min,每隔5min取出晃動(dòng)一次，超聲后渦旋混勻3min,4000r/min離心5min,將上清液將樣液轉(zhuǎn)移至已活化過的固相萃取柱中(5.11),控制樣液流速約1mL/min,待樣液全部流出后持干涸，用10mL甲醇洗脫，洗脫液于50℃水浴中氮吹濃縮至干，用1.0mL乙腈-乙酸胺混合溶液7.3測(cè)定7.3.1液相色譜條件3SN/T2533—2010表1液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法梯度洗脫程序時(shí)間/min流速/(mL/min)乙腈/%10mmol/L乙酸胺/%087.3.2質(zhì)譜條件7.3.2.1離子化模式：電噴霧正離子模式(ESI+);7.3.2.2質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);7.3.2.3其他質(zhì)譜參考條件參見附錄B。7.3.3液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定7.3.3.1定量測(cè)定根據(jù)樣液中糖皮質(zhì)激素、孕激素濃度大小，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中糖皮質(zhì)激素、孕激素響應(yīng)值均應(yīng)在儀器的檢測(cè)線性范圍內(nèi)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液等體積參差進(jìn)樣測(cè)定，在上述色譜條件下，糖皮質(zhì)激素、孕激素參考保留時(shí)間參見附錄A中表A.1。標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖參見附錄C中圖C.1。7.3.3.2定性測(cè)定按照上述儀器條件測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果樣品與標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)物質(zhì)色譜峰相對(duì)保留時(shí)間在±2.5%范圍內(nèi)；糖皮質(zhì)激素、孕激素的質(zhì)譜兩個(gè)定性離子必須同時(shí)出現(xiàn)，樣品中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許誤差不超過表2規(guī)定的范圍。表2相對(duì)離子豐度最大容許誤差相對(duì)豐度(基峰)/%相對(duì)離子豐度最大容許誤差/%大于20至小于等于50大于10至小于等于20士30小于等于108空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述操作步驟進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算用數(shù)據(jù)處理軟件中的外標(biāo)法，或按照式(1)計(jì)算試樣品中糖皮質(zhì)激素、孕激素類藥物含量。 (1)4SN/T2533—2010c——標(biāo)準(zhǔn)工作液中糖皮質(zhì)激素、孕激素類藥物的濃度，單位為納微克每升(pg/L);V—樣液最終定容體積，單位為毫升(mL);A,——標(biāo)準(zhǔn)工作液中糖皮質(zhì)激素、孕激素類藥物的色譜峰面積；m——最終樣液所代表的試樣量，單位為克(g)。10測(cè)定低限和回收率10.1測(cè)定低限本標(biāo)準(zhǔn)中17種糖皮質(zhì)激素與1|種孕激素的測(cè)定低限均為10rg/kg。本標(biāo)準(zhǔn)的添加濃度范圍與回收率數(shù)據(jù)參見附錄D中表D.1。11方法提要化妝品中糖皮質(zhì)激素、孕激素用乙腈超聲提取，吹干濃縮后經(jīng)固相萃取柱凈化，用配有二極管陣列檢測(cè)器或雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器的液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。12.2標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要用之腈一水(12.1)將標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.9)稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶13儀器和設(shè)備除特殊注明外，所用試劑和材料均同6.2～6.8。液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器或雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器。同7.1。14.3.1液相色譜條件5表3液相色譜法梯度洗脫程序時(shí)間/min流速/(mL/min)水/%0514.3.2液相色譜測(cè)定參見附錄C中圖C.2。15空白試驗(yàn)16結(jié)果計(jì)算和表述同第9章。17.1測(cè)定低限本方法測(cè)定低限為100pg/kg?；厥章蕦?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參見附錄D中表D.2。6(資料性附錄)檢測(cè)化合物和保留時(shí)間表A.1檢測(cè)化合物及參考保留時(shí)間類型化合物英文名稱CAS號(hào)考保留時(shí)間/minHPLC-MS/MS法參考保留時(shí)間/min糖皮質(zhì)激素曲安西龍triamcinolone潑尼松龍predisolone50-24-8氫化可的松hydrocortisone50-23-7甲潑尼松龍methylprednisolone83-43-2betamethasone378-44-9dexamethasone50-02-2氟米松flumethasone2135-17-3曲安奈德triamcinoloneacetonide76-25-5氟氫松fluocinoloneacetonide67-73-2酷酸氫化可的松hydrocortisoneacetate50-03-3醋酸氟氫可的松fludrocortisoneacetate514-36-3醋酸潑尼松prednisoneacetate醋酸可的松cortisoneacetate50-04-4醋酸地塞米松dexamethasoneacetate哈西奈德halcinonide3093-35-417a-羥基醋酸去氧皮質(zhì)酮17a-hydroxycorticosterone56-47-3丙酸倍氯米松checlomethasone5534-09-841.1孕激素炔諾酮norethisterone68-22-4孕酮progesterone57-83-0甲烯雌醇醋酸酯melengestrolacetate2919-66-6甲炔諾酮norgestrel797-63-7地屈孕酮dydrogesterone醋酸羥孕酮17a-hydroxyprogesteroneacetate302-23-8醋酸甲地孕酮megestrolacetate595-33-5米非司酮mifepristone84371-65-3醋酸氯地孕酮chlormadinoneacetate302-22-7醋酸甲羥孕酮medroxyprogesteroneacetate71-58-9己酸羥孕酮17a-hydroxyprogesteronecaproate630-56-844.47液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法儀器參數(shù)與監(jiān)測(cè)離子)儀器參數(shù)與監(jiān)測(cè)離子a)霧化氣GS1(NEB):310.28kPa(45psi)(氮?dú)?;b)氣簾氣(CUR):172.38kPa(25psi)(氮?dú)?;c)噴霧電壓(IS):5000V;d)離子源溫度(TEM):550℃;e)去溶劑氣流GS2:310.28kPa(45psi)(氮?dú)?;f)碰撞氣(CAD):34.48kPa(5psi)(氮?dú)?;g)其他質(zhì)譜參數(shù)見表B.1。表B.1待測(cè)藥物的主要參考質(zhì)譜參數(shù)藥物名稱定量離子對(duì)定性離子對(duì)駐留時(shí)間/ms去簇電入口電碰撞能量CE/ev碰撞室出口電壓醋酸地塞米松99倍他米松89醋酸可的松9醋酸羥孕酮85己酸羥孕酮7潑尼松龍9甲潑尼松龍6617a-羥基醋酸去氧皮質(zhì)酮77醋酸甲地孕酮88醋酸氯地孕酮78表B.1(續(xù))藥物名稱定量離子對(duì)定性離子對(duì)去簇電入口電碰撞能量CE/ev碰撞室出口電壓CXP/V地塞米松87哈西奈德曲安西龍395.1/225.39丙酸倍氯米松521.3/5b3.2-甲炔諾酮8313.4/245.2醋酸氫化可的松氯氫輕7氫化可的松7甲烯雌醇醋酸酯孕酮6醋酸氟氫可的松氟米松9曲安奈德7醋酸潑尼松97醋酸甲羥孕酮79表B.1(續(xù))藥物名稱定量離子對(duì)定性離子對(duì)駐留時(shí)間/ms去簇電人口電碰撞能量CE/ev碰撞室出口電壓米非司酮430.3/134.3430.3/134.388430.3/372.479炔諾酮299.3/109.3299.3/109.3299.3/231.3地屈孕酮6ntensity/ntensity/cpsIntensity/cpsIntensity/epsIntensity/cps(資料性附錄)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖t/mint/mint/mint/mint/mint/mint/minl/minl/mint/mint/mint/mint/mint/mint/mint/mint/min岳2.t/mint/minl/minl/min(/min(/mint/mint/mint/mint/mint/mmt/mmt/mint/mint/mint/mint/mint/min(資料性附錄)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與液相色譜法回收率數(shù)據(jù)藥物名稱添加濃度/(pg/kg)藥物名稱添加濃度/(μg/kg)醋酸地塞米松71.4～91.8甲炔諾酮80.5～106.474.0～92.082.1～97.640.077.0—100.240.083.5～98.5倍他米松70.8～93.8醋酸氫化可的松76.5～92.778.0～99.079.4～104.640.079.5～99.540.083.6～99.5醋酸可的松71.8～90/8氟氫輕76.8～101.576.1<102.480.4～97.340.080.3～105.740.085.8～98.8醋酸羥孕酮72.8～98.7氫化可的松79.5～10879.4～94.586.2～10640.076.8～101.340.083.4～98.7己酸羥孕酮70.6～110.5甲烯雌醇醋酸酯73.2～10879.0～91.778.1～10440.081.4～99.6/40.085.5～100潑尼松龍76.8～108'畢酮79.9～96.077.6～11082.4～94.740.040.086.5～101甲潑尼松龍醋酸氟氫可的松81.0～10279.4～10440.088.0～10340.080.0～10117a-羥基醋酸去氧皮質(zhì)酮73.5～107氟米松75.8～10279.0～98.188.9～10540.089.2～10140.083.7～98.9醋酸甲地孕酮75.4～99.6曲安奈德78.3～10585.7·~10379.9-~10240.089.0～98.740.084.5～104酷酸氯地孕酮71.7～101醋酸潑尼松77.1～95.085.5~10571.5～93.840.089.0～99.740.089.0～99.7地塞米松80.0～109酷酸甲羥孕酮68.9～93.484.1～10372.5～90.240.089.0～99.540.078.6～95.8表D.1(續(xù))藥物名稱添加濃度/(μg/kg)回收率/%藥物名稱添加濃度/(pg/kg)哈西奈德米非司酮曲安西龍炔諾酮丙酸倍氯米松70-9~89-9.地屈孕酮表D.2