心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑盒(膠體金法)綜述資料

心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑盒（膠體金法）綜述資料申報(bào)產(chǎn)品名稱：心肌肌鈣蛋白I檢測(cè)試劑盒（膠體金法）申報(bào)單位：常州博聞迪醫(yī)藥科技有限公司申報(bào)時(shí)間：2014年4月8日綜述資料1．概述：1.1產(chǎn)品預(yù)期用途：用于臨床體外人體全血、血漿或血清心肌肌鈣蛋白I（cTnI）水平的定量或定性檢測(cè)。與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況：隨著人們生活質(zhì)量的提高，冠心病成為影響人群健康的主要疾病。急性心肌梗死（AMI）則是造成冠心病人死亡的主要原因。如何及時(shí)地發(fā)現(xiàn)急性心梗病人并及早采取溶栓及其相應(yīng)的介入治療是挽救病人生命的關(guān)鍵所在。臨床常用的急性心肌梗死的診斷方法包括：臨床表現(xiàn)、心電圖改變和血液生化指標(biāo)的改變等。目前，心電圖的特異性改變是急性心肌梗死早期診斷的常用方法。然而，約有30-50%患者的心電圖改變呈非典型性或變化不明顯，不能僅以心電圖確立診斷，必須依賴于心肌生化指標(biāo)的改變而確診。以可疑急性心肌梗死入院的病例中只有30%左右的患者最終被確診為心肌梗死。但這些可疑病例都要進(jìn)行臨床監(jiān)測(cè)，以排除急性心梗的診斷。目前臨床所用的生化指標(biāo)檢測(cè)手段多種多樣，膠體金法是最為常用的快速檢測(cè)手段之一。心肌源性肌鈣蛋白I（CardiacTroponinI,簡(jiǎn)稱cTnI）是一種重要的心肌組織損傷特異性標(biāo)志物，臨床廣泛用于急性心肌梗死及其它心肌損傷性疾病的輔助診斷。一般在心肌梗死后2-4小時(shí)血液濃度升高，12-24小時(shí)達(dá)高峰。cTnI可持續(xù)在血液中保持較高的濃度達(dá)4-10天。肌鈣蛋白Ｉ檢測(cè)的特異性很高。因此，采用膠體金法，開發(fā)一快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確并且費(fèi)用低廉的急性心肌梗死的診斷試劑盒具有重要的臨床意義。相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等：二十年前，世界衛(wèi)生組織(WHO)制定了AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)，下列三組情況必須同時(shí)存在兩組才能診斷為AMI：1、有劇烈而持久的胸痛史；2、明確的心電圖改變，包括ST段抬高和異常的Q波出現(xiàn)；3、系列酶的水平的改變，早期濃度升高，隨后恢復(fù)正常濃度。在這一診斷標(biāo)準(zhǔn)中，心電圖占有重要地位。心電圖可以反映心肌缺血及壞死體征，前者常表現(xiàn)為ST段及T波變化，后者多見QRS波變化。這些標(biāo)準(zhǔn)是采用標(biāo)準(zhǔn)12導(dǎo)聯(lián)心電圖對(duì)比臨床及病理解剖資料建立的。但并非所有心肌壞死都表現(xiàn)為ECG的變化，因此心電圖正常并不能排除AMI。隨著我們步入二十一世紀(jì)的到來，診斷AMI的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)有了劃時(shí)代的改變。AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)包括三個(gè)方面：病史與癥狀、ECG表現(xiàn)和生化標(biāo)志物。心肌損傷標(biāo)志物起初選用肌酸激酶(CK)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、和乳酸脫氫酶(LDH)作為心肌梗死的標(biāo)志物。80年代CK的同工酶CK-MB和LDH的同工酶LDH1一度被認(rèn)為是AMI診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，實(shí)際上，這些標(biāo)志物不僅用于AMI的診斷，還用于評(píng)價(jià)有急性缺血性綜合癥病史的患者的心肌壞死情況。但這些傳統(tǒng)標(biāo)志物在其它非心肌疾病中也會(huì)有所升高，如在骨骼肌損傷修復(fù)期，分化較差骨骼肌亦可大量表達(dá)CK-MB、LDH1［3、5］。另外，在缺血性綜合癥的發(fā)病初期以及微小心肌損傷過程中，這些指標(biāo)的臨床敏感性并不理想，所以近來發(fā)展并研究了一些新的生化標(biāo)志物。近來分析技術(shù)的發(fā)展也提高了CK-MB的診斷價(jià)值，它可更早更敏感地反應(yīng)心肌損傷。將CK-MB單克隆抗體與抗M或抗B型抗體聯(lián)合使用的免疫分析方法能夠精確地檢測(cè)出AMI早期CK-MB微小的變化，在梗塞后3小時(shí)和6小時(shí)內(nèi)分別有50%和超過80%的患者出現(xiàn)陽性。但是，CK-MB在AMI診斷參考方面仍存在兩個(gè)限制因素。首先，此標(biāo)志物在并非高度心肌特異性，在肌肉與骨髓嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)也會(huì)有所升高。實(shí)際上，骨骸肌也含有CK-MB，這樣手術(shù)和外傷也會(huì)影響CK-MB的水平。其次，更為重要的是，CK-MB的早期釋放時(shí)相也限制了它在心肌梗死疾病中的應(yīng)用。因?yàn)闀r(shí)間區(qū)段比較狹窄，CK-MB可用于再次梗塞的診斷是很明確的［1、2、3］。現(xiàn)已證明肌紅蛋白在心肌損傷的早期就被釋放進(jìn)入血液循環(huán)。但是肌紅蛋白并非心肌特異性的。最主要的假陽性源于腎功能衰竭和骨髂肌的疾病。肌紅蛋白的升高比任何其它傳統(tǒng)的項(xiàng)目都要早1個(gè)小時(shí)，并可有效地排除AMI。肌紅蛋白作為AMI標(biāo)志物的另一個(gè)缺點(diǎn)是診斷窗口期短，它在AMI發(fā)生后24小時(shí)即恢復(fù)到正常水平。肌鈣蛋白T(cTnT)和肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌肌鈣蛋白的亞單位，具有高度的特異性，在AMI發(fā)作的早期(3～6h)即可在血清中出現(xiàn)，有最寬的時(shí)間范圍：cTnT為5-10天，cTnI為4-10天，在此階段，肌鈣蛋白升高的程度比CK-MB的參考標(biāo)準(zhǔn)還要高5-10倍。因?yàn)樗鼈兊男募√禺愋愿咭约霸谡Ｈ梭w之中血清濃度很低，心肌肌鈣蛋白對(duì)微小心肌損傷有更高的敏感性，被認(rèn)為是較CK-MB更優(yōu)秀的AMI標(biāo)志物。不少研究者發(fā)現(xiàn)，cTnT在腎功能衰竭、肺部疾病、骨骼肌損傷時(shí)也升高［4、6、7］。因此，從早期診斷、靈敏度、特異性和診斷時(shí)間窗口四個(gè)方面考慮，cTnI是目前效率最高的AMI標(biāo)志物，并導(dǎo)致了一個(gè)新的診斷述語“微小心肌損傷”的出現(xiàn)。在新的標(biāo)準(zhǔn)中，生化標(biāo)志物在AMI的診斷中占有重要的地位。這主要是由于新的極為靈敏和精確的心肌損傷標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，以及膠體金技術(shù)在床旁檢驗(yàn)的應(yīng)用，使得臨床醫(yī)生可以及早發(fā)現(xiàn)早期的不典型患者，甚至于可以在家里實(shí)施床旁檢驗(yàn)，自我檢測(cè)，早期治療。而將試紙條法用于心肌梗死診斷的時(shí)間并不長(zhǎng)。1996年BoehringerMannheimCorp向市場(chǎng)投放了肌鈣蛋白T快速診斷試劑盒。1997年和1998年加拿大司派克診斷公司向市場(chǎng)投放了肌紅蛋白/肌鈣蛋白I診斷試劑盒和肌紅蛋白/CK-MB/肌鈣蛋白I診斷試劑盒［8、9、10］。這幾種試劑盒在國(guó)內(nèi)均有進(jìn)口，但由于價(jià)格較高，尚未普遍被國(guó)內(nèi)醫(yī)療部門廣泛采用。美國(guó)、加拿大等國(guó)家研制了膠體金法急性心肌梗死早期診斷試劑盒，用于檢測(cè)血液中的CK-MB和cTnI的含量。該試劑盒檢測(cè)僅需15分鐘，在發(fā)病3小時(shí)內(nèi)（約就診時(shí)）的陽性檢出率可達(dá)60%，4小時(shí)以后陽性檢出率達(dá)96-100%［8、9、10］。這些診斷試劑盒的上市對(duì)美國(guó)、加拿大地區(qū)的急性心肌梗死患者的診斷和治療起很大的推動(dòng)作用，不僅節(jié)約了大批可疑病例就診期間的監(jiān)護(hù)費(fèi)用，而且大大改善了急性心梗病人的預(yù)后。因此，盡快研制我們國(guó)家自己的急性心肌梗死診斷試劑盒具有很重要的現(xiàn)實(shí)意義。冠心病是影響人群健康的主要疾病。歐美等西方國(guó)家冠心病及其它心血管系統(tǒng)疾病于二十世紀(jì)已成為人群的第一死因。美國(guó)每年約有急性心肌梗死患者200多萬，雖然其醫(yī)療水平很發(fā)達(dá)，但仍有15-25%的病例死于心梗。在其所有疑視急性心肌梗死患者中，只有15-20%的病例最終確診為心肌梗死，其中80%以上的非心肌梗死病人也要入院進(jìn)行監(jiān)護(hù)，以排除心肌梗死的診斷。美國(guó)每年用于冠心病人的診治費(fèi)用約950億美元。在我國(guó)人群中雖然冠心病不是第一死因，但近幾年的統(tǒng)計(jì)也表明，它是僅次于腦血管病的第二殺手。全國(guó)每年大約有1500萬伴有胸痛的患者以急性心肌梗死可疑病例入院，其中只有30%左右的患者最終被確診為心肌梗死。該試劑盒不僅快速，而且操作簡(jiǎn)便，可用于包括衛(wèi)生院和鄉(xiāng)村診所的各級(jí)醫(yī)療服務(wù)部門。因此，該產(chǎn)品的研制及上市可使許多心電圖呈非典型性或變化不明顯的心?；颊呒皶r(shí)確診，不僅可改善心?；颊叩念A(yù)后，還可顯著降低可疑病例的臨床觀察給病人及有關(guān)部門造成的巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。2．產(chǎn)品的描述：2.1產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理：本試劑采用雙抗體夾心法免疫測(cè)定原理，用膠體金標(biāo)記抗人心肌肌鈣蛋白I（cTnI）單克隆抗體作為顯色劑，用配對(duì)的非標(biāo)記抗人cTnI多克隆抗體作為捕獲劑，用非標(biāo)記羊抗鼠IgG多克隆抗體作為質(zhì)控劑，以固相硝酸纖維膜作為載體，應(yīng)用紙層析式雙抗體夾心法的原理定量檢測(cè)血液中心肌肌鈣蛋白I水平。采用膠體金免疫層析定量分析儀可具體分析心肌肌鈣蛋白I的含量。2.2主要原材料來源及制備方法：2.2.1血細(xì)胞血漿分離膜來源：杭州韓感科技有限公司(印度AdvancedMicrodevicesPVT,LTD公司)質(zhì)控方法：A）血細(xì)胞血漿分離膜各層是否干燥、有無濕水。B）血細(xì)胞血漿分離膜各層是否整齊、完整。C）血細(xì)胞血漿分離膜外觀尺寸是否符合要求。2.2.2硝酸纖維素（NC）檢測(cè)膜來源：杭州韓感科技有限公司質(zhì)控方法：A）NC檢測(cè)膜內(nèi)包裝密封是否完整。B）NC檢測(cè)膜各層是否有破損。C）NC檢測(cè)膜尺寸是否符合要求。2.2.3抗人肌鈣蛋白I單克隆抗體和羊抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體來源：美國(guó)Genagates公司質(zhì)控方法：A）澄清度：在４℃條件下解凍復(fù)溫，觀察抗體溶液的澄清度，如有沉淀析出則視為不合格。B）濃度：每一樣品取適量，用Lowry’法或分光光度法測(cè)定抗體蛋白濃度。以測(cè)得的蛋白濃度與標(biāo)定濃度的誤差在10%以內(nèi)為合格，否則視為不合格。C）純度：SDS檢定，取10ug的蛋白，用考馬斯亮蘭R250染色應(yīng)只含25KD和50KD兩條蛋白帶。D）活性：a、膠體金溶液標(biāo)記單克隆抗體，標(biāo)記抗體的初始濃度為10ug/ml。b、用PBS稀釋羊抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體至1mg/ml，取已制備的空白檢測(cè)試紙條，向NC檢測(cè)膜上用微量加樣器點(diǎn)加羊抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體，向血細(xì)胞血漿分離膜遠(yuǎn)離檢測(cè)膜的部位點(diǎn)加標(biāo)記后的抗人肌鈣蛋白I單克隆抗體，37℃干燥3小時(shí)。c、取出試紙條，放入測(cè)試盒內(nèi)，向樣品槽滴加肌鈣蛋白I濃度為1.0ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)陽性樣品，以抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體點(diǎn)樣部位出現(xiàn)顯色為合格。2.2.4羊抗鼠IgG多克隆抗體來源：美國(guó)Genagates公司質(zhì)控方法：A）澄清度：在４℃條件下解凍復(fù)溫，觀察抗體溶液的澄清度，如有沉淀析出則視為不合格。B）濃度：每一樣品取適量，用Lowry’法或分光光度法測(cè)定抗體蛋白濃度。以測(cè)得的蛋白濃度與標(biāo)定濃度的誤差在10%以內(nèi)為合格，否則視為不合格。C）純度：SDS檢定，取10ug的蛋白，用考馬斯亮蘭R250染色應(yīng)只含25KD和50KD兩條蛋白帶。D）活性：a、膠體金溶液標(biāo)記抗人肌鈣蛋白單克隆抗體，標(biāo)記抗體的初始濃為10ug/ml。標(biāo)記后的抗體膠體金溶液用分光光度法測(cè)定OD530吸光值大于3.500。b、用PBS稀釋羊抗鼠IgG多克隆抗體至1mg/ml，取已制備的空白檢測(cè)試紙條，向NC檢測(cè)膜上用微量加樣器點(diǎn)加羊抗鼠IgG多克隆抗體，向血細(xì)胞血漿分離膜遠(yuǎn)離檢測(cè)膜的部位點(diǎn)加標(biāo)記后的抗人肌鈣蛋白單克隆抗體，37℃干燥3小時(shí)。c、取出試紙條，放入測(cè)試盒內(nèi)，向樣品槽滴加陰性樣品，以羊抗鼠IgG多克隆抗體點(diǎn)樣部位出現(xiàn)顯色為合格。2.3主要生產(chǎn)工藝過程:2.3.1用10%氯化金溶液和10%檸檬酸三鈉溶液反應(yīng)制備顆粒大小為40nm的膠體金。2.3.21ml膠體金中加0.2MK2CO33.5ul調(diào)膠體金PH值，標(biāo)記抗人肌鈣蛋白I單克隆抗體，用10%BSA封閉30min后離心，棄掉上清，用膠體金緩沖溶液溶解，放4℃保存?zhèn)溆谩?.3.3將抗人肌鈣蛋白I單克隆抗體金標(biāo)液均勻地噴涂在金標(biāo)墊上。烘干后密封保存?zhèn)溆谩?.3.4包被羊抗鼠IgG多克隆抗體和羊抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體在NC膜上，烘干后密封保存?zhèn)溆谩?.3.5在濕度小于30%，溫度小于28℃的環(huán)境中組裝試劑板。將吸水紙、濾血膜、金標(biāo)墊、上樣墊貼于PVC板上的相應(yīng)位置。2.3.6將試劑板切割成4.0mm寬的試劑條，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，將試劑條裝于塑料扣卡中即為試劑盒。2.3.7將干燥劑、試劑盒、塑料滴管裝入鋁箔袋中，封口。2.3.8將產(chǎn)品裝在包裝箱。2.4質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品（校準(zhǔn)品）的制備方法2.4.1陰性樣品的制備：用健康人血清作為陰性樣品。2.4.2陽性樣品的制備：使用外購(gòu)的心肌鈣蛋白I含量為50ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，用配套的稀釋液稀釋使其中心肌鈣蛋白I含量達(dá)到所需濃度。上述陽性樣品及陰性樣品分別分裝于500ul小管中在冷凍狀態(tài)（-70℃）下保存，可保存9個(gè)月。3．有關(guān)生物安全性方面的說明：本品不含毒性物質(zhì)、過敏性物質(zhì)、突變性物質(zhì)、致畸性物質(zhì)、致癌性物質(zhì)、致熱性物質(zhì)不存在微生物污染和交叉感染問題，所使用的原材料均符合《中國(guó)藥典》2010版的規(guī)定。本品所含的化學(xué)成份均符合《中國(guó)生物制品規(guī)程》2000版要求，本試劑盒中所用的主要原材料抗人肌鈣蛋白I單克隆抗體和羊抗人肌鈣蛋白I多克隆抗體都是外購(gòu)，在產(chǎn)品的運(yùn)輸、使用過程中對(duì)接觸和環(huán)境不會(huì)造成任何危害。4．產(chǎn)品主要研究結(jié)果和評(píng)價(jià)：4.1主要研究結(jié)果的總結(jié)4.1.1單克隆和多克隆抗體的配對(duì)研究抗人肌鈣蛋白Ｉ單克隆抗體和羊抗人肌鈣蛋白Ｉ多克隆抗體配對(duì)以檢測(cè)血液肌鈣蛋白Ｉ水平。我們以膠體金標(biāo)記的單克隆抗體作為指示抗體，以多克隆抗體作為捕獲抗體，制備免疫層析試紙條。4.1.2半成品的研究我們經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，確定了膠體金顆粒大小，膠體金標(biāo)記所用單克隆抗體最佳濃度，多克隆抗體印膜最佳濃度，同時(shí)對(duì)硝酸纖維素檢測(cè)膜，玻璃纖維素膠體金吸附膜，血漿血細(xì)胞分離膜以及吸水膜墊等進(jìn)行了試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)用于肌鈣蛋白Ｉ檢測(cè)的膠體金標(biāo)記顆粒以40nm為宜，待標(biāo)記單克隆抗體濃度10μg/ml即達(dá)反應(yīng)平臺(tái)，多克隆抗體印膜濃度為1mg/ml。經(jīng)過反復(fù)篩選如下材料達(dá)到了我們檢測(cè)要求：硝酸纖維素檢測(cè)膜采用杭州韓感科技有限公司(MILLIPORE公司)HFB13502；玻璃纖維素膠體金吸附膜為杭州韓感科技有限公司S08；血漿血細(xì)胞分離膜由杭州韓感科技有限公司(印度AdvancedMicrodevicesPVT,LTD公司)提供，為WRF-10070071全血分離膜，吸水膜墊、塑料扣卡、PVC底片為杭州韓感科技提供，透明不干膠帶則為市售產(chǎn)品。我們利用上述條件制備的試劑盒肌鈣蛋白I其最低檢測(cè)值為1.0ng/ml，與肌紅蛋白、CK-MB無交叉反應(yīng)，同時(shí)其測(cè)試結(jié)果也不受血液白蛋白、膽固醇和游離膽紅素等的影響。4.2對(duì)該產(chǎn)品的評(píng)價(jià)：本品采用肌鈣蛋白Ｉ單克隆抗體，肌鈣白Ｉ多克隆抗體，應(yīng)用雙抗體夾心一步法原理，以膠體金作為指示標(biāo)記，交聯(lián)肌鈣蛋白Ｉ單克隆抗體，肌鈣蛋白Ｉ多克隆抗體作為捕獲抗體，分別與血液中的肌鈣蛋白Ｉ結(jié)合并顯色，從而定量檢測(cè)血液中肌鈣蛋白Ｉ的水平。肌鈣蛋白Ｉ是重要的心肌組織損傷特異性標(biāo)志物，臨床廣泛用于急性心肌梗死及其它心肌損傷性疾病的輔助診斷，因此，該試劑盒通過定量檢測(cè)病人血液中肌鈣蛋白Ｉ濃度是否升高，可為臨床醫(yī)生提供一重要的急性心肌梗死輔助診斷手段。4.3與同類產(chǎn)品的比較研究：南京基蛋生物科技有限公司是國(guó)內(nèi)較早研制該產(chǎn)品，并在國(guó)內(nèi)有注冊(cè)產(chǎn)品文號(hào)的公司[蘇食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2010第2400743號(hào)（更2012-202）]。該產(chǎn)品以其可靠的質(zhì)量臨床廣泛用于急性心肌梗死的輔助診斷。我們以該試劑盒作為參比品，進(jìn)行了產(chǎn)品質(zhì)量的對(duì)比研究。結(jié)果在我們的試劑盒加樣后15分鐘時(shí)和該公司的試劑盒加樣后15分鐘內(nèi)（說明書要求），其檢測(cè)結(jié)果一致，其最低檢出量和檢測(cè)特異性等也均一致。在本次臨床實(shí)驗(yàn)工作中與其做對(duì)照品進(jìn)行比較（見臨床報(bào)告）基本一致。4.4產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究：按照國(guó)家藥品監(jiān)督管理局體外診斷用品申報(bào)的有關(guān)規(guī)定，我們對(duì)我們的試劑盒進(jìn)行了37℃加速條件的試驗(yàn)。結(jié)果表明：本品在37℃下存放20天的檢測(cè)結(jié)果也與0天的結(jié)果一致。4.5產(chǎn)品CUTOFF（最低檢出量）值的建立：以已獲得藥監(jiān)部門批準(zhǔn)上市并獲得了市場(chǎng)的廣泛認(rèn)可的南京基蛋生物科技有限公司建立的最低檢出量作為本產(chǎn)品的最低檢出量建立的依據(jù)，正常參考值上限取第99百分位點(diǎn)為1.0ng/ml；＜1.0ng/ml為正常，≥1.0ng/ml為升高。使用膠體金免疫層析定量分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，本試劑盒檢測(cè)范圍為1~50ng/ml。當(dāng)樣本中cTnI的含量高于50ng/ml時(shí)，測(cè)定結(jié)果“>50ng/ml”，低于1.0ng/ml時(shí)，測(cè)定結(jié)果“＜1.0ng/ml”。5．國(guó)內(nèi)有關(guān)該產(chǎn)品的專利檢索情況經(jīng)中國(guó)專利檢索，未發(fā)現(xiàn)有相同的專利在中國(guó)批準(zhǔn)或申報(bào)。檢出5篇相關(guān)專利文獻(xiàn)，文獻(xiàn)CN102841208A，題為“快速檢測(cè)肌鈣蛋白I的膠體金試紙及其制備方法”，已于2012.12.26公開，該文獻(xiàn)采用BSA\PEG單克隆抗體增加其顯色，檢測(cè)心肌肌鈣蛋白Ｉ的含量。而本項(xiàng)目采用雙抗體夾心，膠體金一步顯色檢測(cè)肌鈣蛋白Ｉ含量，因此，該專利文獻(xiàn)所述權(quán)利要求不影響本技術(shù)的新穎性。文獻(xiàn)CN102520193A，題為“定量檢測(cè)人心肌肌鈣蛋白I的熒光免疫層析方法及其試劑盒”，于2012.06.27公開，該專利文獻(xiàn)利用熒光免疫層析方法檢測(cè)樣品肌鈣蛋白I的水平，本技術(shù)利用膠體金一步法檢測(cè)心肌肌鈣蛋白Ｉ水平。因此，該文獻(xiàn)不影響本技術(shù)的新穎性。文獻(xiàn)CN102426246A，題為“人肌鈣蛋白I(TroponinI)定量測(cè)定試劑盒及其檢測(cè)方法”，于2012.04.25公開，該專利的主要特征為化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合用于肌鈣蛋白Ｉ檢測(cè)。同樣該文獻(xiàn)不影響本技術(shù)的新穎性。文獻(xiàn)CN102192986A，題為“心肌肌鈣蛋白I的檢測(cè)試劑及其制備方法和用途”于2011.09.21公開。該專利文獻(xiàn)闡述特點(diǎn)是該檢測(cè)試劑為有機(jī)硅包裹的納米金微粒用于免疫金標(biāo)檢測(cè)的試劑盒，因此，該文獻(xiàn)不影響本技術(shù)的新穎性。文獻(xiàn)CN101059519，題為“心肌肌鈣蛋白I納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條及其制備方法”，該專利文獻(xiàn)采用3株可互相配對(duì)形成夾心的抗人cTnI單克隆抗體，其中2株作為捕捉抗體，1株作為顯色抗體；用15～25nm納米金顆粒標(biāo)記顯色抗體進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，本技術(shù)采用雙抗體夾心膠體金顯色法膠體金60nm，因此，該文獻(xiàn)不影響本技術(shù)的新穎性。參考文獻(xiàn)1、WuAHB,McCordRG.NewBiochemicalMarkerforHeartDisease.Totowa:HumanPress,1998,281-294.2、WongSS.Strategicutilizationofcardiacmarkersforthediagnosisofacutemyocardialinfarction.AnnalsofClinicalandLaboratoryScience.1996;26:301—312.3、WuAHB,FengYJandContoisJH,etal.Comparisonofmyoglobin,creatinekinase-MB,andcardiactroponinIfordiagnosisofacutemyocardialinfarction.AnnalsofClinicalandLaboratoryScience.1996;26:291—300.4、ImmerFF,StockerFP,SeilerAM,etal.Comparisonoftroponin-Iandtroponin-Tafterpediatriccardiovascularoperation.AnnThoracSurg,1998,66:2073-2077.5、WuAHB.Biochemicalmarkersofcardiacdamage：fromtraditionalenzymestocardiac-specificproteins.ScandJClinLabInvest,1999,59(Suppl230)：74～826、Mayna