藥物半數(shù)致死量(有效量)測(cè)定-圖文

藥物半數(shù)致死量(有效量)測(cè)定_圖文.ppt【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繎?yīng)用隨機(jī)、重復(fù)、對(duì)照的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，進(jìn)行設(shè)計(jì)及測(cè)定藥物的質(zhì)反應(yīng)的量效關(guān)系。掌握測(cè)定藥物半數(shù)有效量（ＥＤ50）和/或半數(shù)致死量（ＬＤ50）的方法、原理、實(shí)驗(yàn)步驟、計(jì)算過(guò)程及意義。測(cè)出藥物的ＥＤ50或ＬＤ50及相關(guān)參數(shù)，認(rèn)識(shí)生物個(gè)體差異及評(píng)價(jià)急性毒性大小的方法?！緦?shí)驗(yàn)要求】1、掌握小白鼠半數(shù)致死量或半數(shù)有效量測(cè)定的基本方法。2、熟悉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用的隨機(jī)分組和實(shí)驗(yàn)方法。3、掌握Bliss法等半數(shù)致死量或半數(shù)有效量的計(jì)算方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】半數(shù)致死量（50％Lethaldose，簡(jiǎn)寫(xiě)為ＬＤ50）是指能夠?qū)е?0%實(shí)驗(yàn)對(duì)象死亡的藥物劑量。戊巴比妥鈉為鎮(zhèn)靜催眠藥，隨著劑量加大，相繼出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、麻醉、死亡。無(wú)效量最小有效量常用量最小中毒量中毒量致死量量效關(guān)系與相關(guān)概念的示意圖死亡致死量劑量效應(yīng)無(wú)效量無(wú)效最小有效量治療作用常用量安全范圍極量毒性作用最小中毒量中毒量質(zhì)反應(yīng)的量效曲線(xiàn)睡眠死亡反應(yīng)百分率020408060100劑量LD50ED50質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線(xiàn)思考：何意？何用？1.LD50/ED50的本質(zhì)2.治療指數(shù)（TI）=LD50/ED50Fig.2-3Thefrequencycurveandcumulativefrequencycurveofadrugactioninaquantal-effectexperiment.質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線(xiàn)曲線(xiàn)中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)有50％出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果（反應(yīng)）所需的劑量，如以死亡為指標(biāo)稱(chēng)為半數(shù)致死量，如以某種效應(yīng)的有或無(wú)則為半數(shù)有效量（50％Effectivedose，ＥＤ50）表示。ＬＤ50/ＥＤ50為半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值（倍數(shù)）稱(chēng)為治療指數(shù)（therapeuticindex，TI）。治療指數(shù)與安全范圍一般而言，治療指數(shù)(TI)是表示藥物安全性的指標(biāo)。該數(shù)值越大，表明有效劑量與致死劑量(或中毒劑量)間距離愈大，愈安全，但只適用于治療效應(yīng)和致死效應(yīng)的量效曲線(xiàn)相互平行的藥物，對(duì)于兩種量效曲線(xiàn)不平行(斜率不同)的藥物，還應(yīng)參考安全范圍（marginofsafety，MS），即ED95與LD5之間的距離或安全指數(shù)SI(SI=LD5／ED95)來(lái)評(píng)價(jià)藥物的安全性。質(zhì)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，以對(duì)數(shù)劑量為橫坐標(biāo)、反應(yīng)百分率為縱坐標(biāo)繪圖，形成一條對(duì)稱(chēng)的“S”形曲線(xiàn)。

半數(shù)有效量（ED50）：50％的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有效時(shí)對(duì)應(yīng)的劑量。

半數(shù)致死量（LD50）：50％的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡時(shí)對(duì)應(yīng)的劑量。藥物安全性的評(píng)價(jià)治療指數(shù)（TI）=LD50/ED50安全系數(shù)（SF）＝LD5/ED95可靠安全系數(shù)（CSF）＝LD1/ED99三者數(shù)值大，說(shuō)明藥物安全性好。質(zhì)反應(yīng)量效關(guān)系曲線(xiàn)與

藥物安全性的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的觀(guān)察指標(biāo)：ＬＤ50：規(guī)定的觀(guān)察時(shí)間內(nèi)記錄動(dòng)物的死亡數(shù)為指標(biāo)，記錄并統(tǒng)計(jì)動(dòng)物的死亡率。ＥＤ50：以翻正反射消失作為判斷動(dòng)物睡眠的指標(biāo)。把受試小白鼠輕輕地置于仰臥位，如果在半分鐘內(nèi)不能翻正，即認(rèn)為小白鼠處于睡眠狀態(tài)。記錄并統(tǒng)計(jì)動(dòng)物睡眠發(fā)生率?！緦?shí)驗(yàn)試劑與器材】小鼠罩重量稱(chēng)注射器（1.0ml）及針頭戊巴比妥鈉苦味酸（標(biāo)記動(dòng)物號(hào)用）【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】預(yù)試：目的是找到0％（Ｄmin）和100％（Ｄmax）死亡的大致劑量范圍。給藥量：0.2ml/10g體重。正式實(shí)驗(yàn)：在此劑量范圍內(nèi)安排５～６個(gè)對(duì)數(shù)劑量實(shí)驗(yàn)組，便于用對(duì)數(shù)劑量對(duì)死亡數(shù)百分率作圖和計(jì)算數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)備有：50,40,32,25.6,20.5,16.4五個(gè)劑量組(組間公比=0.8)；昆明小鼠120只雌雄各半。每個(gè)同學(xué)做4～5個(gè)連續(xù)的濃度，每濃度一只小鼠。實(shí)施：規(guī)范操作，觀(guān)察計(jì)時(shí)；分工合作，統(tǒng)一計(jì)算分組及給藥取小鼠50只（18～22克），雌雄各半，不同性別動(dòng)物按體重隨機(jī)分成五組。每組各動(dòng)物稱(chēng)重，標(biāo)記后分別按設(shè)計(jì)的容積和濃度腹腔注射給藥。ＬＤ50（或ＥＤ50）測(cè)定時(shí)是否要設(shè)對(duì)照組，應(yīng)視藥物性質(zhì)等情況而定。必須注意：正式實(shí)驗(yàn)如單人操作時(shí)宜從濃度偏高的劑量組開(kāi)始給藥！起效快和對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)有重要提示作用。思考！觀(guān)察與記錄記錄觀(guān)察時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的癥狀、死亡（或有效）時(shí)間。整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)記錄的事項(xiàng)：日期、藥物名稱(chēng)、批號(hào)及制藥單位、配藥的溶劑、藥液濃度、給藥途徑、給藥容積及給藥劑量、動(dòng)物名稱(chēng)、性別及體重、實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫、給藥時(shí)間、中毒癥狀及出現(xiàn)的時(shí)間、死亡表現(xiàn)及時(shí)間、各組死亡率、計(jì)算所得的ＬＤ50（或ＥＤ50）。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果40mg/kg組：(0.2ml/10g)腹腔注射給藥5～15分鐘內(nèi)，出現(xiàn)翻正反射消失(睡眠)；劑量實(shí)驗(yàn)鼠數(shù)睡眠鼠數(shù)反應(yīng)百分率ED50（mg/kg）（％）（mg/kg）50104010321025.61021.810不同劑量戊巴比妥鈉對(duì)小鼠睡眠的影響實(shí)驗(yàn)分組、記錄和統(tǒng)計(jì)如增加記錄起效和維持時(shí)間，翻正反射消失的深度可獲得對(duì)量效關(guān)系和個(gè)體差異的更深刻認(rèn)識(shí)。Bliss法計(jì)算軟件界面Bliss法運(yùn)算圖形結(jié)果輸出Bliss法運(yùn)算數(shù)據(jù)結(jié)果輸出【注意事項(xiàng)】1.本實(shí)驗(yàn)為定量藥物效價(jià)測(cè)定，要求較高的精確性，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要求實(shí)驗(yàn)者做到盡可能的精確程度。2.為了減少誤差，需嚴(yán)格控制除藥物劑量外的所有非處理因素，如最好由一人給藥。3.動(dòng)物種類(lèi)、體重范圍、給藥途徑、實(shí)驗(yàn)觀(guān)察時(shí)間等因素對(duì)ＬＤ50及ＥＤ50的測(cè)定結(jié)果都有影響，在報(bào)告結(jié)果時(shí)都應(yīng)加以注明。

國(guó)際對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的3Rs原則：

即取代(Replacement)、精致(Refinement)和簡(jiǎn)約(Reduction)，要求生命科學(xué)研究應(yīng)采取其他手段代替動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法、減少動(dòng)物數(shù)量和痛苦，以符合道德方面的考量。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)三大原則：隨機(jī)、重復(fù)、對(duì)照均衡隨機(jī)法分組：先按易控制的因素（性別、年齡、體重等）均衡分檔。然后在每一檔隨機(jī)取出等量的動(dòng)物分配到各組，使難控制的因素（活潑程度、饑飽、疲勞程度等）得到隨機(jī)安排?！咀⒁馐马?xiàng)】作業(yè)：實(shí)驗(yàn)測(cè)定的戊巴比妥鈉ED50以及上述例子LD50有關(guān)數(shù)據(jù)求出：治療指數(shù)TI＝LD50/ED50＝安全指