高效液相色譜常見(jiàn)故障排除及維護(hù)保養(yǎng)

關(guān)于高效液相色譜常見(jiàn)故障排除及維護(hù)保養(yǎng)

一、高效液相色譜儀器出現(xiàn)故障可以從多方面入手1.從部件的運(yùn)轉(zhuǎn)情況推測(cè)，如壓力、流速的變化2.從色譜圖的異常情況推測(cè)，如出峰時(shí)間、峰形3.從數(shù)據(jù)結(jié)果中分析第2頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天（一）、從壓力變化判斷 1.壓力無(wú)現(xiàn)象判斷故障排除面版燈不亮電源不通檢查電源接頭松脫擰緊接頭泵頭漏液接口太松擰緊泵頭螺絲泵密封墊磨損更換密封墊第3頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除泵不送溶劑泵頭有氣泡排氣泡，溶劑需脫氣使用的溶劑黏性太高換低黏性溶劑溶劑貯液器中過(guò)濾器臟清洗貯液瓶、過(guò)濾器排空閥打開(kāi)關(guān)閉排空閥控制器設(shè)定不正確設(shè)置正確流動(dòng)相不夠補(bǔ)足流動(dòng)相第4頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除壓力值高泵流速設(shè)定太高設(shè)定正確的流速流動(dòng)相使用不恰當(dāng)使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相緩沖結(jié)晶鹽沉淀沖洗樣品與流動(dòng)相不互溶稀釋或改變流動(dòng)相柱溫太低升高溫度色譜柱性能下降換柱2.壓力高第5頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除壓力值高溶劑貯液器中過(guò)濾器臟清洗鏈接管路阻塞沖洗，必要時(shí)更換進(jìn)樣閥阻塞沖洗進(jìn)樣器第6頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除壓力值低泵流速設(shè)定太低設(shè)定正確的流速色譜柱選擇不恰當(dāng)更換恰當(dāng)?shù)纳V柱柱溫過(guò)高降低柱溫系統(tǒng)漏液檢查漏液位置并維修流動(dòng)相使用不當(dāng)改變流動(dòng)相3.壓力低第7頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.壓力不穩(wěn)現(xiàn)象判斷故障排除壓力變化重現(xiàn)性不好采用梯度所引起的壓力是正常泵內(nèi)有氣泡溶劑脫氣不適當(dāng)排氣泡，溶劑需脫氣壓力波動(dòng)泵密封墊損壞更換密封墊溶劑混合器故障清洗或更換混合器漏液連接口太松擰緊接口管路損壞更換第8頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.峰前沿現(xiàn)象判斷故障排除峰前沿柱性能下降更換色譜柱保護(hù)柱失效換柱芯進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高降低進(jìn)樣體積或降低樣品濃度（二）、從色譜圖的異常情況推測(cè)第9頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.峰拖尾現(xiàn)象判斷故障排除峰拖尾柱性能下降更換色譜柱保護(hù)柱失效換柱芯色譜柱或保護(hù)柱被污染清洗柱或保護(hù)柱，必要時(shí)更換色譜柱選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱流動(dòng)相選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相第10頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.峰變寬現(xiàn)象判斷故障排除峰變寬柱性能下降更換色譜柱保護(hù)柱失效換柱芯色譜柱或保護(hù)柱被污染清洗柱或保護(hù)柱，必要時(shí)更換色譜柱選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱流動(dòng)相選擇不當(dāng)選擇恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相流動(dòng)相流速太低調(diào)節(jié)流速第11頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除峰變寬緩沖液濃度太低增加濃度系統(tǒng)沒(méi)到達(dá)平衡使系統(tǒng)到達(dá)平衡進(jìn)樣器問(wèn)題檢查進(jìn)樣器環(huán)境溫度變化使用柱溫箱漏夜檢查漏夜的位置并維修出現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰選擇其它色譜條件以改善分離效果檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大使用較小的時(shí)間常數(shù)第12頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.峰分叉現(xiàn)象判斷故障排除峰分叉柱性能下降更換色普柱保護(hù)柱失效換柱芯色譜柱或保護(hù)柱被污染清洗柱或保護(hù)柱，必要時(shí)更換進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高降低進(jìn)樣體積或降低樣品濃度樣品溶劑不溶流動(dòng)相改變?nèi)軇┗虿捎昧鲃?dòng)相溶解樣品第13頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天5.無(wú)峰現(xiàn)象判斷故障排除無(wú)峰檢測(cè)器參數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤設(shè)置正確的檢測(cè)器參數(shù)樣品降解檢查樣品配制過(guò)程，更換樣品自動(dòng)進(jìn)樣器故障檢查進(jìn)樣器無(wú)樣品加樣品檢測(cè)器與數(shù)據(jù)處理裝置鏈接故障檢查并正確鏈接第14頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天6.負(fù)峰現(xiàn)象判斷故障排除出現(xiàn)所有負(fù)峰連接數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)信號(hào)線(xiàn)接反正確連接記錄儀或檢測(cè)器信號(hào)極性相反改變極性設(shè)置出現(xiàn)一個(gè)或幾個(gè)負(fù)峰離子對(duì)分離體系對(duì)峰的影響在流動(dòng)相中溶解樣品使用的流動(dòng)相吸收高使用流動(dòng)相稀釋樣品自動(dòng)進(jìn)樣器注射進(jìn)空氣清洗自動(dòng)進(jìn)樣器第15頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天

7.鬼峰現(xiàn)象判斷故障排除色譜圖出現(xiàn)鬼峰樣品前處理時(shí)產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照、檢查樣品處理過(guò)程，換新樣品前一次進(jìn)樣的洗脫物增加分析時(shí)間或梯度洗脫、提高流速、如問(wèn)題仍存在，兩次進(jìn)樣間用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱注射器臟清洗注射器、沖洗進(jìn)樣口第16頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除色譜圖出現(xiàn)鬼峰流動(dòng)相被污染清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過(guò)濾器、使用HPLC級(jí)試劑柱被污染清洗柱或更換柱六通閥污染清洗六通閥檢測(cè)器污染清晰檢測(cè)器管路污染沖洗流動(dòng)相中含有穩(wěn)定劑或穩(wěn)定劑變化使用無(wú)防腐溶劑第17頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天8.保留時(shí)間變化現(xiàn)象判斷故障排除保留時(shí)間不重復(fù)系統(tǒng)不問(wèn)或未達(dá)到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時(shí)間使系統(tǒng)平衡室溫波動(dòng)大使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對(duì)流小的環(huán)境柱被污染沖洗柱或更換柱溶劑配比不合適調(diào)節(jié)溶劑配比進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高減小進(jìn)樣體積第18頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天9.保留時(shí)間不斷變化現(xiàn)象判斷故障排除保留時(shí)間不斷變化流速變化重新設(shè)定流速,檢查泵是否正常工作系統(tǒng)沒(méi)有達(dá)到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時(shí)間使系統(tǒng)平衡柱被污染沖洗柱或更換柱流動(dòng)相被污染清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過(guò)濾器、使用HPLC級(jí)試劑系統(tǒng)泄漏檢查并進(jìn)行維修第19頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除保留時(shí)間不斷變化流動(dòng)相脫氣不夠充分清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過(guò)濾器、使用HPLC級(jí)試劑室溫變化使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對(duì)流小的環(huán)境柱恒溫箱設(shè)置有誤設(shè)置正確的溫度第20頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天10.基線(xiàn)漂移現(xiàn)象判斷故障排除基線(xiàn)漂移系統(tǒng)不穩(wěn)或沒(méi)有達(dá)到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時(shí)間使系統(tǒng)平衡室溫不穩(wěn)使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對(duì)流小的環(huán)境流動(dòng)相污染或分解清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過(guò)濾器、使用HPLC級(jí)試劑流動(dòng)相脫氣不充分脫氣重新平衡系統(tǒng)第21頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除基線(xiàn)漂移流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化更改配比或流速柱被污染沖洗柱或更換柱固定相流失為說(shuō)明問(wèn)題存在，用一段連接管路代替色譜柱，通流動(dòng)相檢測(cè)基線(xiàn)檢測(cè)池被污染或有氣體用甲醇或其他強(qiáng)極性的溶劑沖洗流通池第22頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除基線(xiàn)漂移測(cè)定的波長(zhǎng)選擇有誤使用分光光度計(jì)說(shuō)明背景吸收，如背景值高，說(shuō)明流動(dòng)相含有紫外吸收化合物導(dǎo)致基線(xiàn)漂移。使用的流動(dòng)相應(yīng)在紫外截止波長(zhǎng)以外，或更換溶劑系統(tǒng)泄漏檢查并進(jìn)行維修樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱第23頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除無(wú)規(guī)則基線(xiàn)噪音系統(tǒng)不穩(wěn)或沒(méi)有達(dá)到平衡分析之前應(yīng)有足夠的時(shí)間使系統(tǒng)平衡系統(tǒng)泄漏檢查并進(jìn)行維修流動(dòng)相污染或分解清洗溶劑貯液瓶、清洗溶劑入口過(guò)濾器、使用HPLC級(jí)試劑柱被污染沖洗柱或更換柱色譜柱填料流失或阻塞更換色譜柱11.無(wú)規(guī)則基線(xiàn)噪音第24頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除無(wú)規(guī)則基線(xiàn)噪音流動(dòng)相混合不均或混合器工作不正常維修或更換混合器檢測(cè)池被污染或用甲醇或其他強(qiáng)極性的溶劑沖洗流通池系統(tǒng)內(nèi)有氣泡用強(qiáng)極性的溶劑清洗系統(tǒng)檢測(cè)器內(nèi)有氣泡清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器檢測(cè)器燈能量不足更換燈第25頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天12.規(guī)則基線(xiàn)噪音現(xiàn)象判斷故障排除規(guī)則基線(xiàn)噪音流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵內(nèi)有氣泡流動(dòng)相脫氣，沖洗系統(tǒng)除去檢測(cè)器或泵內(nèi)的空氣室溫不穩(wěn)穩(wěn)定環(huán)境溫度。使用柱溫箱、將系統(tǒng)置于恒溫、空氣對(duì)流小的環(huán)境流動(dòng)相回收使用除非特殊需要不使用回收溶劑流動(dòng)相混合不完全使流動(dòng)相混合均勻或使用低黏度的溶劑第26頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除規(guī)則基線(xiàn)噪音泵振動(dòng)在系統(tǒng)中假如脈沖阻尼器泵入口管路松或阻塞檢查泵入口管路在同一水平上有其他設(shè)備關(guān)掉儀器，檢查干擾是否來(lái)自于外部第27頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）、從數(shù)據(jù)結(jié)果中分析1.定量結(jié)果現(xiàn)象判斷故障排除精密度降低樣品預(yù)處理時(shí)樣品降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照、檢查樣品處理過(guò)程，換新樣品保留時(shí)間改變，峰形不正常見(jiàn)“峰形不正?！钡墓收吓懦椒z測(cè)器響應(yīng)故障檢查檢測(cè)器第28頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除精密度降低峰積分不正確重新設(shè)置參數(shù)進(jìn)樣問(wèn)題（對(duì)外標(biāo)法）隨手動(dòng)進(jìn)樣器的類(lèi)型不同而異，有下列情況：（1）如使用全部定量環(huán)的手動(dòng)進(jìn)樣器，在進(jìn)樣前需在“取樣”狀態(tài)下清洗三次；（2）如使用部分定量環(huán)的手動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量需少于定量喚體積的50%第29頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除精密度降低進(jìn)樣問(wèn)題（對(duì)外標(biāo)法）（3）如使用注射器的手動(dòng)進(jìn)樣器，需確保進(jìn)樣操作重復(fù)；（4）如使用自動(dòng)進(jìn)樣器需確保正確的進(jìn)樣體積，注射器不含空氣，樣品瓶有足夠的樣品，系統(tǒng)不泄漏（5）如手動(dòng)進(jìn)樣器、自動(dòng)進(jìn)樣器都使用，應(yīng)確保系統(tǒng)的平衡第30頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除準(zhǔn)確度降低峰積分不正確見(jiàn)“精密度降低”的故障排除方法進(jìn)樣問(wèn)題見(jiàn)“精密度降低”的故障排除方法樣品預(yù)處理時(shí)樣品降解或混入雜質(zhì)用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照、檢查樣品處理過(guò)程，換新樣品樣品蒸發(fā)樣品密封保存在適當(dāng)?shù)臏囟认碌?1頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除準(zhǔn)確度降低樣品前處理不當(dāng)檢查樣品的處理過(guò)程內(nèi)標(biāo)物配置不當(dāng)配置新的內(nèi)標(biāo)物第32頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天現(xiàn)象判斷故障排除峰不能分辨改變保留時(shí)間見(jiàn)“保留時(shí)間改變”的故障排除數(shù)據(jù)處理裝置的參數(shù)不正確適當(dāng)輸入?yún)?shù)，進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣，提高準(zhǔn)確度無(wú)峰改變保留時(shí)間故障排除方法數(shù)據(jù)處理裝置的參數(shù)不正確重新適當(dāng)輸入?yún)?shù)，進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣，提高準(zhǔn)確度鬼峰見(jiàn)“鬼峰”可能的原因見(jiàn)“鬼峰”的故障排除方法2.定性結(jié)果第33頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、高效液相色譜儀器日常維護(hù)第34頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天貯液器

清潔是保持流動(dòng)相貯液器正常使用的關(guān)鍵，必須使用HPLC級(jí)或相當(dāng)于該級(jí)別的流動(dòng)相，并要先經(jīng)0.45μm薄膜過(guò)濾。改變流動(dòng)相時(shí)應(yīng)防止交叉污染，陳舊的流動(dòng)相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄，防止生長(zhǎng)微生物和組分改變。貯器內(nèi)壁定期清洗，里面的附件要經(jīng)常更換。

第35頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天泵

泵的密封圈是最易磨損的部件，密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障。有人建議3個(gè)月?lián)Q一次墊圈。但也不能一概而論，要看墊圈的材料質(zhì)量，使用壓力大小、保養(yǎng)以及緩沖液的情況而定。第36頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天采取下列措施可以延長(zhǎng)墊圈的壽命：

①每天要把泵中的緩沖液體洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無(wú)緩沖液的溶液或有機(jī)溶劑中；

②用HPLC級(jí)試劑；

③使用過(guò)濾濾芯，以注意防止因泵阻塞

造成壓力過(guò)高而損壞柱塞桿或燒壞電機(jī)。第37頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天泵的壓力不穩(wěn)定

在安裝調(diào)試時(shí)以及在日常使用過(guò)程中，若出現(xiàn)壓力不穩(wěn)的現(xiàn)象。原因有幾點(diǎn)：

1、管路里有氣泡，建議由流動(dòng)相多走些時(shí)間。或打開(kāi)排空閥，用配件里的針筒多抽幾下。還有就是關(guān)緊排空閥，堵住檢測(cè)器上的背壓管，使流通池的壓力增加，趕出氣泡。

第38頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天2、輸入單向閥失效所致，這也是經(jīng)常遇見(jiàn)的。首先如何判斷輸入單向閥失效。判斷步驟為：

如果是雙泵梯度分析系統(tǒng)，故泵壓力不穩(wěn)必然是其中一臺(tái)泵壓力不穩(wěn)所致，須逐個(gè)分析。

第39頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天a、在不開(kāi)UV檢測(cè)器，工作站的前提下，將其中一臺(tái)泵接上蒸餾水作為流動(dòng)相。

b、打開(kāi)排空閥，用針筒抽出些流動(dòng)相，確認(rèn)泵中已有該流動(dòng)相，然后將針筒內(nèi)的液體排出，并重新接在排空閥上。

c、啟動(dòng)沖洗功能。流量3ml/min，時(shí)間5min（注意：此時(shí)排空閥仍要打開(kāi)，否則將沖壞色譜柱）

d、

沖洗完畢后，查看針筒內(nèi)流動(dòng)相體積是否為15ml（3×5=15），若正確，則說(shuō)明該泵在低壓情況下無(wú)故障；若不正確，則說(shuō)明該泵中某