骨髓細胞染色體制備與觀察

關(guān)于骨髓細胞染色體制備與觀察骨髓細胞染色體制備與觀察實驗目的：掌握制備方法，計算分裂中期染色體數(shù)目，觀察端著絲點的形態(tài)特點．實驗原理：小鼠骨髓細胞中的造血干細胞，具有高度的分裂能力，可得到較多的細胞中期的分裂相．第2頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察

實驗用品：材料：小白鼠（2n=42）．用品：顯微鏡、冰箱、恒溫箱、恒溫水浴鍋、離心機、注射器、解剖剪、鑷子、移液器、載玻片、燒杯等。藥品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)檸檬酸鈉溶液、0.07M氯化鉀溶液、（或0.35%氯化鉀溶液）、蒸餾水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。第3頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察實驗步驟：預處理取股骨沖洗骨髓離心低滲固定離心滴片染色觀察第4頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察1、取健康小白鼠（約65-90天齡），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，劑量為4ml/Kg動物體重。2、2-3小時后，用損傷脊椎法處死小白鼠，取出股骨，把肌肉刮凈，剪下，用2%檸蒙酸鈉溶液洗凈血污及殘渣。3、剪去關(guān)節(jié)頭，用3-5ml2%檸檬酸鈉溶液沖洗股骨斷面至粉白色，制備了骨髓細胞懸浮液。第5頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察4、將骨髓細胞懸液，1000rpm離心10分鐘。5、吸去上清液，加入0.075M氯化鉀溶液5ml，立即將細胞團吹打均勻，置37℃水浴25-30分鐘。6、加入卡諾氏固定液5-6滴，攪拌均勻進行預固定10分。7、再以1000rpm離心10分鐘。第6頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察8、棄上清液，僅留約0.2-0.3ml的細胞團與部分上清液，吹均勻制成細胞懸浮液涂片觀察。注意：如果細胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色體進一步分散。9、取預先冰凍的載玻片，滴2-3滴細胞懸浮液于其上，立即吹氣均勻打散、過火、置室溫中自然干燥。第7頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察10、用Giemsa染液,染色15-20分鐘，自來水沖洗，空氣干燥。11、在低倍鏡下觀察中期分裂相細胞，計算染色體的數(shù)目，以確定其細胞2n的染色體數(shù)目。第8頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察繪圖：繪制一個圖像清晰、形態(tài)典型的小白鼠染色體組形圖。思考：思考實驗中應注意的事項，積累經(jīng)驗。第9頁,共11頁，2024年2月25日，星期天骨髓細胞染色體制備與觀察第10頁