《細(xì)胞工程的復(fù)習(xí)》課件

知識(shí)回顧（1）飼料加工過(guò)程溫度較高，要求植酸酶具有較好的高溫穩(wěn)定性。利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)其進(jìn)行改造時(shí)，首先必須了解植酸酶的

，然后改變植酸酶的

，從而得到新的植酸酶。（2）培育轉(zhuǎn)植酸梅基因的大豆，可提高其作為飼料原料磷的利用率。將植酸酶基因?qū)氪蠖辜?xì)胞常用的方法是

。請(qǐng)簡(jiǎn)述獲得轉(zhuǎn)基因植株的完整過(guò)程。空間結(jié)構(gòu)

氨基酸序列

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

外源植酸酶基因→農(nóng)桿菌→大豆細(xì)胞→大豆植株再生→鑒定1精選課件ppt知識(shí)回顧（1）飼料加工過(guò)程溫度較高，要求植酸酶具有較好的高溫（3）為了提高豬對(duì)飼料中磷的利用率，科學(xué)家將帶有植酸酶基因的重組質(zhì)粒通過(guò)

轉(zhuǎn)入豬的受精卵中。該受精卵培養(yǎng)至一定時(shí)期可通過(guò)

方法，從而一次得到多個(gè)轉(zhuǎn)基因豬個(gè)體。（4）若這些轉(zhuǎn)基因因動(dòng)、植物進(jìn)入生態(tài)環(huán)境中，對(duì)生態(tài)環(huán)境有何影響？

顯微注射法

胚胎分割

減少環(huán)境中磷的污染，但基因可能擴(kuò)散到環(huán)境中2精選課件ppt（3）為了提高豬對(duì)飼料中磷的利用率，科學(xué)家將帶有植酸酶基因的

轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四種限制酶切割位點(diǎn)。請(qǐng)回答：

（1）構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體A時(shí)，應(yīng)選用限制酶

，對(duì)

進(jìn)行切割。

PstⅠ、EcoRⅠ含抗病基因的DNA、質(zhì)粒3精選課件ppt轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過(guò)程如圖所示。質(zhì)粒上有PstⅠ、Sma（2）培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用該培養(yǎng)篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A中有

，作為標(biāo)記基因。（3）香蕉組織細(xì)胞具有

，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過(guò)程中香蕉組織細(xì)胞的

?？箍敲顾鼗蛉苄悦摲只⒃俜只?精選課件ppt（2）培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長(zhǎng)，欲利用細(xì)胞工程的復(fù)習(xí)專題25精選課件ppt細(xì)胞工程的復(fù)習(xí)專題25精選課件ppt細(xì)胞工程1、概念:應(yīng)用的原理和方法研究的水平研究的目的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)細(xì)胞整體水平或細(xì)胞器水平按照人們的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品2、分類植物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程6精選課件ppt細(xì)胞工程1、概念:應(yīng)用的原理和方法細(xì)胞生物學(xué)和分所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞工程

7精選課件ppt所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段植物組(離體的植物

器官、組織或細(xì)胞)脫分化再分化愈傷組織根、芽（胚狀體）植物體培養(yǎng)條件：離體、含有全部營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無(wú)菌環(huán)境、適合的PH、適合的光照等外植體舉例：花藥離體培養(yǎng)基因工程培育的抗棉鈴蟲(chóng)的棉花植株細(xì)胞工程中培育的“番茄-馬鈴薯”雜種植株1、植物組織培養(yǎng)8精選課件ppt(離體的植物

器官、組織或細(xì)胞)脫分化再分化愈傷組織根、芽植植物A細(xì)胞植物B細(xì)胞去壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合融合細(xì)胞再生壁雜種細(xì)胞脫分化去壁的常用方法：酶解法（纖維素酶、果膠酶等）原生質(zhì)體融合方法：物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）融合成功的標(biāo)志人工誘導(dǎo)篩選愈傷組織雜種植株再分化2、植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程9精選課件ppt植物A細(xì)胞植物B細(xì)胞去壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合融合（1）植物繁殖的新途徑1）微型繁殖（快速繁殖）2）作物脫毒3）神奇的人工種子（2）作物新品種的培育1）單倍體育種2）突變體的利用3）轉(zhuǎn)基因植物的培育（3）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)3、植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用10精選課件ppt（1）植物繁殖的新途徑1）微型繁殖（快速繁殖）（2）作物新品動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)、

植物體細(xì)胞雜交強(qiáng)調(diào)：

是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)11精選課件ppt動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液去掉組織間蛋白10代細(xì)胞50代細(xì)胞無(wú)限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)改變動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)12精選課件ppt動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較項(xiàng)目培養(yǎng)基結(jié)果應(yīng)用植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)均需適宜的外界條件：PH,溫度,營(yíng)養(yǎng)及“無(wú)菌,無(wú)毒環(huán)境”固體，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，蔗糖、植物激素培養(yǎng)成植株液體，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，葡萄糖、動(dòng)物血清培育成細(xì)胞系或細(xì)胞株（1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)制品

（如病毒疫苗、干擾素、

單克隆抗體、動(dòng)物激素）（2）用于某些器官移植（1）試管苗的快速繁殖（2）無(wú)病毒植物的培育（3）生產(chǎn)藥物等（4）人工種子（5）轉(zhuǎn)基因植物的培育13精選課件ppt植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較項(xiàng)目培養(yǎng)基結(jié)果應(yīng)用植物組織培細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞物理法、化學(xué)法滅活的仙臺(tái)病毒2、動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程

誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理和方法是否基本相同？

思考？制備單克隆抗體不具有繁殖性

但具有抗原性14精選課件ppt細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞物理法、化學(xué)法滅活的仙臺(tái)病毒2、動(dòng)物細(xì)主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）生物：滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（PEG）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較15精選課件ppt主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B

抗體

特點(diǎn)：產(chǎn)量低、特異性差、純度低、反應(yīng)不夠靈敏五、單克隆抗體1、常規(guī)抗體制備：一個(gè)B淋巴細(xì)胞：只分泌一種特異性抗體2、單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞：能無(wú)限增殖融合單克隆抗體培養(yǎng)16精選課件ppt抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗原注入小鼠體內(nèi)已免疫的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞篩選出雜交瘤細(xì)胞篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液中提取從小鼠腹水中提取單克隆抗體細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體的制備(特定的選擇培養(yǎng)基)17精選課件ppt抗原注入小鼠體內(nèi)已免疫的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞篩選出雜交瘤細(xì)胞主要用于疾病的診斷、治療和預(yù)防。若在單抗上帶上抗癌藥物制成“生物導(dǎo)彈”，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在部位，既消滅了癌細(xì)胞又不會(huì)傷害健康細(xì)胞。特點(diǎn)：與常規(guī)抗體相比，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、化學(xué)性質(zhì)單一的優(yōu)點(diǎn)。單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體是指：雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單一抗體18精選課件ppt主要用于疾病的診斷、治療和預(yù)防。單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體是卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞核有全能性19精選課件ppt卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎例．(06江蘇)下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（4）動(dòng)物細(xì)胞融合除了采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的_______________特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的_______________特點(diǎn)。（6）淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體_________中的______________細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)。（7）雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)選擇特異性強(qiáng),靈敏度高滅活的病毒在體外大量增殖分泌特異性抗體骨髓造血干細(xì)胞主動(dòng)運(yùn)輸20精選課件ppt例．(06江蘇)下圖是單克隆抗體制備流程階段1．用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是()A．都需用CO2培養(yǎng)箱B．都須用液體培養(yǎng)基C．都要在無(wú)菌條件下進(jìn)行D．都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性2．下列關(guān)于基因工程的敘述，錯(cuò)誤的是()A．目的基因和受體細(xì)胞均可來(lái)自動(dòng)、植物或微生物B．限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的工具酶C．人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無(wú)生物活性D．載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)CD21精選課件ppt1．用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是(專題三胚胎工程的復(fù)習(xí)22精選課件ppt專題三胚胎工程的復(fù)習(xí)22精選課件ppt胚胎工程操作對(duì)象：技術(shù)手段：理論基礎(chǔ)：早期胚胎和配子胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等哺乳動(dòng)物的受精卵和早期胚胎的發(fā)育規(guī)律23精選課件ppt胚胎工程操作對(duì)象：早期胚胎和配子胚胎移植、體外受精、一、體內(nèi)受精和早期胚胎的發(fā)育（一）精子的發(fā)生1.發(fā)生場(chǎng)所：睪丸2.時(shí)間：初情期——生殖機(jī)能衰退24精選課件ppt一、體內(nèi)受精和早期胚胎的發(fā)育（一）精子的發(fā)生24精選課件pp精原細(xì)胞有絲分裂初級(jí)精母細(xì)胞次級(jí)精母細(xì)胞精子細(xì)胞精子MⅠ第一階段第二階段第三階段MⅡ3.精子發(fā)生的過(guò)程多個(gè)精原細(xì)胞染色體復(fù)制變形25精選課件ppt精原細(xì)胞有絲分裂初級(jí)精母細(xì)胞次級(jí)精母細(xì)胞精子細(xì)胞精子MⅠ第一4.精子細(xì)胞變形中的主要變化：1.細(xì)胞核——2.高爾基體——3.中心體——4.線粒體——5.細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)——精子頭的主要部分頭部的頂體精子的尾線粒體鞘膜(尾的基部)原生質(zhì)滴(球狀,最后脫落)26精選課件ppt4.精子細(xì)胞變形中的主要變化：1.細(xì)胞核——精子頭的主要部分（二）卵子的發(fā)生(1)發(fā)生部位：卵巢(2)時(shí)間：減數(shù)第一次分裂是在雌性動(dòng)物排卵前后完成；減數(shù)第二次分裂是在精子和卵子結(jié)合的過(guò)程完成的。27精選課件ppt（二）卵子的發(fā)生(1)發(fā)生部位：卵巢27精選課件ppt卵原細(xì)胞有絲分裂多個(gè)卵原細(xì)胞染色體復(fù)制初級(jí)卵母細(xì)胞MⅠ第一極體次級(jí)卵母細(xì)胞2個(gè)第二極體第二極體卵子退化消失（3）卵子發(fā)生過(guò)程MⅡ排卵前后完成在受精過(guò)程完成被卵泡細(xì)胞包圍,形成卵泡胎兒時(shí)期完成28精選課件ppt卵原細(xì)胞有絲分裂多個(gè)卵原細(xì)胞染色體復(fù)制初級(jí)卵母細(xì)胞MⅠ第一極4.精子、卵子的形成最重要的區(qū)別多數(shù)哺乳動(dòng)物卵子的形成和在卵巢內(nèi)的貯備是胎兒出生前完成的。而精子的產(chǎn)生是在初情期開(kāi)始的29精選課件ppt4.精子、卵子的形成最重要的區(qū)別多數(shù)哺乳動(dòng)物卵子的形成和在卵（三）受精1.概念：是精子和卵子結(jié)合形成合子（即受精卵）的過(guò)程。2.場(chǎng)所：輸卵管3.過(guò)程：一)受精前的準(zhǔn)備階段:1)精子獲能:精子必須在雌性動(dòng)物的生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后,才獲得受精能力的生理現(xiàn)象.2)卵子的準(zhǔn)備:在輸卵管中發(fā)育到減數(shù)第二次分裂的中期,才具有與精子受精的能力30精選課件ppt（三）受精1.概念：是精子和卵子結(jié)合形成合子（即受精卵）的過(guò)二)受精階段:1)精子穿越放射冠和透明帶

頂體反應(yīng)使頂體內(nèi)的酶釋放出來(lái)并溶解放射冠內(nèi)的卵丘細(xì)胞

透明帶反應(yīng)是防止多精入卵受精的第一道屏障2)精子進(jìn)入卵黃膜

卵黃膜封閉作用是防止多精入卵受精的第二道屏障3)原核形成3）雄原核形成和雌原核形成4)配子結(jié)合4）雌雄原核融合形成合子(受精卵)31精選課件ppt二)受精階段:31精選課件ppt卵子受精的標(biāo)志：

當(dāng)在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個(gè)極體時(shí)，說(shuō)明卵子已經(jīng)完成了受精。32精選課件ppt卵子受精的標(biāo)志：32精選課件ppt受精卵卵裂期桑椹胚囊胚（內(nèi)含囊胚腔）原腸胚（內(nèi)含原腸腔）胎兒形成：在透明帶內(nèi)進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積并不增加，或略有減少。：由具有全能性細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞數(shù)在32個(gè)左右，排列緊密，形似桑椹內(nèi)細(xì)胞團(tuán)：發(fā)育成胎兒各組織滋養(yǎng)層細(xì)胞：發(fā)育成胎膜和胎盤(pán)：最初發(fā)育在輸卵管進(jìn)行有絲分裂（三）胚胎發(fā)育滋養(yǎng)層外胚層中胚層內(nèi)胚層原腸腔33精選課件ppt受精卵卵裂期桑椹胚囊胚（內(nèi)含囊胚腔）原腸胚（內(nèi)含原腸腔）胎兒二、體外受精和胚胎體外培養(yǎng)1、體外受精（1）概念：采取雌性動(dòng)物的卵細(xì)胞和雄性動(dòng)物的精子，使其在試管受精。（2）過(guò)程：搜集卵細(xì)胞培養(yǎng)使其成熟搜集精子培養(yǎng)使其獲能將卵細(xì)胞和精子在適宜條件下共同培養(yǎng)使其受精。34精選課件ppt二、體外受精和胚胎體外培養(yǎng)1、體外受精34精選課件ppt（3）卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)方法⑴⑵⑶35精選課件ppt（3）卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)方法35精選課件ppt（3）.精子的收集和獲能

1)收集的方法:假陰道法,手握法和電刺激等

2)獲能處理:培養(yǎng)法：嚙齒動(dòng)物、家兔和豬化學(xué)法：牛、羊36精選課件ppt（3）.精子的收集和獲能1)收集的方法:假陰道法,手握法和電（4）受精

在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程37精選課件ppt（4）受精在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程2.胚胎體外培養(yǎng)培養(yǎng)液:水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸以及動(dòng)物血清等.38精選課件ppt2.胚胎體外培養(yǎng)培養(yǎng)液:38精選課件ppt三、胚胎移植1.概念:將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過(guò)其他方式得到的胚胎,移植到同種的生理狀態(tài)相同的其他雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù).供體：提供胚胎的個(gè)體。受體：接受胚胎的個(gè)體。39精選課件ppt三、胚胎移植1.概念:將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過(guò)其他方式選擇供體母羊受體母羊……同期發(fā)情處理*……超數(shù)排卵*供體公羊配種取出早期胚胎質(zhì)量檢查、培養(yǎng)胚胎移植妊娠檢查分娩（胚胎移植的犢羊）2.胚胎移植的過(guò)程：（以波爾山羊?yàn)槔┪磁浞N同期發(fā)情技術(shù)：主要是借助外源激素剌激卵巢，使其按照預(yù)定的要求發(fā)生變化，使處理母畜的卵巢生理機(jī)能都處于相同階段，從而達(dá)到同期發(fā)情。40精選課件ppt選擇供體母羊受體母羊……同期發(fā)情處理*……超數(shù)排卵*供體公羊3、胚胎移植的意義1)加速育種工作和品種改良2)大量節(jié)省購(gòu)買(mǎi)種畜的費(fèi)用3)一胎多產(chǎn)4)保存品種資源和瀕危物種5)可充分發(fā)揮優(yōu)秀個(gè)體的繁殖潛能縮短繁殖周期,增加一生繁殖的后代數(shù)量41精選課件ppt3、胚胎移植的意義1)加速育種工作和品種改良41精選課件pp4.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)1)供體和受體相同的生理環(huán)境2)早期胚胎處于游離狀態(tài),為胚胎的收集提供了可能3)受體對(duì)移入子宮的胚