微生物實驗內(nèi)容匯總

醫(yī)學微生物學實驗微生物學教研室

1可整理ppt醫(yī)學微生物學實驗1可整理ppt第一次實驗內(nèi)容

細菌基本形態(tài)觀察（球菌、桿菌、螺形菌）細菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（莢膜、鞭毛、芽胞）革蘭染色法2可整理ppt第一次實驗內(nèi)容

細菌基本形態(tài)觀察2可整理ppt1.細菌的三種基本形態(tài)球菌：葡萄球菌。桿菌：大腸桿菌。螺形菌：霍亂弧菌。3可整理ppt1.細菌的三種基本形態(tài)球菌：葡萄球菌。3可整理ppt

細菌的三種基本形態(tài)示意圖⊕4可整理ppt細菌的三種基本形態(tài)示意圖⊕4可整理ppt葡萄球菌：5可整理ppt葡萄球菌：5可整理pptFigure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.6可整理pptFigure1-AGramstainofGra顯微鏡下的桿菌桿菌(bacillus)Figure2-GramstainofGram-E.colicells7可整理ppt顯微鏡下的桿菌桿菌(bacillus)Figure2-弧菌8可整理ppt弧菌8可整理ppt霍亂弧菌Figure3-GramstainofGram–Choleracells9可整理ppt霍亂弧菌Figure3-GramstainofG2.細菌的特殊結(jié)構(gòu)觀察芽胞示教片：破傷風桿菌。鞭毛示教片：變形桿菌。莢膜示教片：肺炎雙球菌。

10可整理ppt2.細菌的特殊結(jié)構(gòu)觀察芽胞示教片：破傷風桿菌。10可整理pp芽孢產(chǎn)芽孢細菌的種類

菌體（營養(yǎng)細胞）芽胞11可整理ppt芽孢產(chǎn)芽孢細菌的種類菌體芽胞11可整理ppt破傷風梭菌×100012可整理ppt破傷風梭菌×100012可整理ppt鞭毛13可整理ppt鞭毛13可整理ppt變形桿菌鞭毛×100014可整理ppt變形桿菌鞭毛×100014可整理ppt細菌莢膜示意圖15可整理ppt細菌莢膜示意圖15可整理ppt莢膜的觀察：負染色

16可整理ppt莢膜的觀察：負【菌種】齒垢【試劑】生理鹽水、結(jié)晶紫、碘液、95%乙醇、復紅【材料】酒精燈、接種環(huán)、玻片、3.革蘭氏染色法由丹麥醫(yī)生HansChristianGram于1884年創(chuàng)立。17可整理ppt【菌種】3.革蘭氏染色法由丹麥醫(yī)生HansChristia【操作步驟】結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色復紅復染涂片固定1min1min30s1min濾紙吸干，油鏡觀察18可整理ppt【操作步驟】結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色復紅復染涂片固定1m

結(jié)晶紫

1’

碘液

1’95%乙醇

30”復紅

1’

沖洗濾紙干燥

油鏡觀察沖洗沖洗沖洗染色初染媒染脫色復染19可整理ppt沖洗沖洗沖洗染色初染媒染脫色復染19可整理ppt紫色（G＋）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色甲菌乙菌初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色乙醇復染復紅紫色（G＋）紅色（G-）革蘭氏染色步驟示意圖20可整理ppt紫色（G＋）革蘭氏染色步驟示意圖革蘭氏染色甲菌乙菌初染結(jié)晶紫【結(jié)果】細菌被染成紫色者，稱為革蘭氏陽性菌；而細菌染成紅色者，稱為革蘭氏陰性菌；陽性菌——紫色

陰性菌——紅色21可整理ppt【結(jié)果】細菌被染成紫色者，稱為革蘭氏陽性菌；陽性菌——紫色【意義】鑒別細菌，用本法染色可將細菌分成兩大類。了解致病性指導選擇用藥22可整理ppt【意義】鑒別細菌，用本法染色可將細菌分成兩大類。22可整理p【革蘭氏染色法的原理

】革蘭氏染色法的原理尚未闡明，可能與以下因素有關(guān)。1、通透性學說2、等電點學說3、化學學說23可整理ppt【革蘭氏染色法的原理】革蘭氏染色法的原理尚通透性學說G+菌細胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易進入。G-菌細胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。24可整理ppt通透性學說G+菌細胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖等電點學說G+菌等電點（pI2~3）G-菌等電點（pI4~5）在相同pH條件下G+菌所帶負電荷比G-菌多，所以與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不易脫色。25可整理ppt等電點學說G+菌等電點（pI2~3）25化學學說G+菌菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫等染料牢固結(jié)合，使已著色的細菌不易被乙醇脫色G-菌菌體內(nèi)含核糖核酸鎂鹽很少，故易被脫色26可整理ppt化學學說G+菌菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫等染注意事項涂片的厚度。固定的程度。染色的時間控制：一一半一。沖洗的方法，不要對著涂片區(qū)。95%乙醇脫色時間。27可整理ppt注意事項涂片的厚度。27可整理ppt第二次實驗內(nèi)容一、細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備（示教）二、細菌分離接種技術(shù)（操作）平板劃線接種法；斜面培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法；半固體穿刺接種法三、細菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象（觀察）

28可整理ppt第二次實驗內(nèi)容一、細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備（示教）28可整理p一、細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制作液體培養(yǎng)基制作普通肉湯培養(yǎng)基成分：新鮮牛肉浸液100ml，蛋白胨1g，NaCl0.5g稱量，包裝，滅菌后使用。固體培養(yǎng)基制作稱取營養(yǎng)瓊脂4.5g，加入100ml蒸餾水中溶解。包裝后滅菌使用。斜面培養(yǎng)基制作

29可整理ppt一、細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制作液體培養(yǎng)基制作29可整理ppt1、稱量及溶化2、調(diào)pH3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）4、分裝、加塞、包扎5、滅菌（6、擺斜面）操作步驟30可整理ppt1、稱量及溶化2、調(diào)pH3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）1.半固體培養(yǎng)基接種法（操作）2.斜面培養(yǎng)基接種法3.液體培養(yǎng)基接種法細菌的分離接種接技術(shù)（一）分離培養(yǎng)1.平板分離劃線接種法（操作）（二）純培養(yǎng)31可整理ppt1.半固體培養(yǎng)基接種法（操作）細菌的分離接種接技術(shù)（一平板分離劃線接種法①連續(xù)劃線法②分段劃線法32可整理ppt平板分離劃線接種法①連續(xù)劃線法IVIII1/5I1/10Rotate90

FlameloopRotate90

Rotate90

III1/4Flameloop平板劃線接種法（分離培養(yǎng)法）33可整理pptIVIII1/5I1/10Rotate90Fl培養(yǎng)結(jié)果132注意事項：1.各區(qū)之間接種環(huán)要滅菌2.用力適當，不要劃破瓊脂表面3.注意無菌操作34可整理ppt培養(yǎng)結(jié)果132注意事項：1.各區(qū)之間接種環(huán)要滅菌2.用力適當斜面培養(yǎng)基接種法（操作）用途：常用于擴大純種細菌及實驗室保存菌種。35可整理ppt斜面培養(yǎng)基接種法（操作）用途：常用于擴大純種細菌及實驗室保存液體培養(yǎng)基接種法36可整理ppt液體培養(yǎng)基接種法36可整理ppt半固體培養(yǎng)基接種法（操作）方法：穿刺接種結(jié)果：沿穿刺線生長——動力-擴散生長——動力+37可整理ppt半固體培養(yǎng)基接種法（操作）方法：穿刺接種結(jié)果：沿穿刺線生長—三、細菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象沉淀—成鏈生長渾濁—均勻分散生長菌膜—表面生長（需氧菌）1.固體2.半固體3.液體菌落菌苔動力+動力-38可整理ppt三、細菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象沉淀—成鏈生長1.固體2.半固固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象39可整理ppt固體培養(yǎng)基生長現(xiàn)象39可整理ppt液體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象沉淀生長混濁生長表面生長40可整理ppt液體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象沉淀生長混濁生長表面生長40可整理ppt半固體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象有鞭毛動力+無鞭毛動力－沿刺線生長混濁生長41可整理ppt半固體培養(yǎng)基中生長現(xiàn)象有鞭毛無鞭毛沿刺線生長混濁生長41可整培養(yǎng)基生長現(xiàn)象用途固體平板固體斜面液體半固體細菌在培養(yǎng)基上生長現(xiàn)象42可整理ppt培養(yǎng)基生長現(xiàn)象用途固體平板固體斜面液體半固第三次實驗內(nèi)容一、細菌分布實驗空氣中細菌的檢查皮膚、日常物品細菌的檢查二、藥敏實驗43可整理ppt第三次實驗內(nèi)容一、細菌分布實驗43可整理ppt一、細菌的分布實驗（1）空氣細菌檢查材料：培養(yǎng)基，普通瓊脂平皿（2）皮膚（其他物品）消毒前后的細菌檢查材料：培養(yǎng)基，無菌生理鹽水，75%酒精棉球，2.5%碘酒棉球，無菌棉棒（3）自來水中的細菌檢查材料：培養(yǎng)基，無菌棉棒，酒精燈44可整理ppt一、細菌的分布實驗（1）空氣細菌檢查44可整理ppt1.空氣中細菌的檢查取三塊瓊脂平板，將2個打開皿蓋分別置于不同的環(huán)境15~30min后，蓋好皿蓋。另外1個不啟蓋作為對照。置37℃培養(yǎng)18~24h。材料：普通瓊脂平板方法：結(jié)果：計數(shù)菌落數(shù)，觀察菌落數(shù)的差異。45可整理ppt1.空氣中細菌的檢查取三塊瓊脂平板，將2個打開皿蓋材料：普2、皮膚消毒前后的細菌檢查方法在1個平皿底部做好標記，分為消毒前與消毒后兩個區(qū)域。取一支無菌棉簽放入無菌鹽水中浸泡，在管壁上擠干水后擦拭皮膚或其他物品，然后將該棉簽涂布于無菌平皿消毒前區(qū)域，作來回劃線，注意勿劃破瓊脂表面。將皮膚區(qū)域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支無菌棉棒用消毒前所述方法取材，接種于標有消毒后的平皿區(qū)域。平皿37℃、24h培養(yǎng)后取出觀察表面有無細菌生長，比較消毒前后菌落數(shù)目，描述菌落特征。46可整理ppt2、皮膚消毒前后的細菌檢查方法在1個平皿底部做好標記，分為消結(jié)果：計數(shù)菌落數(shù)37℃×18~24h消毒前消毒后47可整理ppt結(jié)果：計數(shù)菌落數(shù)37℃×18~24h消毒前消毒后47可整理p自來水中的細菌檢查在1個平皿底部做好標記。用酒精燈對水管口滅菌，擰開水管開關(guān)放水15S。取一支無菌棉簽蘸取自來水，將該棉簽涂布于標有消毒前的無菌瓊脂平皿表面，作來回劃線，注意勿劃破瓊脂表面。將平皿于37℃、24h培養(yǎng)后取出觀察平皿表面有無細菌生長，描述菌落特征。48可整理ppt自來水中的細菌檢查在1個平皿底部做好標記。48可整理ppt

二、藥敏試驗（紙片擴散法）材料：方法：普通瓊脂平板(2塊平板/組）大腸桿菌、金葡菌氯霉素、青霉素、碘酒、結(jié)晶紫

大腸桿菌葡菌球菌氯青慶鏈氯青慶鏈37℃×18~24hG+G-49可整理ppt二、藥敏試驗（紙片擴散法）材料：方法：普通瓊脂平板(2塊平步驟（無菌操作）1、在培養(yǎng)基平皿上做標記。2、接種；用棉簽分別沾取菌液（G+，G-）均勻分別涂布于2個平皿上。3、貼藥片；鑷子滅菌取藥片放置于平皿上的標記位置，再滅菌后可取另一藥片放置。4、37℃，過夜培養(yǎng)，觀察結(jié)果。藥敏實驗（紙片擴散法）50可整理ppt步驟（無菌操作）藥敏實驗（紙片擴散法）50可整理ppt藥敏實驗結(jié)果51可整理ppt藥敏實驗結(jié)果51可整理ppt藥敏實驗結(jié)果藥敏實驗紙片法抑菌環(huán)直徑青霉素(10ug/片)鏈霉素(10ug/片)氯霉素(30ug/片)慶大霉素(10ug/片)敏感標準抗藥≦20≦11﹤10≦12中度敏感21-2812-1410-1713-14高度敏感≧29≧15﹥17≧15白色葡萄球菌（G+）大腸桿菌（G-）52可整理ppt藥敏實驗結(jié)果紙片法抑菌環(huán)直徑青霉素鏈霉素氯霉素慶大霉素抗藥≦第四次實驗內(nèi)容

病原性球菌標本片觀察鏈球菌、腦膜炎雙球菌血漿凝固酶試驗抗“O”試驗

53可整理ppt第四次實驗內(nèi)容

病原性球菌標本片觀察53可整理ppt目的要求掌握病原性球菌的基本形態(tài)。掌握藥敏實驗操作技術(shù)與判斷。54可整理ppt目的要求掌握病原性球菌的基本形態(tài)。54可整理ppt鏈球菌55可整理ppt鏈球菌55可整理ppt腦膜炎雙球菌56可整理ppt腦膜炎雙球菌56可整理ppt[原理和意義]致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使人或動物血漿發(fā)生凝固，因此，測定血漿凝固酶的有無是鑒定葡萄球菌致病性的重要依據(jù)。血漿凝固酶試驗57可整理ppt[原理和意義]血漿凝固酶試驗57可整理ppt步驟：血漿血漿12金葡白葡++凝集（+）不凝集（-）血漿凝固酶試驗生理鹽水++無菌操作：58可整理ppt步驟：血漿血漿12金葡血漿凝集試驗結(jié)果59可整理ppt血漿凝集試驗結(jié)果59可整理ppt鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當兩者中和后，再加入SLO乳膠試劑，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗體與乳膠試劑反應(yīng)，產(chǎn)生清晰凝集，為陽性；無凝集，為陰性。方法：間接凝集結(jié)果：效價大于400單位意義：風濕熱及其活動性的輔助診斷抗“O”試驗（ASOtest）原理：60可整理ppt鏈球菌侵入體內(nèi)產(chǎn)生SLO，刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體ASO，當兩者步驟：抗“O”試驗（ASOtest）陰性對照（1滴）待檢血清

（1滴）++膠乳試劑（1滴）膠乳試劑（1滴）-？2min2min61可整理ppt步驟：抗“O”試驗（ASOtest）陰性對照（1滴）第五次實驗內(nèi)容

操作：肥達試驗肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜菌標本62可整理ppt第五次實驗內(nèi)容

62可整理ppt肥達實驗肥達試驗（Widaltest）是用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原與病人血清做定量凝集試驗，以測定患者血清中有無相應(yīng)抗體，根據(jù)抗體含量的多少以及增長情況，可幫助診斷傷寒及副傷寒。

【原理】63可整理ppt肥達實驗肥達試驗（Widaltest）是用已知肥達反應(yīng)稀釋法示意表試驗管（每管0.5ml）對照管1234567生理鹽水0.50.50.50.50.50.50.5-1“O”抗原0.50.50.50.50.50.50.52“H”抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最終稀釋度

1:401:801:1601:3201:6401:1280-64可整理ppt肥達反應(yīng)稀釋法示意表試驗管（每管0.5ml）對照管123肥達實驗結(jié)果判斷血清的凝集效價（滴度）：是指能與一定量的抗原發(fā)生肉眼可見的明顯凝集（即“++”凝集）的血清最高稀釋倍數(shù)。血清效價代表血清中抗體的含量，血清效價越高，所含抗體的量愈多。65可整理ppt肥達實驗結(jié)果判斷血清的凝集效價（滴度）：是指能結(jié)果判斷1、正常凝集效價傷寒沙門菌“O”抗體凝集效價在1：80以下，傷寒沙門菌“H”抗體在1：160以下，甲、乙型副傷寒沙門菌“H”抗體凝集效價在1：80以下。2、病程中動態(tài)觀察

二份血清，第二次效價增長四倍以上有意義3、O與H抗體在診斷上的意義66可整理ppt結(jié)果判斷1、正常凝集效價66可整理ppt

OHAB

診斷意義（可能）傷寒及副傷寒感染早期/交叉反應(yīng)傷寒及副傷寒感染晚期/預防接種/非特異性回憶反應(yīng)傷寒甲型副傷寒乙型副傷寒接種傷寒及副傷寒三聯(lián)疫苗非腸熱癥/早期用抗生素/免疫功能低下3、O與H抗體在診斷上的意義67可整理pptOHAB肉毒梭菌68可整理ppt肉毒梭菌68可整理ppt產(chǎn)氣莢膜梭菌69可整理ppt產(chǎn)氣莢膜梭菌69可整理ppt第六次實驗內(nèi)容一、細菌染色標本檢查法

抗酸染色法（操作）二、標本片觀察：（鉤端螺旋體

、白色念珠菌，曲霉、枯草桿菌）

70可整理ppt第六次實驗內(nèi)容一、細菌染色標本檢查法70可整理ppt分枝桿菌的細胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結(jié)合成復合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當再加堿性美蘭復染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。一、抗酸染色原理71可整理ppt分枝桿菌的細胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽抗酸染色材料：標本：卡介苗染液：石炭酸復紅，3%鹽酸酒精，美藍器具：同革蘭氏染色72可整理ppt抗酸染色材料：72可整理ppt

實驗方法：1、細菌涂片標本的制備涂片

干燥

固定3、油鏡觀察1）初染：用玻片夾夾持涂片標本，滴加石炭酸復紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標本冷卻后用水沖洗。2）脫色：3%鹽酸酒精脫色30’’~1’；用水沖洗。3）復染：用堿性美蘭溶液復染1’，用水沖洗后用吸水紙吸干。2、染色73可整理ppt實抗酸染色步驟

1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。涂片干燥固定74可整理ppt抗酸染色步驟1、涂片包括涂片、干燥、固抗酸染色步驟2、染色包括初染、脫色、復染三步。

石炭酸復紅維持3-5’3%鹽酸酒精30’’

~1’美藍復染1’

沖洗干燥

油鏡觀察沖洗沖洗初染脫色復染75可整理ppt抗酸染色步驟2、染色包括初染、脫色、復染三步。沖洗沖洗初染脫三、抗酸染色結(jié)果抗酸菌呈紅色，常堆積成團，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細菌呈蘭色。76可整理ppt三、抗酸染色結(jié)果抗酸菌呈紅色，76可整理ppt77可整理ppt77可整理ppt注意事項：1、無菌操作2、菌種管搖勻后取菌3、涂片均勻4、初染加熱維持3~5分鐘，勿沸騰燒干5、冷卻后沖洗6、油鏡下從視野中找紅色抗酸菌78可整理ppt注意事項：1、無菌操作78可整理ppt二、標本片觀察白色念珠菌鉤端螺旋體枯草桿菌曲霉79可整理ppt二、標本片觀察白色念珠菌79可整理ppt白色念珠菌80可整理ppt白色念珠菌80可整理ppt鉤端螺旋體81可整理ppt鉤端螺旋體81可整理ppt類炭疽（枯草桿菌）炭疽桿菌82可整理ppt類炭疽（枯草桿菌）炭疽桿菌82可整理ppt曲霉83可整理ppt曲霉83可整理ppt第七次實驗內(nèi)容

膿汁標本中金黃色葡萄球菌的鑒定

84可整理ppt第七次實驗內(nèi)容

膿汁標本中金黃色葡萄球菌的鑒定84可整理p實驗器材標本：膿拭子、感染分泌物或模擬膿汁標本菌種：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物、表皮葡萄球菌培養(yǎng)基：血瓊脂平板、甘露醇發(fā)酵管其他：血漿、生理鹽水、革蘭染液、玻片、滴管培養(yǎng)箱、酒精燈、接種環(huán)等85可整理ppt實驗器材標本：膿拭子、感染分泌物或模擬膿汁標本85可整理pp檢查原則在膿汁標本中，以化膿性球菌最為常見，本實驗主要檢測金黃色葡萄球菌用藥前采集標本無菌操作86可整理ppt檢查原則在膿汁標本中，以化膿性球菌最為常見，本實驗主要檢標本檢測程序膿汁、膿性分泌物（未知菌液/固體培養(yǎng)物）涂片革蘭染色鏡檢血瓊脂平板接種直接菌落觀察血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵診斷報告87可整理ppt標本檢測程序膿汁、膿性分泌物（未知菌液/固體培養(yǎng)物）涂檢查方法和結(jié)果報告直接顯微鏡檢查：取標本直接涂片，均勻涂成菌膜，自然干燥，固定后革蘭染色，油鏡觀察。注：若染色后未發(fā)現(xiàn)細菌，可報告“直接鏡檢未發(fā)現(xiàn)細菌”

革蘭染色鏡檢

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形態(tài)