基因工程病毒疫苗-課件

第六章基因工程疫苗

第一節(jié)疫苗概述P149,NP211一、疫苗的起源與發(fā)展疫苗的起源可以追溯到我國(guó)古代。早在4世紀(jì)初，東晉葛洪所著《肘后方》中，已有關(guān)于防治狂犬病的記載：“殺所咬犬，取腦敷之，后不復(fù)發(fā)”。在宋真宗時(shí)代（公元1000年左右）宰相王達(dá)之子患了天花，四處請(qǐng)醫(yī)無效，最后請(qǐng)來了峨眉山的道人，取其患處的結(jié)痂，處理后進(jìn)行自體接種而治愈，這當(dāng)是最早的自身免疫治療（self-Vaccine）

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第六章基因工程疫苗逐漸發(fā)展成了預(yù)防天花的人痘接種法，即從感染天花后的恢復(fù)期病人或癥狀比較輕的病人身上，挑取水泡、膿皰和痘痂內(nèi)容物并保存1個(gè)月左右待其干燥，然后將其研磨成粉末，給健康人的鼻腔吸入，以預(yù)防天花，取得了很好的保護(hù)效果。這是人類史上最早使用疫苗來預(yù)防疾病的記錄，較英國(guó)醫(yī)生琴納（Jenner）發(fā)明牛痘苗早了幾百年。

逐漸發(fā)展成了預(yù)防天花的人痘接種法，即從感染天花后的恢復(fù)期病人精品資料精品資料你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結(jié)一節(jié)課的重點(diǎn)的難點(diǎn)，你是否會(huì)認(rèn)為老師的教學(xué)方法需要改進(jìn)？你所經(jīng)歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風(fēng)雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學(xué)問無顏見爹娘……”“太陽當(dāng)空照，花兒對(duì)我笑，小鳥說早早早……”基因工程病毒疫苗--ppt課件15世紀(jì)中期我國(guó)的人痘苗接種法傳至中東，后經(jīng)改革進(jìn)行皮下接種。1721年英駐土耳其的大使夫人，將此法又傳至英與歐洲各國(guó)。人痘的發(fā)明是中國(guó)人民對(duì)世界醫(yī)學(xué)的一大貢獻(xiàn)。2000年，美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心（CentersforDiseaseControlandPrevention，CDC）出版了《疫苗可預(yù)防疾病的流行病學(xué)與預(yù)防學(xué)》第6版，在這本被譽(yù)為疫苗學(xué)權(quán)威手冊(cè)首頁的“疫苗接種的里程碑”中，第一項(xiàng)即是“12世紀(jì)中國(guó)開始用人痘接種預(yù)防天花”（見表6-1）。這是對(duì)中國(guó)首先開始使用人痘接種預(yù)防天花是最早的免疫接種形式的肯定。

15世紀(jì)中期我國(guó)的人痘苗接種法傳至中東，后經(jīng)改革進(jìn)行皮下接種17965.14英國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)生愛德華·琴納（EdwardJenner）進(jìn)行了人類歷史上的第一次疫苗接種試驗(yàn)。Jenner從一位感染了牛痘的年輕擠奶農(nóng)婦的手上挑取了痘苗接種到一名8歲男孩的手臂上。經(jīng)過幾個(gè)月的嚴(yán)密觀察，發(fā)現(xiàn)小男孩獲得了免疫保護(hù)，一直沒有感染天花。1798年9月，Jenner發(fā)表了接種“牛痘”預(yù)防天花的論文，雖然當(dāng)時(shí)全然不知天花是由天花病毒感染所致，但這一劃時(shí)代的發(fā)明，開創(chuàng)了人工自動(dòng)免疫的先河。17965.14英國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)生愛德華·琴納（EdwardJe隨后，種痘技術(shù)傳遍了歐洲，后又傳到北美和亞洲。為紀(jì)念Jenner的這一偉大貢獻(xiàn)，巴斯德（Pasteur）將疫苗稱為Vaccine（拉丁文vacc是“牛”的意思）。由于長(zhǎng)期和廣泛地使用牛痘苗，全世界從1977年以后再也沒有發(fā)現(xiàn)過天花病人。世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization，WHO）于1979年10月26日莊嚴(yán)宣布，天花已在全球絕跡。這是人類歷史上第一個(gè)使用疫苗消滅的傳染病。隨后，種痘技術(shù)傳遍了歐洲，后又傳到北美和亞洲。19世紀(jì)70年代，法國(guó)科學(xué)家路易斯·巴斯德（LouisPasteur）有關(guān)減毒雞霍亂菌的研究，是繼琴納之后的重大進(jìn)步。他認(rèn)為使用減毒的病原體來預(yù)防其導(dǎo)致的疾病，比使用相關(guān)的動(dòng)物病原體來預(yù)防人類疾病理當(dāng)更加有效。巴斯德建立了現(xiàn)代意義上的預(yù)防接種，即通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)研制的疫苗來預(yù)防傳染病。隨后的羊炭疽減毒活疫苗的試驗(yàn)成功，尤其是1885年首次在人體使用減毒狂犬病疫苗的成功，標(biāo)志人類進(jìn)入了一個(gè)預(yù)防接種的科學(xué)新紀(jì)元?；诎踩?，正式生產(chǎn)的均為狂犬病滅活疫苗，質(zhì)量上也在不斷的改進(jìn)。Pasteur在疫苗研制領(lǐng)域的先鋒作用和卓越貢獻(xiàn)引起了第一次疫苗革命。19世紀(jì)70年代，法國(guó)科學(xué)家路易斯·巴斯德（LouisPa到19世紀(jì)末，人類在疫苗學(xué)領(lǐng)域里已經(jīng)取得了輝煌的成就，包括2個(gè)人用病毒減毒活疫苗（琴納的牛痘，巴斯德的狂犬?。?個(gè)人用細(xì)菌滅活疫苗（美國(guó)Salmon和Smith、法國(guó)Chamberlai和Roux的傷寒、霍亂和鼠疫），以及疫苗學(xué)的一些基礎(chǔ)概念，如Metchnikoff的的細(xì)胞免疫（1884年），Ehrlich的受體理論（1897年）及毒素-抗毒素作用。到19世紀(jì)末，人類在疫苗學(xué)領(lǐng)域里已經(jīng)取得了輝煌的成就，包括2進(jìn)入20世紀(jì)前30年，疫苗學(xué)在三個(gè)方面取得了重大進(jìn)展：首先，法國(guó)科學(xué)家Calmette和Guerin在1906年從牛體分離到1株結(jié)核菌，經(jīng)過13年在牛膽汁中傳遞230代，獲得1株減毒株，制成疫苗，于1927年上市，即所謂卡介苗（BCG）。其次，在20年代，巴斯德研究所的Ramon應(yīng)用化學(xué)滅活方法獲得白喉和破傷風(fēng)類毒素并研制成疫苗。第三，WilsonSmith和ThomasFrancis分別在禽胚中研制成功2種滅活甲型流行性感冒（流感）疫苗。進(jìn)入20世紀(jì)前30年，疫苗學(xué)在三個(gè)方面取得了重大進(jìn)展：二次大戰(zhàn)后，疫苗研究進(jìn)入了突飛猛進(jìn)的發(fā)展階段。波士頓的Enders及其同事發(fā)展了病毒的體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，促進(jìn)了多種減毒和滅活病毒疫苗的研制。50年代，先有Salk的3價(jià)滅活脊髓灰質(zhì)炎（脊灰）疫苗（IPV），后有Sabin的3價(jià)減毒脊灰疫苗（OPV），為人類渴望在地球上消滅脊灰提供了有力武器。同一時(shí)期還研制了在雞胚細(xì)胞中培養(yǎng)減毒的麻疹疫苗。60年代研制了在雞胚中減毒的流行性腮腺炎疫苗。70年代研制了在細(xì)胞中培養(yǎng)的風(fēng)疹疫苗。細(xì)菌疫苗方面，70年代細(xì)菌夾膜多糖的純化技術(shù)促進(jìn)了多個(gè)侵襲性細(xì)菌疫苗的研制成功。同一時(shí)期的病毒蛋白純化技術(shù)也促進(jìn)了血源性乙型病毒性肝炎（乙肝）疫苗的研制成功。二次大戰(zhàn)后，疫苗研究進(jìn)入了突飛猛進(jìn)的發(fā)展階段。20世紀(jì)80年代，現(xiàn)代分子技術(shù)的應(yīng)用推動(dòng)了又一代疫苗的研制，引發(fā)了疫苗發(fā)展史上的第二次革命，其首要成果是基因重組乙肝疫苗，為人類在地球上消除乙肝提供了希望。與此同時(shí)，化學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)的發(fā)展在很大程度上為新疫苗的研制和舊疫苗的改進(jìn)提供了新技術(shù)和新方法（表5-2）。20世紀(jì)80年代，現(xiàn)代分子技術(shù)的應(yīng)用推動(dòng)了又一代疫苗的研制，至今已有30余種疫苗成功的用于人類疾病的預(yù)防（表5-3）。其中一半以上是病毒疫苗。如天花（poxvirus）、小兒麻痹（poliovirus）、麻疹（Measles）等曾嚴(yán)重危害人類生命與健康的疾病的流行得到了有效的控制。其中天花已被根除，創(chuàng)造了使用疫苗在自然界中徹底消滅一種病原微生物的醫(yī)學(xué)奇跡。人類消滅脊髓灰質(zhì)炎的目標(biāo)也即將實(shí)現(xiàn)。至今已有30余種疫苗成功的用于人類疾病的預(yù)防（表5-3）。其我國(guó)自1919年開始建立專門的機(jī)構(gòu)（中央防疫處，北京生物制品研究所前身）從事生物制品的研究、生產(chǎn)，這是我國(guó)第一所生物制品研究所。建國(guó)后，我國(guó)政府重新組建和新建了北京、上海、武漢、長(zhǎng)春、蘭州、成都等六個(gè)生物制品研究所。中國(guó)現(xiàn)有疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)約30家，是世界上疫苗產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)最多的國(guó)家（表5-4）。中國(guó)的疫苗產(chǎn)品年產(chǎn)量已經(jīng)超過10億個(gè)劑量單位，疫苗的種類和數(shù)量也達(dá)到世界之最，其中用于預(yù)防乙肝、脊髓灰質(zhì)炎、麻疹、百日咳、白喉、破傷風(fēng)的兒科常見病的疫苗生產(chǎn)量達(dá)到5億人份，已經(jīng)全部實(shí)現(xiàn)計(jì)劃免疫接種。中國(guó)生產(chǎn)的疫苗產(chǎn)品已經(jīng)能夠滿足防病、滅病的需要。我國(guó)自1919年開始建立專門的機(jī)構(gòu)（中央防疫處，北京生物制品二、疫苗與基因工程疫苗P153傳統(tǒng)疫苗（TraditionalVaccine）用人工變異或從自然界篩選獲得的減毒或無毒的活的病原微生物制成的制劑或者用理化方法將病原微生物殺死制備的生物制劑，用于人工自動(dòng)免疫以保護(hù)人或動(dòng)物產(chǎn)生免疫力，這些制劑被稱為疫苗（多用于預(yù)防），即疫苗是由病原體制成的。二、疫苗與基因工程疫苗P153國(guó)內(nèi)常將細(xì)菌制作的人工主動(dòng)免疫生物制品稱為菌苗。將病毒（Virus）、立克次氏體（Rickettia）、螺旋體（Spiralcoil）等微生物制成的生物制品稱為疫苗。現(xiàn)在國(guó)際上一般將細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素統(tǒng)稱為疫苗（vaccine）。國(guó)內(nèi)常將細(xì)菌制作的人工主動(dòng)免疫生物制品稱為菌苗。將病毒（Vi基因工程疫苗：上述狹義的疫苗被稱做傳統(tǒng)疫苗（traditionalvaccine），即完整的病原體為主制成的疫苗；而基因工程疫苗則屬于新一代疫苗（NewgenerationVaccine）或高技術(shù)疫苗范疇（High-techVaccine）。主要包括基因工程亞單位疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗等等，廣義的還包括遺傳重組疫苗、合成肽疫苗、抗獨(dú)特型抗體疫苗以及微膠囊可控緩釋疫苗等。基因工程疫苗：上述狹義的疫苗被稱做傳統(tǒng)疫苗（traditio第二節(jié)病毒疫苗的種類一、傳統(tǒng)病毒疫苗

又稱常規(guī)疫苗或第一代疫苗，是長(zhǎng)期以來用于傳染病預(yù)防的主要生物制品。1、滅活疫苗

滅活疫苗又稱死疫苗，是指利用加熱或甲醛等理化方法將人工大量培養(yǎng)的完整的病原微生物殺死，使其喪失感染性和毒性而保持其免疫原性，并結(jié)合相應(yīng)的佐劑而制成的疫苗。疫苗液中除含有滅活的病毒顆粒外，還含有細(xì)胞成分和培養(yǎng)病毒時(shí)加入的牛血清等蛋白類物質(zhì)，多次接種疫苗容易發(fā)生過敏反應(yīng)。第二節(jié)病毒疫苗的種類優(yōu)點(diǎn)制造工藝簡(jiǎn)單免疫原性的穩(wěn)定性高易于制備多價(jià)疫苗優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)：1）需要嚴(yán)格的滅活操作，保證疫苗中不含有滅活不完全的顆粒。2）滅活疫苗所提供的免疫力較短暫，為完成免疫程序，需要進(jìn)行多次接種，由于機(jī)體反復(fù)接受疫苗中的異性蛋白質(zhì)的刺激，而可能出現(xiàn)不良的過敏反應(yīng)。3）有些滅活疫苗，如早年制備的麻疹滅活疫苗，可使有些受接種者在以后自然接觸麻疹病毒時(shí)，引起嚴(yán)重的麻疹感染過敏性反應(yīng)。4）滅活疫苗雖可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgM和IgG抗體，但有時(shí)卻得不到滿意的保護(hù)效果。缺點(diǎn)：2、減毒活疫苗減毒活疫苗又稱弱毒疫苗，是指將微生物的自然強(qiáng)毒株通過物理、化學(xué)和生物學(xué)的方法，連續(xù)傳代，使其對(duì)原宿主喪失致病力，或只引起亞臨床感染，但仍保持良好的免疫原性、遺傳特性，用這種毒株制備的疫苗就叫減毒活疫苗。當(dāng)前使用的病毒疫苗多數(shù)是減毒活疫苗?；钜呙缇哂锌烧T發(fā)全面的免疫應(yīng)答反應(yīng)（體液免疫和細(xì)胞免疫）、免疫力持久等優(yōu)點(diǎn)。2、減毒活疫苗常用的減毒方法有以下幾種：1）體外減毒即體外連續(xù)傳代減毒。在異源宿主中連續(xù)傳代；在單一宿主中反復(fù)連續(xù)傳代。2）冷適應(yīng)篩選溫度可以改變病毒的特性，得到冷適應(yīng)株。病毒冷適應(yīng)株常伴有毒力減弱和各種特征性標(biāo)志。冷適應(yīng)篩選穩(wěn)定的減毒突變株是在傳統(tǒng)疫苗設(shè)計(jì)中較早采用的方法，而且也是最為行之有效的思路。常用的減毒方法有以下幾種：減毒活疫苗與滅活疫苗各有優(yōu)缺點(diǎn)。前者優(yōu)于后者。減毒活疫苗可使機(jī)體產(chǎn)生亞臨床感染，特別當(dāng)以自然途徑，如口服或噴鼻免疫時(shí)，可產(chǎn)生廣譜的免疫應(yīng)答，即除循環(huán)性抗體IgM和IgG外，在病毒侵入的門戶如呼吸道和消化道也可誘生局部抗體IgA。

減毒活疫苗與滅活疫苗各有優(yōu)缺點(diǎn)。前者優(yōu)于后者。3、亞單位疫苗亞單位疫苗是指提取或合成細(xì)菌、病毒外殼的特殊蛋白結(jié)構(gòu)，即抗原決定簇制成的疫苗，這類疫苗不是完整的病毒，是病毒的一部分物質(zhì)，故稱亞單位疫苗。亞單位疫苗僅有幾種主要表面蛋白，因而能消除病毒（或細(xì)菌）的許多無關(guān)抗原決定簇和粗制或半提純的病毒（或細(xì)菌）制劑誘發(fā)的不良反應(yīng)。3、亞單位疫苗滅活疫苗、減毒活疫苗和亞單位疫苗三類疫苗的比較滅活疫苗減毒活疫苗亞單位疫苗制備方法通過化學(xué)或物理方法使病原體失活通過非正常培養(yǎng)選擇減毒株或無毒株以化學(xué)方法獲得病原體的某些具有免疫原性的成分免疫機(jī)理病原體失去毒力但保持免疫原性，接種后產(chǎn)生特異抗體或致敏淋巴細(xì)胞接種后病原體在體內(nèi)有一定生長(zhǎng)繁殖能力，類似隱性感染，產(chǎn)生細(xì)胞、體液和局部免疫接種后能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫疫苗穩(wěn)定性相對(duì)穩(wěn)定相對(duì)不穩(wěn)定穩(wěn)定毒力回升不可能有可能不可能免疫接種多次免疫接種一般為一次性多次免疫接種安全性較安全對(duì)免疫缺陷者有危險(xiǎn)安全性好常用疫苗乙腦、脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗麻疹、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗白喉、破傷風(fēng)類毒素，A群腦膜炎球菌多糖疫苗滅活疫苗、減毒活疫苗和亞單位疫苗三類疫苗的比較滅活疫苗減毒二、新一代病毒疫苗新一代病毒疫苗（新型疫苗）主要指利用基因工程技術(shù)研制的疫苗?；蚬こ虂唵挝灰呙?、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基缺失活疫苗，通常也習(xí)慣地將遺傳重組疫苗、合成肽疫苗和抗獨(dú)特型抗體疫苗包括在新型疫苗范疇。

二、新一代病毒疫苗1.基因工程疫苗①基因工程亞單位疫苗②基因工程載體疫苗③核酸疫苗④基因缺失活疫苗⑤蛋白工程疫苗2.遺傳重組疫苗3.合成肽疫苗4.抗獨(dú)特型抗體疫苗5.微膠囊可控緩釋疫苗1.基因工程疫苗（一）基因工程疫苗geneengineeringvaccine基因工程疫苗，也稱遺傳工程疫苗（geneticengineeringvaccine），指使用重組DNA技術(shù)克隆并表達(dá)保護(hù)性抗原基因，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物，或重組體本身制成的疫苗。主要包括基因工程亞單位疫苗，基因工程載體疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程疫苗等五種。

（一）基因工程疫苗geneengineeringvac1、基因工程亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗，主要是指將基因工程表達(dá)的蛋白抗原純化后制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①產(chǎn)量高；②純度高；③安全性高；④用于病原體難于培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。1、基因工程亞單位疫苗缺點(diǎn)：與傳統(tǒng)亞單位疫苗相比，免疫效果較差。增強(qiáng)其免疫原性的方法：①調(diào)整基因組合使之表達(dá)成顆粒性結(jié)構(gòu)②是在體外加以聚團(tuán)化，包入脂質(zhì)體或膠囊微球③加入有免疫增強(qiáng)作用的化合物作為佐劑。

缺點(diǎn)：2、基因工程載體疫苗基因工程載體疫苗是指利用微生物做載體，將保護(hù)性抗原基因重組到微生物體中，使用能表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組微生物制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：疫苗多為活疫苗，重組體用量少，抗原不需純化，載體本身可發(fā)揮佐劑效應(yīng)增強(qiáng)免疫效果缺點(diǎn)：曾感染過腺病毒或者接種過痘苗的人，對(duì)載體微生物已具有免疫力，使之接種后不易繁殖，因而影響免疫效果。2、基因工程載體疫苗3、基因缺失活疫苗P156,NP214基因缺失活疫苗是指應(yīng)用基因操作技術(shù)，將病原微生物中與致病性有關(guān)的毒力基因序列除去或失活，使之成為無毒株或弱毒株，但仍保持有良好的免疫原性，從而制成的安全有效的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①有突變性狀明確、穩(wěn)定；②不易返祖、毒力恢復(fù)；③是研究安全有效的新型疫苗的重要途徑。3、基因缺失活疫苗P156,NP214

4、核酸疫苗P157,NP214核酸疫苗或稱基因疫苗，是將一種病原微生物的重要抗原基因，經(jīng)與質(zhì)粒載體DNA重組后，直接導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)，并通過宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護(hù)性免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。核酸疫苗也稱為第三代疫苗。4、核酸疫苗P157,NP214優(yōu)點(diǎn)：①易于制備；②便于保存；③可多次免疫并且容易制成多聯(lián)多價(jià)疫苗。缺點(diǎn)：①外源核酸是否會(huì)整合到染色體中引起癌變；②能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產(chǎn)生，免疫耐受等。優(yōu)點(diǎn)：5、蛋白工程疫苗蛋白工程疫苗是指將抗原基因加以改造，使之發(fā)生點(diǎn)突變、插入、缺失、構(gòu)型改變，甚至進(jìn)行不同基因或部分結(jié)構(gòu)域的人工組合，以期達(dá)到增強(qiáng)其產(chǎn)物的免疫原性，擴(kuò)大反應(yīng)譜，去除有害作用或副反應(yīng)的一類疫苗。5、蛋白工程疫苗（二）遺傳重組疫苗遺傳重組疫苗是指使用經(jīng)遺傳重組方法獲得的重組微生物制成的疫苗。通常是將對(duì)人體無致病性的弱毒株與強(qiáng)毒株（野毒株）混合感染，弱毒株與野毒株間發(fā)生基因組片段交換造成重組，然后使用特異方法篩選出對(duì)人體不致病的但又含有野毒株強(qiáng)免疫原性基因片段的重組毒株。（二）遺傳重組疫苗（三）合成肽疫苗合成肽疫苗是指使用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽制成的疫苗。優(yōu)點(diǎn)：①純度和安全性高；②副作用??；③可長(zhǎng)期在常溫下保存；缺點(diǎn)：①其抗原性單一；②免疫原性弱。因此須用幾種合成肽抗原聯(lián)合使用，還須用多種方法提高合成肽的免疫原性。（三）合成肽疫苗（四）抗獨(dú)特型抗體疫苗抗獨(dú)特型抗體疫苗是指使用與特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2）做抗原制成的疫苗。目前此疫苗尚處于理論性研究階段。（四）抗獨(dú)特型抗體疫苗（五）微膠囊可控緩釋疫苗微膠囊可控緩釋疫苗，指使用微膠囊技術(shù)將特定抗原包裹后制成的疫苗。（五）微膠囊可控緩釋疫苗特點(diǎn)①小于10μm的微膠囊在注射部位可被巨噬細(xì)胞吞噬并攜帶至淋巴結(jié)附近和免疫系統(tǒng)其他部位，具有更強(qiáng)的免疫效果。②大于30μm的微膠囊，更適于做可控緩釋。由于微膠囊的保護(hù)作用，母體抗體不能使抗原失活，可用于嬰幼兒免疫接種。③微膠囊在腸道內(nèi)不受酸或酶的影響，可用于口服。特點(diǎn)

第四節(jié)基因工程病毒疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀P165一、急需研制的基因工程病毒疫苗急需研制的基因工程病毒疫苗主要有十幾種疾病-預(yù)防性疫苗治療性疫苗艾滋病+（需要）+乙型肝炎++丙型肝炎++戊型肝炎+-（不需要）EBV肝炎++第四節(jié)基因工程病毒疫苗的研發(fā)現(xiàn)狀P165疾病人乳頭瘤病毒感染（宮頸癌）++單純皰疹病毒感染（Ⅰ、Ⅱ型）++巨細(xì)胞病毒感染++呼吸道和細(xì)胞病毒感染+-輪狀病毒感染+-登革熱病毒感染+-埃博拉病毒感染+-注：“+”表示需要，“-”表示不需要

人乳頭瘤病毒感染（宮頸癌）++單純皰疹病毒感染（Ⅰ、Ⅱ型）+

二、重要病毒性疾病基因工程疫苗研究進(jìn)展目前，病毒基因工程疫苗主要集中在研制常規(guī)技術(shù)不能或很難解決的新疫苗和改造免疫保護(hù)效果差，負(fù)反應(yīng)較大，或成本較高，或使用不方便的傳統(tǒng)疫苗上，有的疫苗兼有預(yù)防和治療兩種功能二、重要病毒性疾病基因工程疫苗研究進(jìn)艾滋病的全名為“獲得性免疫缺陷綜合征”(acquiredimmunodeficiencysyndrome，AIDS)，是由人類免疫缺陷病毒(humanimmunodefieiencyvirus，HIV)感染引起的全身性免疫功能喪失綜合征。自美國(guó)1981年診斷出首例艾滋病病人以來，艾滋病病毒在全球范圍內(nèi)的傳播速度驚人，已有200余個(gè)國(guó)家和地區(qū)受到艾滋病的嚴(yán)重威脅。因此，國(guó)內(nèi)外在艾滋病毒的研究上一直投放大量人力財(cái)力，非常重視。艾滋病疫苗P165艾滋病的全名為“獲得性免疫缺陷綜合征”(acqui艾滋病的傳播途徑艾滋病有3種傳播途徑：血液傳播性傳播母嬰傳播45ppt課件艾滋病的傳播途徑艾滋病有3種傳播途徑：45ppt課件45

HIV共有9個(gè)基因：

3個(gè)結(jié)構(gòu)基因：gag、pol、env；

6個(gè)調(diào)節(jié)基因：tat、rev、nef、vif、vpu/vpx、vpr

HIV共有9個(gè)基因：

3個(gè)結(jié)構(gòu)基因：gag、pol、envHIV結(jié)構(gòu)模式圖HIV結(jié)構(gòu)模式圖艾滋病是是感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后引起的一種慢性、進(jìn)行性的致命性疾病。HIV感染人體后，在人體內(nèi)以每天復(fù)制109—1012個(gè)的速度迅速增長(zhǎng)，主要侵犯和破壞CD4+T細(xì)胞，使感染者的免疫功能呈進(jìn)行性下降。48ppt課件艾滋病是是感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后引起的一種慢性、進(jìn)48HIV感染特點(diǎn)：①HIV直接感染破壞免疫細(xì)胞；②HIV變異極快。HIV感染特點(diǎn)：HIV的生命周期和抗HIV藥物靶向目標(biāo)HIV的生命周期和抗HIV藥物靶向目標(biāo)HIV疫苗實(shí)驗(yàn)研究的現(xiàn)狀當(dāng)前用于治療HIV感染的藥物只能控制病毒復(fù)制，不能徹底清除病毒，而且抗HIV藥物價(jià)格昂貴，具有較嚴(yán)重的副作用，藥物使用不當(dāng)亦會(huì)誘發(fā)耐藥株的產(chǎn)生。因此，研制安全、有效的疫苗是控制HIV傳播的重要手段之一。疫苗分預(yù)防疫苗和治療疫苗，預(yù)防疫苗的作用是防止感染病毒，針對(duì)的是未感染人群。而治療疫苗的作用，則是誘導(dǎo)人體免疫系統(tǒng)發(fā)揮抵抗病毒對(duì)人體的損傷，或者增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的抵抗能力，針對(duì)的是已經(jīng)感染病毒的人群。HIV疫苗實(shí)驗(yàn)研究的現(xiàn)狀當(dāng)前用于治療HIV感染的藥物只能傳統(tǒng)疫苗技術(shù)獲得的疫苗:減毒活疫苗滅活疫苗采用現(xiàn)代生物技術(shù)獲得的疫苗：重組蛋白疫苗

DNA疫苗病毒載體疫苗有些疫苗已完成了Ⅲ期臨床研究，有些正在進(jìn)行Ⅰ或Ⅱ期臨床研究，但大部分仍處在實(shí)驗(yàn)室研究階段。目前HIV疫苗的研究傳統(tǒng)疫苗技術(shù)獲得的疫苗:目前HIV疫苗的研究一、減毒活疫苗到目前為止，進(jìn)行過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的免疫缺陷病毒疫苗中，減毒活疫苗的保護(hù)效果是最好的。但經(jīng)過長(zhǎng)期觀察，試驗(yàn)動(dòng)物全部感染減毒株，并發(fā)展為AIDS樣癥狀，分析病毒基因發(fā)現(xiàn)nef基因修復(fù)了12個(gè)核苷酸的缺失.研究者刪除vpr基因經(jīng)過長(zhǎng)期追蹤觀察,也存在同樣的問題。AnitaMilicic等人對(duì)nef的三個(gè)保守區(qū)進(jìn)行突變。結(jié)果表明，突變后的基因?qū)Φ鞍酌阁w的表位加工有很大的影響。因此，HIV-1減毒活疫苗的安全性問題制約了它的發(fā)展。一、減毒活疫苗到目前為止，進(jìn)行過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的免疫缺陷病毒疫苗中二、滅活疫苗Murphey-Corb等使用5%～8%甲醛溶液滅活的SIV病毒免疫9只獼猴，在10倍SID50(50%simianinfectiousdose)劑量滅活病毒原始株攻毒中，全部免于感染。但當(dāng)使用其他毒株攻擊時(shí)，幾乎沒有保護(hù)效果，分析表明保護(hù)作用與抗體反應(yīng)有關(guān)。使用滅活疫苗在HIV-1感染者中進(jìn)行的早期人體試驗(yàn)也沒有取得預(yù)防感染和控制病毒復(fù)制的效果，同時(shí)由于沒有確證病毒滅活完全性的手段，難以保證不會(huì)發(fā)生由于病毒滅活不完全而導(dǎo)致感染的情況，滅活疫苗的研究受到了很大的限制。二、滅活疫苗Murphey-Corb等使用5三、蛋白疫苗目前的研究表明，HIV-1的糖類是主要的抵抗宿主攻擊的物質(zhì)，那么疫苗的設(shè)計(jì)就可以針對(duì)這些糖類。gp120是廣泛的中和抗體2G12的表位，這項(xiàng)研究表明HIV疫苗的研究朝著糖蛋白疫苗的方向發(fā)展著。HIV膜區(qū)蛋白的結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，既含有復(fù)雜的立體構(gòu)像，中和性抗體多為構(gòu)像依賴性抗體，又含有多糖基化位點(diǎn)，過多的糖基化可能會(huì)掩蓋中和抗體位點(diǎn)的暴露，而且HIV自然感染機(jī)體后所誘導(dǎo)的中和抗體普遍較弱。這些現(xiàn)象提示單純模仿HIV膜蛋白天然的抗原結(jié)構(gòu)研制的疫苗將不會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的而且廣譜的中和抗體。因此，目前國(guó)際上研究的重點(diǎn)是根據(jù)HIV膜蛋白的基本特點(diǎn)設(shè)計(jì)新的免疫原，或?qū)μ烊坏哪さ鞍走M(jìn)行改造，其目的是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生廣譜而且較強(qiáng)的中和抗體。三、蛋白疫苗目前的研究表明，HIV-1的糖類四、DNA疫苗近來科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了HIV制造的Vif蛋白質(zhì)，Vif可以制約人體內(nèi)的一種稱為A3G的蛋白質(zhì)。A3G是一種阻止HIV復(fù)制的蛋白質(zhì)人體內(nèi)，如果沒有Vif，A3G蛋白質(zhì)可以侵入病毒。取出病毒中的部分DNA的片段，這樣病毒就不能起作用了。這對(duì)于研究抗HIV病毒藥品和疫苗有巨大的參考價(jià)值。DNA疫苗進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)部表達(dá)所攜帶的外源基因，在誘發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)方面具有優(yōu)勢(shì)。HIVDNA疫苗研究中多采用包括多個(gè)病毒基因的方式來增加細(xì)胞免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和廣泛性。質(zhì)粒DNA進(jìn)入細(xì)胞核表達(dá)外源蛋白，能進(jìn)行正確的翻譯后加工并保持天然構(gòu)像，在誘發(fā)體液免疫反應(yīng)方面具有特殊優(yōu)勢(shì)。四、DNA疫苗近來科學(xué)家發(fā)現(xiàn)了HIV制造的Vif蛋白質(zhì)，五、病毒載體疫苗

為了增加外源基因進(jìn)入宿主體細(xì)胞的能力和表達(dá)效率，增加疫苗誘發(fā)的免疫反應(yīng)強(qiáng)度，研究者發(fā)展了多種活病毒載體疫苗。其中最具代表性的是痘病毒載體。從安全性和免疫效果綜合考慮，MVA為其中的佼佼者，MVA為Ankara株痘病毒在雞胚細(xì)胞中經(jīng)過570次傳代，獲得丟失六處共長(zhǎng)達(dá)10kb基因片斷限制了其宿主細(xì)胞譜系的減毒株。不同于一些保留較強(qiáng)復(fù)制能力的痘病毒減毒株通過刪除病毒的細(xì)胞因子(如IFN-γ)受體為減毒手段，并以宿主能產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的特異性免疫反應(yīng)為前提來確保安全性。五、病毒載體疫苗為了增加外源基因進(jìn)入宿主體細(xì)六、病毒樣顆粒疫苗病毒樣顆粒是含有某種病毒的一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的空心顆粒,沒有病毒的核酸(DNA/RNA),不能自主復(fù)制,其在形態(tài)上與真正病毒粒子相同或相似,可通過和病毒感染一樣的途徑呈遞給免疫細(xì)胞,有效地誘導(dǎo)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫保護(hù)反應(yīng)。病毒的衣殼蛋白一般具有天然的自我裝配能力。由于VLPs沒有感染性,作為免疫原,它可通過和病毒感染一樣的途徑呈遞給免疫細(xì)胞,有效地誘導(dǎo)機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫保護(hù)反應(yīng)。六、病毒樣顆粒疫苗病毒樣顆粒是含有某種病毒的一個(gè)或多個(gè)結(jié)七、治療性疫苗艾滋病被稱為“世紀(jì)瘟疫”，人類至今尚未找到醫(yī)治這一頑癥的理想方法?，F(xiàn)在普遍采用的“雞尾酒”療法，就是讓患者服用抗逆轉(zhuǎn)錄酶等抗病毒藥物，以控制病情的進(jìn)一步發(fā)展，但它無法完全殺滅病毒，而且還會(huì)產(chǎn)生毒副作用。用“治療疫苗”抑制艾滋病毒的新思路的原理是：既然艾滋病患者最主要的問題是免疫功能的喪失，那么只要找到一種能夠有效觸發(fā)并恢復(fù)其自身免疫能力的方法，病情應(yīng)該可以得到控制。七、治療性疫苗艾滋病被稱為“世紀(jì)瘟疫”，人類至今尚未找到感染HIV的T細(xì)胞（紅色為HIV病毒，綠色為宿主細(xì)胞）加拿大和美國(guó)研究人員21日在英國(guó)《自然—醫(yī)學(xué)》發(fā)表論文稱，他們發(fā)現(xiàn)了可能會(huì)徹底治愈艾滋病的新方法，艾滋病將有可能不再是不治之癥。治愈艾滋病的關(guān)鍵在于找到艾滋病病毒潛伏池。研究人員說，他們找到了這種潛伏池，即記憶T細(xì)胞。他們提出了結(jié)合化學(xué)療法和抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法來治療艾滋病的新方法，其中，抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法殺死人體內(nèi)大部分艾滋病病毒，而化學(xué)療法則專門針對(duì)“躲藏”在記憶T細(xì)胞中的艾滋病病毒，這使得艾滋病病毒在人體中再無藏身之地。HIV的新藏身之處感染HIV的T細(xì)胞（紅色為加拿大和美國(guó)研究人員美國(guó)《科學(xué)》雜志發(fā)表了由浙江大學(xué)教授于曉方領(lǐng)導(dǎo)的科研小組的研究成果，揭示了艾滋病發(fā)病的新機(jī)理。該研究在國(guó)際上首先發(fā)現(xiàn)一組使HIV避過人體細(xì)胞天然防御系統(tǒng)而在人體細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制的蛋白，闡明了HIV突破宿主細(xì)胞防御系統(tǒng)分子機(jī)制，并提出了新的HIV防治策略。這組蛋白的發(fā)現(xiàn)對(duì)于了解HIV如何戰(zhàn)勝宿主防御系統(tǒng)至為關(guān)鍵，有望成為HIV治療的新靶點(diǎn)，從而為預(yù)防和治療艾滋病提供了一種全新的理念和途徑，具有十分重大的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

HIV突破宿主細(xì)胞防御系統(tǒng)分子機(jī)制美國(guó)《科學(xué)》雜志發(fā)表了由浙江大學(xué)教授于曉方領(lǐng)美國(guó)科研人員最近利用基因技術(shù)成功遏制老鼠體內(nèi)的艾滋病病毒，這一方法為控制艾滋病病毒增殖提供了新思路。美國(guó)南加州大學(xué)的葆拉·坎農(nóng)等人在新一期英國(guó)《自然-生物工藝學(xué)》雜志上報(bào)告說，他們用老鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)，借助一種名為cutter的酶，刪除了未成熟造血細(xì)胞中的CCR5蛋白基因，因此這些細(xì)胞成熟分化時(shí)不會(huì)產(chǎn)生CCR5蛋白。CCR5蛋白是艾滋病病毒入侵機(jī)體細(xì)胞的“幫兇”。研究人員把這些細(xì)胞注入感染了艾滋病病毒的老鼠體內(nèi)，并把它們與感染艾滋病病毒的普通老鼠進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)12周后在接受注射的老鼠體內(nèi)，免疫T細(xì)胞水平有所恢復(fù)，艾滋病病毒含量保持在較低水平。而對(duì)照組老鼠的免疫系統(tǒng)能力減弱，艾滋病病毒大量分裂增殖?；蚣夹g(shù)遏制艾滋病毒美國(guó)科研人員最近利用基因技術(shù)成功遏制老鼠體內(nèi)的艾滋病病毒，這能誘發(fā)有效的中和抗體，阻止HIV感染免疫細(xì)胞；能誘發(fā)強(qiáng)細(xì)胞免疫；中和抗體屏障被部分突破時(shí)能有效清除被感染細(xì)胞，是研究中應(yīng)統(tǒng)籌考慮的。AIDS疫苗研究方向：能誘發(fā)有效的中和抗體，阻止HIV感染免疫細(xì)胞；AIDS疫苗研（二）肝炎病毒疫苗P168中國(guó)不僅是一個(gè)人口大國(guó)，而且也是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)。目前已知的甲、乙、丙、丁、戊、己、庚及TTV型肝炎，在我國(guó)均有發(fā)生，其中尤以甲、乙、丙、戊4個(gè)型別的流行情況嚴(yán)重。

僅乙肝病毒攜帶者以達(dá)1.2億之多。可以說，病毒性肝炎是對(duì)我國(guó)危害最為嚴(yán)重的傳染病。

（二）肝炎病毒疫苗P168中國(guó)不僅是一個(gè)人口大國(guó)，而且也是病世界性急性傳染病占病毒性肝炎的50％年發(fā)病數(shù)超過200萬1.甲型肝炎世界性急性傳染病1.甲型肝炎一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)、結(jié)構(gòu)與抵抗力球形，單正鏈RNA，無包膜。病毒顆粒在電鏡下呈現(xiàn)為實(shí)心和空心兩種顆粒，實(shí)心顆粒為成熟的完整病毒體，具有感染性；空心顆粒缺乏病毒核酸。一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)、結(jié)構(gòu)與抵抗力HAV電鏡圖HAV電鏡圖HAV的結(jié)構(gòu)HAV的結(jié)構(gòu)

甲肝疫苗減毒活疫苗（我國(guó)已廣泛使用）滅活疫苗甲肝疫苗2、乙型肝炎病毒（HBV）疫苗2、乙型肝炎病毒（HBV）疫苗乙型肝炎病毒

（HEPATITISBVIRUS）形態(tài)結(jié)構(gòu)：乙肝患者血清中發(fā)現(xiàn)3種相關(guān)顆粒小球形顆粒管形顆粒：小球形顆粒串連成大球形顆粒：為完整的病毒顆粒，具傳染性（DANE顆粒）:DNA、逆轉(zhuǎn)錄酶乙型肝炎病毒

（HEPATITISBVIRUS）形態(tài)結(jié)構(gòu)（1）大球形顆粒：又稱Dane顆粒為有感染性的完整的乙型肝炎病毒顆粒，直徑為42nm，具有雙層衣殼。外衣殼：相當(dāng)于一般病毒的包膜，由脂質(zhì)雙層與蛋白質(zhì)構(gòu)成。HBsAg抗原鑲嵌于脂質(zhì)雙層中。內(nèi)衣殼：是20面體對(duì)稱，相當(dāng)于一般病毒的衣殼。衣殼蛋白即HBcAg，HBcAg經(jīng)酶或去垢劑作用后，可暴露出HBeAg。內(nèi)部含有病毒DNA和DNA多聚酶（即具有以RNA為模板轉(zhuǎn)錄DNA的逆轉(zhuǎn)錄酶功能，又有合成DNA的功能）。（1）大球形顆粒：又稱Dane顆粒為有感染性的完整的乙型肝炎Dane顆粒Dane顆粒基因工程病毒疫苗--ppt課件直徑22nm，不含DNA和DNA多聚酶，主要成分為HBsAg，是病毒多余的衣殼成分，不具傳染性。大量存在于血流中。HBV的小球形顆粒直徑22nm，不含DNA和DNA多聚酶，主要成分為HBsAgHBV的小球形顆粒HBV的小球形顆粒是一串聚合的小球形顆粒，具有與HBsAg相同的抗原性。也存在于血液中。HBV的管形顆粒是一串聚合的小球形顆粒，具有與HBsAg相同的抗原性。HBVHBV的管形顆粒HBV的管形顆粒HBV的抗原組成表面抗原HBsAg核心抗原HBcAge抗原HBeAgHBV的抗原組成（1）表面抗原（HBsAg）是HBV的外衣殼抗原，存在于Dane顆粒外衣殼、小球形顆粒和管形顆粒上。HBsAg大量存在于感染者血中，是檢查機(jī)體是否受HBV感染的主要指標(biāo)。相反，血清中出現(xiàn)抗－HBs被認(rèn)為是乙型肝炎恢復(fù)的標(biāo)志。HBsAg是HBV吸附于肝細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性保護(hù)抗體抗－HBs，因此HBsAg是制備疫苗的最主要成分。HBsAg有不同亞型，各亞型均具有共同的

抗原表位，制備疫苗時(shí)各亞型間有交叉保護(hù)作用。（1）表面抗原（HBsAg）（2）核心抗原（HBcAg）是HBV的內(nèi)衣殼抗原，因其表面有HBsAg覆蓋故難以在血循環(huán)中檢測(cè)到。HBcAg存在于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)并在肝細(xì)胞膜上表達(dá)，是CTL識(shí)別和攻擊的主要抗原之一。刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,抗－HBcIgM的檢出提示近期HBV感染，體內(nèi)病毒在復(fù)制；抗－HBcIgG在血清中持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，常提示既往感染過HBV，為非保護(hù)性抗體。（2）核心抗原（HBcAg）是HBV的內(nèi)衣殼抗原，因其表面有存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，隱蔽或鑲嵌于HBcAg中，是隱蔽的抗原決定簇，當(dāng)HBV內(nèi)衣殼裂解時(shí)釋放出來，可游離存在于血清中，其消長(zhǎng)與病毒體及DNA聚合酶的消長(zhǎng)基本一致，可作為HBV復(fù)制及具有強(qiáng)感染性的一個(gè)指標(biāo)。刺激機(jī)體產(chǎn)生抗－HBe，此抗體常在HBsAg滴度降低，HBeAg消失時(shí)出現(xiàn)，能與受染肝細(xì)胞表面的HBeAg結(jié)合，通過補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用破壞受染的肝細(xì)胞，有一定的保護(hù)作用，被認(rèn)為是預(yù)后良好的征象。（3）e抗原（HBeAg）存在于Dane顆粒核心結(jié)構(gòu)表面，隱蔽或鑲嵌于HBcAg中，是HBV抗原、抗體的檢測(cè)及意義臨床主要檢測(cè)：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe及抗-HBc，俗稱乙肝兩對(duì)半。HBV抗原、抗體的檢測(cè)及意義臨床主要檢測(cè)：HBsAg、抗-HHBsAg：血清中HBsAg出現(xiàn)，意味著HBV的現(xiàn)癥感染，是乙肝血清學(xué)檢查最重要的指標(biāo)。HBsAg陽性者具有傳染性，禁止獻(xiàn)血，若同時(shí)有HBeAg或HBVDNA陽性，傳染性更強(qiáng)?？?HBs：乙肝表面抗體,是HBsAg誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的一種保護(hù)性抗體，在HBsAg消失后數(shù)周出現(xiàn)，并可持續(xù)多年存在，是所有乙肝相關(guān)抗體中出現(xiàn)最晚的?？?HBs陽性說明機(jī)體對(duì)乙肝病毒有了免疫力

HBsAg：血清中HBsAg出現(xiàn)，意味著HBV的現(xiàn)癥感染，是HBeAg：是一種可溶性蛋白抗原，HBeAg陽性提示HBV在體內(nèi)復(fù)制，有較強(qiáng)的傳染性。轉(zhuǎn)陰表示病毒復(fù)制停止，持續(xù)陽性有發(fā)展成慢性肝炎的可能性?？?HBe：有一定保護(hù)性作用。血清中抗-HBe的檢出意味著病毒復(fù)制中止或減少。HBeAg：是一種可溶性蛋白抗原，HBeAg陽性提示HBV在HBcAg：位于內(nèi)衣殼，在外周血中測(cè)不出?？?HBc：抗-HBcIgM是病毒在機(jī)體內(nèi)復(fù)制的標(biāo)志，出現(xiàn)于急性乙肝早期，滴度很高，慢性乙肝滴度低，可持續(xù)陽性?？?HBcIgG出現(xiàn)晚，是繼往感染的指標(biāo)，可持續(xù)數(shù)年。當(dāng)HBsAg消失，而抗-HBs還未出現(xiàn)時(shí)，常只能檢出抗-HBc，臨床稱此階段為“窗口期”。HBcAg：位于內(nèi)衣殼，在外周血中測(cè)不出。HBsAgHBeAg抗HBs抗HBe抗–HBcIgMIgG結(jié)果分析＋－－－－－HBV感染者或無癥狀HBV攜帶者＋＋－－＋－急性乙型肝炎（傳染性強(qiáng)，“大三陽”）＋－－＋－＋急性感染趨向恢復(fù)（“小三陽”）＋＋－－＋＋急性或慢性乙型肝炎，或無癥狀HBV攜帶者－－＋＋－＋乙型肝炎恢復(fù)期－－－－－＋既往感染－－＋－－－感染過HBV或接種過乙肝疫苗

病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果分析HBsAgHBeAg抗HBs抗HBe抗–HBc結(jié)果分析＋－－使用的疫苗有：乙肝血源性疫苗基因工程乙肝疫苗（酵母系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)）合成肽乙肝疫苗乙肝DNA疫苗使用的疫苗有：（1）目前存在的問題：人群中約10%左右對(duì)現(xiàn)有乙肝疫苗（僅含S抗原的疫苗）無反應(yīng)；（2）研制方向：使用含前S（主要是前SI）的新一代乙肝基因工程疫苗，可使對(duì)現(xiàn)有S乙肝疫苗無反應(yīng)的人群產(chǎn)生良好的免疫反應(yīng)。目前，含前S的疫苗，新佐劑乙肝疫苗，乙肝抗原抗體復(fù)合物疫苗，治療性乙肝疫苗是研究的熱點(diǎn)。（1）目前存在的問題：人群中約10%左右對(duì)現(xiàn)有乙肝疫苗（僅含3.丙型肝炎病毒（HCV）疫苗

丙型肝炎感染約占人群2%左右，也就是有2000多萬感染者，大部分都會(huì)轉(zhuǎn)為慢性，并導(dǎo)致肝硬化和肝癌，危害遠(yuǎn)大于乙肝。研究方向：①多數(shù)實(shí)驗(yàn)集中于使用病毒外膜蛋白E1+E2研制病毒樣顆粒的亞單位疫苗②使用載體進(jìn)行重組活疫苗研究③選擇變異不大且能誘發(fā)細(xì)胞免疫的抗原是目前研究的重要的方向之一。3.丙型肝炎病毒（HCV）疫苗4、戊型肝炎病毒（HEV）疫苗戊型肝炎病毒屬杯狀病毒科，單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約7.4kb。經(jīng)消化道傳播，暴發(fā)流行和散發(fā)兩種，戊型肝炎的臨床表現(xiàn)比甲型肝炎重。

戊型肝炎疫苗均為基因工程疫苗，主要包括基因重組蛋白疫苗和DNA疫苗4、戊型肝炎病毒（HEV）疫苗3.輪狀病毒疫苗3.輪狀病毒疫苗基因工程病毒疫苗--ppt課件基因工程病毒疫苗--ppt課件基因工程病毒疫苗--ppt課件

核心：負(fù)單股RNA、7~8個(gè)節(jié)段（易變異原因）內(nèi)層：核衣殼核蛋白（NP）

RNA多聚酶

中層：內(nèi)膜蛋白（M蛋白）外層：包膜，雙層脂質(zhì)

其上有兩種突起的表面抗原：

血凝素HA

神經(jīng)氨酸酶NA4.流感疫苗P175流感病毒生物學(xué)性狀核流感病毒滅活疫苗是目前注冊(cè)的唯一人用流感疫苗正在研制的主要有：減毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、通用疫苗流感病毒滅活疫苗是目前注冊(cè)的唯一人用流感疫苗肌肉注射劑型鼻腔噴霧型甲型H1N1流感疫苗劑型肌肉注射劑型

5.呼吸道合胞病毒疫苗

呼吸道合胞病毒（RSV）屬單股副鏈RNA病毒，是引起嬰幼兒肺炎的主要病因。RSV保護(hù)性抗原主要是其糖蛋白F和G，高度糖化蛋白，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，屬結(jié)構(gòu)依賴性抗原，產(chǎn)生中和抗體的能力都很差，給研制RSV蛋白亞單位疫苗帶來了一定困難。5.呼吸道合胞病毒疫苗

研制方向：目前研制的高度減毒的非復(fù)制型載體是研制該疫苗的重要途徑；制備減毒活疫苗是RSV疫苗研制的另一個(gè)重要途徑;

負(fù)鏈RNA病毒cDNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的成功給使用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)制備RSV的分子減毒活疫苗帶來了希望，也是目前RSV疫苗研制重要途徑。

6、單純皰疹病毒（HSV）疫苗（1）危害：?jiǎn)渭儼捳畈《居袃煞N類型（HSVI和HSVII），在人群中感染相當(dāng)廣泛。HSVI人群感染率高到50%-90%，多為隱性潛伏性感染。母嬰傳播中皰疹性角膜炎視力障礙新生兒死亡率高達(dá)60%。在病毒性腦炎中，HSVI型感染引起的占10%。HSVII主要經(jīng)過性傳播，病毒檢出率可達(dá)5%-12%。HSVII感染是宮頸癌的重要誘因之一。6、單純皰疹病毒（HSV）疫苗（2）方向：

病毒糖蛋白gD和gB是主要的保護(hù)性抗原，與gC、gE、gI聯(lián)合使用可誘生體液和細(xì)胞免疫，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，HSVIIgD的核酸疫苗可以保護(hù)動(dòng)物免受感染及隨后的潛伏感染，這些研究為單純皰疹病毒疫苗的研究提供了有力的證據(jù)。（2）方向：7、人巨細(xì)胞病毒（HMV）疫苗（1）危害：

HMV屬皰疹病毒科，通常為隱性感染，無明顯臨床癥狀。然而HMV的潛伏感染將對(duì)人體健康造成極大威脅。（2）問題：該疫苗株雖能誘發(fā)體液和細(xì)胞免疫，但保護(hù)作用不強(qiáng)，且其潛在的致癌性，以及尚未能最終排除的潛伏感染性，使該類活疫苗尚未能廣泛使用。7、人巨細(xì)胞病毒（HMV）疫苗（3）研制方向：

目前使用分子生物學(xué)技術(shù)，有目的地去除與與毒力、潛伏及腫瘤相關(guān)基因的分子減毒疫苗株正在研制中?；蚬こ碳夹g(shù)表達(dá)的gB做亞單位疫苗或重組活疫苗的研究已成為目前HMV疫苗研究的一個(gè)重要方向。（3）研制方向：8.人類乳頭狀瘤病毒疫苗人類乳頭瘤病毒（HPV）與宮頸癌有密切關(guān)系人類乳類瘤病毒疫苗：四價(jià)疫苗（HPV4）針對(duì)HPV6、11、16和18型；二價(jià)疫苗（HPV2）針對(duì)HPV16和18型。8.人類乳頭狀瘤病毒疫苗人類乳頭瘤病毒（HPV）與宮頸癌有9、登革熱病毒疫苗（Denguefevervirusvaccine）（1）危害：登革熱病毒屬黃病毒科，為單股正鏈RNA病毒，有4個(gè)血清型，蚊子叮咬傳播給人，在我國(guó)南方熱帶亞熱帶地區(qū)發(fā)生過多次登革熱流行。9、登革熱病毒疫苗（Denguefevervirus（2）方向：

①通過表達(dá)prM-E形成病毒樣顆粒的亞單位疫苗顯示了較好安全性和免疫保護(hù)性，是該疫苗研究的重要方向。②使用該病毒感染性cDNA進(jìn)行的分子減毒活疫及多種亞型嵌合的減毒活疫苗研究也取得了較好效果，是另一個(gè)重要途徑。

（2）方向：10、Epstein-Barr病毒（EB）疫苗（1）危害：EB病毒為皰疹病毒科，嗜淋巴細(xì)胞病毒屬，感染廣泛，90%以上成人都感染過此病毒。（2）方向：①阻斷其原發(fā)感染；②清除鼻咽癌細(xì)胞。

10、Epstein-Barr病毒（EB）疫苗（3）方法：前者主要以EBV的MA（如gp350）為免疫原，gp350亞單位疫苗和表達(dá)gp350的重組痘苗病毒活疫苗顯示了一定抗瘤作用；后者主要以EBV的潛伏膜蛋白LMP1和LMP2為免疫原，進(jìn)行了多肽、重組活疫苗、DNA疫苗免疫細(xì)胞疫苗等多種嘗試。（3）方法：11、埃博拉病毒（EBV）疫苗vaccine）

埃博拉病毒是單股負(fù)鏈RNA病毒，屬絲狀病毒，致死率極高。致病機(jī)制尚不清楚，曾試用過滅活疫苗，效果不好，減毒疫苗存在危險(xiǎn)性，至今尚未成功。

11、埃博拉病毒（EBV）疫苗vaccine）

第五節(jié)我國(guó)基因工程病毒疫苗的開發(fā)戰(zhàn)略一、明確基因工程病毒疫苗研開的重點(diǎn)1常規(guī)技術(shù)不能或很難解決的新疫苗①不能或難于培養(yǎng)的病原體；②有潛在致癌性或免疫病理作用的病原體。第五節(jié)我國(guó)基因工程病毒疫苗的開發(fā)戰(zhàn)略2、傳統(tǒng)疫苗的改造主要針對(duì)免疫效果差，負(fù)反應(yīng)大，成本較高和使用不方便的傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行改造（如流感、乙腦等）。3、加強(qiáng)治療性疫苗研究近年來，使用疫苗進(jìn)行疾病治療的研究發(fā)展迅速，對(duì)引起慢性或持續(xù)性感染或與誘發(fā)腫瘤十分相關(guān)的病毒病，治療性疫苗的研究將具有重要性。2、傳統(tǒng)疫苗的改造4、發(fā)展多價(jià)疫苗

多價(jià)疫苗成本低，免疫程序簡(jiǎn)單，是疫苗研究的發(fā)展方向。其發(fā)展方向?yàn)椋?/p>

①使用基因工程技術(shù)對(duì)傳統(tǒng)疫苗進(jìn)行改造，獲得聯(lián)合疫苗；②發(fā)展具有高導(dǎo)入、高表達(dá)、強(qiáng)免疫、可加強(qiáng)的新型載體。4、發(fā)展多價(jià)疫苗二、目標(biāo)的選擇要以社會(huì)和市場(chǎng)需求為導(dǎo)向

1、研制預(yù)防我國(guó)嚴(yán)重病毒病的疫苗放在重點(diǎn)位置2、大力發(fā)展有市場(chǎng)前景新型疫苗

二、目標(biāo)的選擇要以社會(huì)和市場(chǎng)需求為導(dǎo)向

三、加強(qiáng)新型疫苗的基礎(chǔ)研究

1、加強(qiáng)疾病免疫保護(hù)機(jī)制的研究（Intensifytheresearchofimmunityprotectionmechanism）(1)選取病原體的某些抗原或某些抗原表位，或刪除某些無用甚至有害的組分而構(gòu)成的，因而必須了解這些抗原、表位或組分在病原體致病和免疫中的作用和機(jī)體對(duì)它們的應(yīng)答。三、加強(qiáng)新型疫苗的基礎(chǔ)研究(2)一些發(fā)病和免疫機(jī)制比較簡(jiǎn)單的疾病已用常規(guī)疫苗解決了，留下的是一些比較復(fù)雜和較難解決的疾病或問題，例如呼吸道、腸道和生殖系統(tǒng)黏膜感染，其病原體常多型善變；易于產(chǎn)生持續(xù)感染基因整合的病毒；免疫病理機(jī)制不清的病毒；病原體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，發(fā)育階段多，免疫保護(hù)作用不強(qiáng)；