壇紫菜人工育苗技術(shù)規(guī)范

DB3302/T063—2016DB3302/T063—2016壇紫菜人工育苗技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了壇紫菜人工育苗的術(shù)語與定義、育苗設(shè)施、育苗前準(zhǔn)備、果孢子接種、自由絲狀體接種、貝殼絲狀體培養(yǎng)、采殼孢子苗、低溫保藏等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于將培養(yǎng)的壇紫菜自由絲狀體或種菜的果孢子接種到貝殼上，以及在自然光條件下培育貝殼絲狀體并將殼孢子采集到苗網(wǎng)上的過程。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)NY5362無公害食品海水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件NY/T394-2013綠色食品肥料使用準(zhǔn)則NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。果孢子壇紫菜葉狀體上的一種孢子，圓形，直徑10μm～13μm。由果胞受精后多次分裂成為果孢子囊，果孢子囊產(chǎn)生果孢子。絲狀體呈纖絲狀，伸出于菌體外，由鞭毛蛋白緊密排列并纏繞而成的中空管狀結(jié)構(gòu)。紫菜生活史中的有性世代，即小紫菜。自由絲狀體果孢子在培養(yǎng)液或者瓊脂培養(yǎng)基等不能鉆殼的條件下，萌發(fā)成為的游離絲狀體。貝殼絲狀體由果孢子或自由絲狀體切段附著在貝殼上萌發(fā)并鉆進(jìn)貝殼生長而成，呈細(xì)長不規(guī)則分枝的單列絲狀體，隨生長發(fā)育其形態(tài)發(fā)生變化，主要包括絲狀藻絲、孢子囊枝形成、殼孢子囊成熟和殼孢子放散等階段。絲狀藻絲貝殼絲狀體發(fā)育的前期階段，藻絲直徑為2μm～5μm，色素體為帶狀或塊狀。絲狀藻絲繼續(xù)生長形成孢子囊枝。孢子囊枝由絲狀藻絲生長而成，側(cè)枝形成的較粗絲狀體，細(xì)胞內(nèi)有一個星狀色素體，細(xì)胞長度為寬度的2倍～3倍，成熟時長寬約相等。殼孢子囊由孢子囊枝的細(xì)胞生長發(fā)育而成，當(dāng)雙分細(xì)胞出現(xiàn)，孢子囊枝轉(zhuǎn)變?yōu)闅ゆ咦幽?。殼孢子雙分細(xì)胞逐漸成熟為殼孢子，殼孢子在一定條件下放散、萌發(fā)形成紫菜葉狀體。柏蘭尼液按照1%硝酸4份、85%～95%酒精3份、0.5%鉻酸3份混合而成；通過柏蘭尼液的去鈣溶殼，從貝殼中分離出絲狀體，便于鏡檢。壇紫菜人工育苗壇紫菜人工育苗包括育苗的基本設(shè)施、技術(shù)要求、操作方法和苗網(wǎng)的運(yùn)輸方法。寧波市壇紫菜育苗標(biāo)準(zhǔn)化模式圖參見附錄A。育苗設(shè)施選址育苗場應(yīng)建在遠(yuǎn)離河口、周圍無污染、海水獲取方便、交通便利的沿海地區(qū)，產(chǎn)地環(huán)境應(yīng)符合NY5362要求。水質(zhì)要求pH值7.8～8.4、鹽度21～32、溶解氧不低于5mg/L、其他理化指標(biāo)應(yīng)符合GB11607和NY5052要求。育苗室高度與朝向育苗室層高2.5m～4.0m，座北朝南、東西走向。天窗和邊窗育苗室開天窗和邊窗作為采光設(shè)施，天窗總面積約占屋面的1/8～1/4，邊窗數(shù)量(總寬度)占南北墻長度1/2～1/4。天窗和邊窗的內(nèi)側(cè)要配置白色、黑色窗簾，內(nèi)墻涂刷石灰水和涂料。玻璃鋼頂?shù)慕Y(jié)構(gòu)，內(nèi)部需要配置保溫板，頂與池之間配置黑色的遮陽網(wǎng)。育苗池育苗池長方形，面積不少于15m2，與育苗室平行或垂直。吊掛培育池深0.6m～0.7m，平面培育池深0.3m～0.4m。池底應(yīng)有2‰～3‰的坡度，排水口處設(shè)0.5m×0.5m×0.1m～0.2m的凹井。配置相應(yīng)的進(jìn)排水管，進(jìn)排水管可用PE管或PVC管。供水設(shè)施蓄水池應(yīng)有黑暗遮蓋物。貯水量是育苗池水體的2倍以上，一般高位設(shè)置，隔成2只以上，配有排污設(shè)施。育苗前準(zhǔn)備育苗池處理新池用海水換水浸泡一個月以上，使浸泡水pH值低于8.5，舊池洗刷干凈方可使用。海水處理抽取潮面0.5m以下的海水，經(jīng)黑暗沉淀72h以上作為育苗用的清潔海水。附著基選擇選用殼長4cm～10cm的文蛤殼，或殼長8cm～15cm的扇貝殼，或牡蠣殼；以新殼為宜。處理充分浸泡，剔除殘留物，用淡水洗凈曬干備用。吊掛培育時，將附著基穿孔成串，文蛤殼每串7對～9對，扇貝殼每串5對～7對，總長度40cm～55cm，每平方米育苗池文蛤殼吊掛70串～80串，扇貝殼吊掛50串～60串。平面培育貝殼呈魚鱗狀單層排列，每平方米鋪放貝殼600只～1000只。器具配備水泵、大小適中的容器、水勺、量杯、噴壺、溫度計(jì)、海水比重計(jì)、顯微鏡、計(jì)數(shù)器、吸管、載玻片等器具。種菜采集人工培育的種菜成熟即可選采，野生的種菜在清明節(jié)前后選采。要求種菜藻體健壯，具有光澤，沒有硅藻附著，肉眼可見葉片邊緣有明顯深紫紅色斑塊。顯微鏡檢查見成熟的果孢子囊群。處理和保藏新鮮種菜用海水洗凈、脫水、陰干即可使用。保藏種菜應(yīng)預(yù)先將挑選的種菜用海水洗凈、脫水、陰干，待藻體出現(xiàn)鹽霜時，再裝入聚乙烯袋，密封包裝，貼上標(biāo)簽放入冷庫或冰柜保存，溫度控制在–24℃～-18℃，保藏備用。自由絲狀體要求采用生長正常，光澤與顏色正常，無硅藻、藍(lán)藻等其他生物附著的自由絲狀體。果孢子接種采果孢子選擇清明前后的晴天上午，將陰干的種菜放入容器內(nèi)加入海水?dāng)嚢璐碳?。海水與種菜重量比例不低于10︰1。低溫保藏的種菜，需室溫自然解凍，用海水清洗1遍～2遍，然后再放入海水中攪拌，刺激放散，吸取水樣，鏡檢果孢子的放散數(shù)量和質(zhì)量。1h～2h后，取出種菜，用4層～6層紗布或80目～120目篩絹過濾果孢子水。檢測每毫升果孢子水中的果孢子數(shù)，并計(jì)算各池需要的果孢子水量。種菜可重復(fù)陰干使用。接種果孢子投放數(shù)量按育苗池水體計(jì)算，密度為每毫升300個～500個，用噴壺將孢子水均勻噴灑至準(zhǔn)備好貝殼的池水中。自由絲狀體接種方法在4月～6月，將自由絲狀體用搗碎機(jī)點(diǎn)切，切段長度為200μm～400μm，均勻撒播在平鋪的貝殼上，遮光3天。控制水深0.2m～0.3m。培育15天后，鏡檢，形成明顯藻落后，可洗刷換水或掛起來吊育。密度接種的密度為:3段/mm2～5段/mm2。貝殼絲狀體培養(yǎng)培養(yǎng)期從接種果孢子或者自由絲狀體到9月份采殼孢子苗。培養(yǎng)條件水溫水溫為22℃～29℃，夏季連續(xù)高溫期間，可采取加大水體、白天防暴曬、晚上開窗等措施調(diào)控溫度；孢子囊枝形成后，應(yīng)注意保溫，防止水溫劇烈變化。光照根據(jù)發(fā)育期進(jìn)行光照的調(diào)節(jié)，避免直射光照，見表1。絲狀體生長發(fā)育對光照的要求果孢子萌發(fā)期絲狀藻絲期孢子囊枝期殼孢子囊期光照時間h光強(qiáng)lux光照時間h光強(qiáng)lux光照時間h光強(qiáng)lux光照時間h光強(qiáng)lux自然日照1000～150012以上300012～81000～150010～8500～1000施肥視海水水質(zhì)肥廋、換水情況和培育階段而定，一般保持育苗水中NO3-N濃度為5mg/L～15mg/L，PO4-P濃度為0.5mg/L～10mg/L，施用的肥料應(yīng)符合NY/T394-2013要求。不同時期施肥量見表2。不同時期施肥量單位為mg/L肥料果孢子萌發(fā)期絲狀藻絲期孢子囊枝期殼孢子囊形成期氮肥（NO3-N）510～1550磷肥（PO4-P）0.511015管理換水果孢子采苗后4天～5天進(jìn)行全池?fù)Q水；以后視水質(zhì)情況而定，換水時使貝殼保持一定濕度。洗刷采苗后25天～30天進(jìn)行第一次洗刷，以后視貝殼上雜藻、污物附著情況，確定洗刷。采取人工洗刷，或水泵直接沖洗吊育貝殼絲狀體，洗刷貝殼同時徹底清洗育苗池，并調(diào)整貝殼受光位置。生態(tài)調(diào)控在育苗池引進(jìn)活體橈足類，以每個貝殼表面有2個～5個為宜。通過橈足類攝食硅藻等雜藻，可減少洗殼的強(qiáng)度與次數(shù)。到孢子囊枝形成期，采用水泵沖洗，一并將硅藻與橈足類洗去，進(jìn)入促熟期。光照調(diào)節(jié)利用天窗與邊窗的窗簾及遮陽網(wǎng)調(diào)節(jié)光線，在殼孢子放散前一個月進(jìn)行縮光。光照條件應(yīng)符合表1要求。絲狀體檢查方法前期可在低倍顯微鏡下直接檢查貝殼上的絲狀體，后期需取碎殼置容器中，用柏蘭尼液溶殼后取絲狀體鏡檢。內(nèi)容絲狀藻絲密度和形態(tài)、孢子囊枝出現(xiàn)的時間和數(shù)量、殼孢子形成的時間和數(shù)量、雜藻及病害。記錄池水理化因子：光照、溫度、營養(yǎng)鹽、鹽度、pH、換水、施肥；貝殼絲狀體狀況：色澤、藻絲長度、藻絲生長發(fā)育階段及色澤變化、藻絲密度分布和病害等情況。成熟率孢子囊枝中雙分細(xì)胞數(shù)量的百分率為成熟率，成熟率達(dá)30%以上為殼孢子囊形成階段（成熟率%=雙分細(xì)胞對數(shù)/殼孢子囊細(xì)胞總數(shù)×100%）。病害防治適時換水。防止池水溫、光照、鹽度變化過大。洗刷與調(diào)節(jié)光照時，保持貝殼濕潤。采殼孢子苗采苗時間8月底到9月中旬，海區(qū)水溫穩(wěn)定在28℃以下，最適宜為23℃～25℃，具體時間視天氣、海況條件及采苗準(zhǔn)備情況（如每枚貝殼孢子日放散量達(dá)10萬個以上）而定。過早或過遲采苗均直接影響紫菜的生長、病爛和產(chǎn)量。網(wǎng)簾由維尼龍繩或維尼龍和聚乙烯混合繩制成。殼孢子采苗刺激用降溫或流水刺激，促使貝殼上的殼孢子同步放散。采苗將育苗室光線調(diào)至3000Lux以上。在上午7時前，將網(wǎng)簾與貝殼相間均勻鋪至采苗池中。5m2～6m2采苗池面積鋪放180m2網(wǎng)簾。采苗時需有人工潑水或水泵沖水，保持水體流動。應(yīng)經(jīng)常翻動、拉勻，并對調(diào)上下的網(wǎng)簾。附苗用200目篩絹附苗，殼孢子以15個/mm2～25個/mm2為宜；網(wǎng)線散頭單絲附苗，殼孢子以3個/mm～5個/mm為宜；網(wǎng)簾上殼孢子附著密度在1個/mm單絲～2個/mm單絲，苗簾即可出池。出池后，直接下海培育或冷藏保存。苗網(wǎng)運(yùn)輸殼孢子網(wǎng)簾可車運(yùn)、船運(yùn)，避免網(wǎng)簾大量重疊，避免直射光，途中適當(dāng)淋灑海水。低溫保藏殼孢子網(wǎng)簾在干燥與密封的條件下放置在–24℃～–18℃的冷庫中冷藏備用，以綜合利用育苗室的空間，避免不良的生長時期，待條件適宜時下海培育成為幼苗。

（資料性附錄）1下自由絲狀體培養(yǎng)期采殼孢子苗采殼孢子苗1.采苗時間:8月底9月中旬，海區(qū)水溫穩(wěn)定在28℃以下，最適宜為23℃～25℃，具體時間視天氣、海況條件及采苗準(zhǔn)備情況（如每枚貝殼孢子日放散量達(dá)10萬個以上）而定。過早或過遲采苗均直接影響紫菜的生長、病爛和產(chǎn)量。2.附著基:維尼龍繩或維尼龍和聚乙烯混合繩制成的網(wǎng)簾。3.刺激方法:用降溫或流水刺激，促使貝殼上的殼孢子同步放散。4.采苗方法:將育苗室光線調(diào)至3000Lux以上。在上午7時前，將網(wǎng)簾與貝殼相間均勻鋪至采苗池中。5m2～6m2育苗面積鋪放180m2網(wǎng)簾。采苗時需有人工潑水或水泵沖水，保持水體流動。應(yīng)經(jīng)常翻動、拉勻，并對調(diào)上下的網(wǎng)簾。5.附苗密度:用200目篩絹附苗，殼孢子為（15～25）個每平方毫米為宜；網(wǎng)線散頭單絲附苗，殼孢子以（3～5）個每毫米為宜；網(wǎng)簾上殼孢子附著密度在（1～2）個每毫米單絲，苗簾即可出池。6.出池:苗簾出池后，直接下海培育或冷藏保存。A.1寧波市壇紫菜育苗標(biāo)準(zhǔn)化模式圖中上12下中上11下中上10下貝殼絲狀體培育中上9下貝殼絲狀體培育1．時期：從接種貝殼到采殼孢子苗。2.水溫:22℃～29℃，夏季連續(xù)高溫期間，可采取加大水體、白天防暴曬、晚上開窗等措施；殼孢子囊枝形成后，應(yīng)注意保溫，防止水溫劇烈變化。3.根據(jù)發(fā)育期進(jìn)行光照的調(diào)節(jié)，避免直射光照。利用天窗與邊窗的窗簾及遮陽網(wǎng)調(diào)節(jié)光線，縮光是在殼孢子放散前一個月進(jìn)行。4.施肥：視清潔海水水質(zhì)肥廋、換水情況和培育階段而定，一般保持育苗水中NO3-N濃度為5mg/L～15mg/L，PO4-P濃度為0.5mg/L～10mg/L，5.換水：果孢子采苗后4天～5天進(jìn)行全池?fù)Q水；以后視水質(zhì)情況而定，換水時使貝殼保持一定濕度。6.洗刷：果孢子采苗后25天～30天進(jìn)行第一次洗刷，在殼孢子囊形成前視貝殼上雜藻、污物附著情況而確定。洗刷貝殼同時徹底清洗育苗池、換水，并調(diào)整貝殼受光位置。中采殼孢子苗上8下貝殼絲狀體培育期中接種貝殼上7下中上6下中上5下接種貝殼1.果孢子接種貝殼:選擇清明前后的晴天上午，將陰干的種菜放入容器內(nèi)加入清潔海水?dāng)嚢璐碳?。清潔海水與種菜重量比例不低于10︰1。低溫保藏的種菜，需室溫自然解凍，用清潔海水清洗1遍～2遍，然后再放入清潔海水中刺激放散。攪拌刺激，吸取水樣鏡檢果孢子的放散數(shù)量和質(zhì)量。1h～2h后，取出種菜，用4層～6層紗布或篩絹過濾孢子水，檢測每毫升孢子水中的果孢子數(shù)，并計(jì)算各池需要的孢子水量。