腫瘤壞死因子與潰瘍性結(jié)腸炎

關(guān)于腫瘤壞死因子與潰瘍性結(jié)腸炎潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerativecolitisUC）是一種累及結(jié)腸膜和粘膜下層病變的慢性非特異性腸道炎性疾病，臨床表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、粘液膿血便，歐美發(fā)達(dá)地區(qū)發(fā)病率高，我國的發(fā)病率呈逐年上升。群體流行病學(xué)調(diào)查和雙生子研究顯示UC發(fā)病與遺傳、免疫和環(huán)境等因素有關(guān)。第2頁,共23頁，2024年2月25日，星期天腫瘤壞死因子（TumorNecrosisFactorα，TNFα）是一種重要的促炎細(xì)胞因子，具有廣泛的誘導(dǎo)炎癥和免疫調(diào)節(jié)功能。為了探討TNF-α基因多態(tài)性與UC的相關(guān)性，我們采用序列特異引物PCR方法（SSP-PCR）對57例UC患者及127例健康正常人進(jìn)行TNF-α基因多態(tài)性檢測。第3頁,共23頁，2024年2月25日，星期天1資料與方法

1.1研究對象：本院2002.3-2004.10就診漢族UC患者57例，其中男性42例，女性15例，年齡為21～68歲，所有患者都經(jīng)過臨床、實驗室、腸鏡及組織學(xué)檢查,診斷符合2000年成都全國IBD學(xué)術(shù)研討會制定的標(biāo)準(zhǔn)[1]，同時以127名漢族健康體檢者為正常對照組。1.2DNA的提?。喝】鼓?ml,按蛋白酶K消化,鹽析法抽提、純化DNA；第4頁,共23頁，2024年2月25日，星期天1.3TNF-α基因的檢測：根據(jù)文獻(xiàn)

[2]報道的引物序列和方法操作。

1.4統(tǒng)計分析：采用10.0SPSS統(tǒng)計軟件包的χ2卡方檢驗。

第5頁,共23頁，2024年2月25日，星期天2結(jié)果2.1TNFα基因多態(tài)性PCR結(jié)果:見圖1、2和3第6頁,共23頁，2024年2月25日，星期天

ABCM圖1TNF-α-857PCR電泳圖譜

A:CC純合型,B:CT雜合型,C:TT純合型,M:Mark第7頁,共23頁，2024年2月25日，星期天ABCM圖2TNF-α-863PCR電泳圖譜

A：CC純合型B：CA雜合型

C：AA純合型

M:Mark第8頁,共23頁，2024年2月25日，星期天ABCM圖3TNF-α-1031PCR電泳圖譜

A：TT純合型B：TC雜合型

C：CC純合型

M:Mark第9頁,共23頁，2024年2月25日，星期天2.2UC和正常人TNF-α基因檢測結(jié)果：表1中的UC和正常對照組的TNF-α各基因型分布，經(jīng)χ2檢驗，分布符合哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)平衡（p>0.05），表示所選人群具有代表性；UC和對照組二者之間的TNF-α各位點的基因型分布和等位基因頻率的比較，差異無顯著性（p>0.05）；

第10頁,共23頁，2024年2月25日，星期天表1：UC和正常人TNFα基因型和等位基因頻率的分布

組

別

n-857GeneotypeCCTCTT-863GeneotypeCCCAAA-1031GeneotypeTTTCCCUC5745(78.9%)12(21.1%)0(0%)46(80.7%)11(19.3%)0(0.0%)40(70.2%)15(26.3%)2(3.5%)對照組12790(70.9%)35(27.6%)2(1.6%)87(68.5%)38(29.9%)2(1.6%)88(69.3)37(29.1%)2(1.6%)χ2=1.9,P=0.387χ2=3.38,P=0.185χ2=0.766,P=0.092-857alleleCT-863alleleCA-1031alleleTCUC102(89.5%)12(10.5%)103(90.4%)11(9.6%)95(83.3%)19(16.7%)對照組215(84.6%)39(15.4%)212(83.5%)42(16.5%)213(83.9%)41(16.1%)χ2=1.536P=0.215χ2=0.576P=0.448χ2=0.16P=0.9第11頁,共23頁，2024年2月25日，星期天2.3不同地區(qū)人群的TNF-α等位基因比較：表2顯示中國漢族人TNFα的-857(C/T),-863(C/A),-1031(T/C)位點基因多態(tài)性分布同亞洲的日本、韓國人群基本一致,差異無顯著性；-863(C/A),-1031(T/C)位點基因多態(tài)性分布同歐洲的英國、荷蘭、瑞典人群比較差異也無顯著性,但歐洲人群的TNF857T的等位基因頻率明顯高于亞洲人群,差異有顯著性（P<0.05）。第12頁,共23頁，2024年2月25日，星期天表2不同地區(qū)人群TNF-α等位基因頻率比較-857,%

CT-863,%CA-1031,%TC本文

127215(84.6%)39(15.4%)212(83.5%)42(16.5%)213(83.9%)41(16.1%)日本

271446(82.3%)96(17.7%)466(86%)76(14%)455(84.%)87(16%)韓國

200344(86%)56(14%)342(85.5%)58(14.5%)324(81.5%)74(18.5%)英國354410(92.3)*34(7.1)604(85.3)104(14.7)567(80.1)141(19.9)荷蘭222410(92.3%)*34(7.7%)369(83.1)75(16.9)359(80.9)85(19.1)瑞典

254478(94%)*30(6%)422(83%)86(17%)406(80%)102(20.%)*p<0.05

第13頁,共23頁，2024年2月25日，星期天3討論研究發(fā)現(xiàn)在人6號染色體的某些區(qū)域上存在UC的重要的候選基因（IBD3）[6]，腫瘤壞死因子基因位于人類第6號染色體的HLAⅢ類基因區(qū)的一段7kb的DNA上,TNF在UC的發(fā)病機(jī)制中起著重要的作用,UC患者腸黏膜組織、血清及糞便中有較高水平的TNF表達(dá)[7]；第14頁,共23頁，2024年2月25日，星期天TNF-α基因存在多態(tài)性現(xiàn)象，其多態(tài)性位點主要有:238(G→A)，-308(G→A)，857(C→T),-863(C→A)和-1031(T→C),TNF基因多態(tài)性的變化與許多疾病中TNF水平增高有密切關(guān)系,它能影響細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和宿主免疫反應(yīng)[5,8]，尤其是與MHC連鎖的疾病密切相關(guān),第15頁,共23頁，2024年2月25日，星期天但是TNF基因多態(tài)性由于不同種族和不同群體的異質(zhì)性、不同臨床表現(xiàn)、不同研究方法等原因，使得TNF基因多態(tài)性與UC之間相關(guān)性研究的結(jié)論不很一致。

第16頁,共23頁，2024年2月25日，星期天目前報道較多是TNF-308位點研究結(jié)果，墨西哥[9]和匈牙利[10]分別報道：TNF-308位點與UC存在關(guān)聯(lián)，但是墨西哥UC患者的308A基因頻率較對照組增高，匈牙利UC患者的308A基因頻率較對照組減少，國內(nèi)袁岸龍[11]沒有發(fā)現(xiàn)二者之間存在關(guān)聯(lián)。

第17頁,共23頁，2024年2月25日，星期天TNF-α啟動區(qū)的5側(cè)翼的-857C/T，-863C/A,1031T/C基因多態(tài)性位點是1998年發(fā)現(xiàn)的三個新的具有功能性效應(yīng)的多態(tài)性位點[3，12]，實驗發(fā)現(xiàn)：-857T，-863A和-1031C等位基因的轉(zhuǎn)錄啟動子活性比其相應(yīng)的常見型基因的活性高是1.7-2.0倍[3，12];第18頁,共23頁，2024年2月25日，星期天國外近年相繼報道了該三個位點的基因多態(tài)性在一些自身免疫性疾病中作用的研究結(jié)果，VanHeelDA[8]在歐洲北部的高加索人中發(fā)現(xiàn)857T和與UC存在關(guān)聯(lián)，英國的OrchardTR發(fā)現(xiàn)1031C與UC存在關(guān)聯(lián)[13]，而日本NegoroK[14]僅在是否采用類固醇激素治療的UC患者中,發(fā)現(xiàn)857T等位基因頻率存在差異,

在UC患者總體和對照組之間沒有發(fā)現(xiàn)差異。

第19頁,共23頁，2024年2月25日，星期天迄今國內(nèi)涉及TNF啟動區(qū)的5側(cè)翼的857C/T，-863(C/A),1031(T/C)基因多態(tài)性相關(guān)資料的報道較少,本文資料顯示：-857，-863和-1031三個位點基因多態(tài)性與UC之間沒有存在直接關(guān)聯(lián)，提示TNF-857，-863和-1031位點可能不是中國人患UC的主要易感位點基因,TNF基因與UC之間的相互關(guān)系，是否涉及其它位點基因的共同參與以及與UC的不同表型是否相關(guān)，有待進(jìn)一步研究。第20頁,共23頁，2024年2月25日，星期天本文資料顯示：國內(nèi)的TNF-857，-863和-1031位點基