生物二輪復(fù)習(xí)專(zhuān)題拓展雙抗（雙特異性抗體）人-鼠嵌合抗體制備

雙抗（雙特異性抗體）

抗體的結(jié)構(gòu)如圖所示，它有兩條H鏈和兩條L鏈組成。同一物種：恒定區(qū)（FC區(qū)）氨基酸序列恒定，不同抗體:可變區(qū)（Fab區(qū)）（結(jié)合抗原的區(qū)域）氨基酸序列有差異。天然的抗體：左右兩個(gè)可變區(qū)結(jié)構(gòu)完全相同，只能結(jié)合相同的抗原。雙特異性抗體：通過(guò)一定技術(shù)手段得到，它的兩個(gè)可變區(qū)能結(jié)合不同的抗原。雙抗（雙特異性抗體）制備方法：1.化學(xué)偶聯(lián)法

2.（1）制備能產(chǎn)生雙抗的雙雜交瘤細(xì)胞（先制備兩種雜交瘤細(xì)胞，每種雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與特定的抗原結(jié)合。然后再使二者融合，經(jīng)過(guò)篩選最終得到可以產(chǎn)生雙抗體（同時(shí)抗兩種抗原）的雙雜交瘤細(xì)胞。）

（2）通過(guò)雜交一雜交瘤細(xì)胞技術(shù)

（免疫的B細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）制備

3.基因工程制備科研人員制備能產(chǎn)生雙抗體的雙雜交瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)過(guò)程是：先制備兩種雜交瘤細(xì)胞，每種雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體與抗原的結(jié)合情況如圖1、2所示。然后再使二者融合，經(jīng)過(guò)篩選最終得到可以產(chǎn)生雙抗體（同時(shí)抗α、β兩種抗原，圖3）的雙雜交瘤細(xì)胞?？贵w由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，重鏈和輕鏈均分為恒定區(qū)和可變區(qū)，兩條重鏈依賴(lài)于A1或B1進(jìn)行組裝（A1與B1相同），重鏈與輕鏈的組裝依賴(lài)于恒定區(qū)A2、a或B2、b（a與b相同）。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）

A．制備雙特異性抗體時(shí)需將抗原α、β分別注射到小鼠體內(nèi)，

獲得免疫小鼠的脾臟細(xì)胞B．用解離液處理免疫小鼠的脾臟細(xì)胞獲得單細(xì)胞，再與小鼠

的骨髓瘤細(xì)胞融合后可獲得兩種雜交瘤細(xì)胞

C．可用PEG試劑或滅活病毒促進(jìn)兩種雜交瘤細(xì)胞的融合，成功融合后經(jīng)過(guò)篩選可獲得雙雜交瘤細(xì)胞D．三種雜交瘤細(xì)胞的篩選均需要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)E．雙雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體可與兩種抗原同時(shí)發(fā)生特異性結(jié)合，在腫瘤治療方面研制與腫瘤細(xì)胞和抗腫瘤藥物結(jié)合的雙特異性抗體，能特異性殺死腫瘤細(xì)胞F．圖3中的1、2、3、4、5、6可以分別是A2、B2、a、b、β、αB．解離液能固定并殺死細(xì)胞，故不能用解離液處理；應(yīng)該用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，才能達(dá)到分散成單個(gè)細(xì)胞的目的，B錯(cuò)誤；F．1、2、3、4、5、6分別對(duì)應(yīng)A2、B2、a、b、a、β，D錯(cuò)誤。

【答案】BF雙特異性單克隆抗體是指可同時(shí)與癌細(xì)胞和藥物結(jié)合的特異性抗體。下圖是科研人員通過(guò)雜交一雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時(shí)識(shí)別癌胚抗原和長(zhǎng)春堿（一種抗癌藥物）的雙特異性單克隆抗體的部分過(guò)程。GC33是用于殺傷含GPC-3的肝癌細(xì)胞的單克隆抗體，但臨床使用效果不太理想。為提高治療效果，研究人員用新的技術(shù)構(gòu)建了一種雙特異性抗體，該抗體可同時(shí)特異性識(shí)別肝癌細(xì)胞上的GPC-3以及T淋巴細(xì)胞表面的特殊蛋白質(zhì)CD3。圖1表示該雙特異性抗體的制備過(guò)程，圖2表示其在肝癌治療中的作用。（1）過(guò)程①的目的是___________，制備雙特異性單克隆抗體的過(guò)程中用到的技術(shù)有___________（至少答出兩條）。（2）過(guò)程②誘導(dǎo)融合的方法是___，過(guò)程②選用的骨髓瘤細(xì)胞______（填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。（3）經(jīng)過(guò)程③篩選得到的細(xì)胞還需轉(zhuǎn)移至多孔培養(yǎng)板中進(jìn)行過(guò)程④，原因是______________。（4）請(qǐng)根據(jù)所學(xué)知識(shí)，用箭頭和文字在圖中方框內(nèi)補(bǔ)全獲取單克隆雜交一雜交瘤細(xì)胞的生產(chǎn)過(guò)程。_______。（5）獲得的單克隆雜交一雜交瘤細(xì)胞在體外條件下培養(yǎng)或_____，均可提取出大量的雙特異性單克隆抗體。抗體的特異性體現(xiàn)在______,T細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的攻擊屬于________免疫（6）結(jié)合圖1、圖2的信息和已有知識(shí)，簡(jiǎn)述雙特異性抗體在肝癌治療中的作用__________。

（1）使小鼠產(chǎn)生能分泌識(shí)別癌胚抗原抗體的B淋巴細(xì)胞

動(dòng)物細(xì)胞融合、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

（2）聚乙二醇（PEG）等

不能

（3）從小鼠體內(nèi)提取的B淋巴細(xì)胞不止一種類(lèi)型，導(dǎo)致融合后有多種雜交瘤細(xì)胞（4)將獲得的B淋巴細(xì)胞與單克隆雜交瘤細(xì)胞融合→在選擇培養(yǎng)基上篩選出雜交-雜交瘤細(xì)胞→克隆化培養(yǎng)、抗體檢測(cè)篩選出單克隆的雜交-雜交瘤細(xì)胞

（5）注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖

一種抗體只能特異性識(shí)別一種抗原

細(xì)胞免疫（6）該雙特異性抗體可同時(shí)識(shí)別肝癌細(xì)胞膜上的GPC-3和T淋巴細(xì)胞膜上的CD3，從而將肝癌細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞緊密接近（將T細(xì)胞定向帶到癌細(xì)胞所在的位置），有利于T淋巴細(xì)胞特異性地殺傷肝癌細(xì)胞，促使巨噬細(xì)胞吞噬肝癌細(xì)胞拓展：基因工程制備人-鼠嵌合抗體：抗體的結(jié)構(gòu)可分為可變區(qū)和恒定區(qū)，其中可變區(qū)決定抗體的特異性，是抗體識(shí)別及結(jié)合抗原的部位。而研究發(fā)現(xiàn)，90%的人抗鼠抗體反應(yīng)（HAMA反應(yīng)）是針對(duì)抗體恒定區(qū)的。（HAMA反應(yīng)是指鼠源性單克隆抗體對(duì)人體具有異種蛋白的抗原性，可引起人抗鼠抗體的產(chǎn)生。）科學(xué)家欲利用基因工程、蛋白質(zhì)工程、細(xì)胞工程、胚胎工程等技術(shù)生產(chǎn)不會(huì)發(fā)生HAMA反應(yīng)的人鼠嵌合抗體。(1)以抗體的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因合成，對(duì)抗體進(jìn)行改造，生產(chǎn)人鼠嵌合抗體，這屬于_______工程；為構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因表達(dá)載體，需從分泌鼠源單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取______，逆轉(zhuǎn)錄得到______經(jīng)PCR擴(kuò)增得到

，并分別與人抗體恒定區(qū)DNA序列拼接。(2)圖1所示表達(dá)載體中除標(biāo)注出的結(jié)構(gòu)外還必須有________，圖中①是________識(shí)別和結(jié)合的部位。(3)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入

細(xì)胞后，在體外培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)除需要提供適宜的營(yíng)養(yǎng)條件外，還需要滿(mǎn)足的其他條件有_____（回答三個(gè)）。通過(guò)此培養(yǎng)獲得的培養(yǎng)物，需移植到_____的其他雌性動(dòng)物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體。移植前往往將胚胎培養(yǎng)至______時(shí)期，需要對(duì)發(fā)育中的胚胎是否獲得了上述拼接好的基因進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的操作是：取____細(xì)胞，提取DNA后可采用____方法進(jìn)行檢測(cè)。（4）通過(guò)基因工程技術(shù)成功表達(dá)并組裝出有生物學(xué)活性的嵌合抗體，該嵌合抗體的優(yōu)點(diǎn)是________。鼠抗體可變區(qū)人抗體恒定區(qū)。（1）蛋白質(zhì)

mRNAcDNA鼠抗體可變區(qū)cDNA（2）復(fù)制原點(diǎn)RNA聚合酶