細(xì)胞化學(xué)染色法

關(guān)于細(xì)胞化學(xué)染色法一、概念

細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合的一門科學(xué)。以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。第2頁,共69頁，2024年2月25日，星期天二、臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型僅從細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察白血病的診斷正確率約50-70%，如結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色則可提到90%以上。輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷觀察疾病療效和預(yù)后發(fā)病機(jī)制的探討第3頁,共69頁，2024年2月25日，星期天三、基本步驟固定顯示復(fù)染第4頁,共69頁，2024年2月25日，星期天固定目的：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分不變。方法：物理法干燥、火焰固定化學(xué)法蒸汽固定、液體固定（甲醛、乙醇、丙酮等）第5頁,共69頁，2024年2月25日，星期天顯示偶氮偶聯(lián)法聯(lián)苯胺法普魯士藍(lán)反應(yīng)雪夫反應(yīng)金屬沉淀法第6頁,共69頁，2024年2月25日，星期天復(fù)染目的：使各種細(xì)胞顯示出來便于觀察染核：中性紅、甲基綠、蘇木精、核固紅、沙黃等染漿：伊紅、剛果紅、光綠等第7頁,共69頁，2024年2月25日，星期天四、種類過氧化物酶染色、蘇丹黑染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過碘酸-雪夫反應(yīng)α-醋酸奈酚酯酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色第8頁,共69頁，2024年2月25日，星期天過氧化物酶染色(POX)過氧化物酶：是中性粒細(xì)胞含量最多的一種酶主要存在于線粒體和溶酶體中主要功能是破壞生物氧化過程中有劇毒的過氧化物，使其放出氧，參加細(xì)胞內(nèi)氧化還原過程。第9頁,共69頁，2024年2月25日，星期天原理Washburn法四甲基聯(lián)苯胺法改良pereira染色法第10頁,共69頁，2024年2月25日，星期天四甲基聯(lián)苯胺法H2O2

溶酶體顆粒中的ＰＯＸ

H2O＋O2四甲基聯(lián)苯胺O2聯(lián)苯胺藍(lán)聯(lián)苯胺藍(lán)＋亞硝基鐵氰化鈉O2藍(lán)色物質(zhì)

（沉淀）第11頁,共69頁，2024年2月25日，星期天正常細(xì)胞的染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增強(qiáng)）嗜酸陽性最強(qiáng)嗜堿陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性，（顆粒少而細(xì)）其他細(xì)胞陰性第12頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第14頁,共69頁，2024年2月25日，星期天臨床評(píng)價(jià)：輔助診斷急性白血病細(xì)胞類型首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色。第15頁,共69頁，2024年2月25日，星期天１、幫助鑒別診斷急性白血病的類型急性粒細(xì)胞白血?。涸？沙赎栃?粗大，局限性分布），陰性不可排除。急性淋巴細(xì)胞白血病：ＦＡＢ規(guī)定陽性率〈３％。急性單核細(xì)胞白血?。涸瓎慰蔀殛幮裕贁?shù)可弱陽性，（少而細(xì)小，常彌散分布）。第16頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第17頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第18頁,共69頁，2024年2月25日，星期天急性早幼粒細(xì)胞白血病與急性單核細(xì)胞白血病鑒別

AML-M3強(qiáng)陽性組織細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞病與急單前兩者陰性第19頁,共69頁，2024年2月25日，星期天2.成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性的變化活性增高：再生障礙性貧血、感染、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病活性減低：急粒、慢粒、急單、MDS、放射病、退化性中性粒細(xì)胞第20頁,共69頁，2024年2月25日，星期天蘇丹黑染色原理：能溶解于細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)中，使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色。正常細(xì)胞的染色反應(yīng)同（ＰＯＸ染色）臨床評(píng)價(jià)ＰＯＸ染色特異性高于ＳＢＢ染色ＳＢＢ染色敏感性高于ＰＯＸ染色第21頁,共69頁，2024年2月25日，星期天中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（ＮＡＰ）

原理：中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶在PH9.6的堿性條件下能水解磷酸奈酚鈉底物，生成奈酚，后者與偶氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀定位于胞質(zhì)中的酶活性處。第22頁,共69頁，2024年2月25日，星期天中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（ＮＡＰ）原理：磷酸奈酚鈉底物

PH9.6

堿性磷酸酶

(中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中)

奈酚+偶氮鹽

(有色沉淀)第23頁,共69頁，2024年2月25日，星期天正常血細(xì)胞染色反應(yīng)

NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞(桿狀\分葉)

第24頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第26頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共69頁，2024年2月25日，星期天參考值：成人NAP陽性率10%-40%；

NAP積分40-80分第28頁,共69頁，2024年2月25日，星期天ＮＡＰ積分增加：

細(xì)菌性感染、再生障礙性貧血、骨髓增殖性疾病、慢性粒細(xì)胞白血?。铀倨?、急變期）、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、腎上腺糖皮質(zhì)激素及雄激素治療后等。第29頁,共69頁，2024年2月25日，星期天ＮＡＰ積分下降：慢性粒細(xì)胞白血?。云冢㈥嚢l(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、骨髓增生異常綜合癥、惡性組織細(xì)胞病等。第30頁,共69頁，2024年2月25日，星期天疾病的鑒別類白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)菌性感染病毒性感染急粒急淋惡性淋巴瘤惡性組織細(xì)胞病第31頁,共69頁，2024年2月25日，星期天5.惡性組織細(xì)胞病反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥6.真性紅細(xì)胞增多癥繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥原發(fā)性血小板增多癥繼發(fā)性血小板增多癥8.再生障礙性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿第32頁,共69頁，2024年2月25日，星期天過碘酸-雪夫反應(yīng)原理：乙二醇基（多糖類物質(zhì)中）過碘酸雙醛基＋無色品紅紫紅色化合物第33頁,共69頁，2024年2月25日，星期天正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增強(qiáng)）嗜酸胞質(zhì)呈紅色,顆粒不著色嗜堿反之紅細(xì)胞系統(tǒng)陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)原單（可為陰性）,其他為陽性。第34頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第35頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第36頁,共69頁，2024年2月25日，星期天淋巴：大多陰性，少數(shù)陽性。巨核及血小板：陽性第37頁,共69頁，2024年2月25日，星期天臨床評(píng)價(jià)紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中幼紅細(xì)胞可陽性（均勻紅色或塊狀）白細(xì)胞系統(tǒng)疾?。杭绷埽海ㄔ琢芗?xì)胞陽性率升高，呈粗顆?；驂K狀）急粒：少數(shù)原粒呈陽性急單：可呈陽性第38頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第39頁,共69頁，2024年2月25日，星期天M5PAS(+)第40頁,共69頁，2024年2月25日，星期天AML-M6第41頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第42頁,共69頁，2024年2月25日，星期天AML-M7第43頁,共69頁，2024年2月25日，星期天M7PAS(+)第44頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第45頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第46頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第47頁,共69頁，2024年2月25日，星期天α-醋酸萘酚酯酶染色原理

α-醋酸萘酚PH中性α-醋酸萘酚酯酶α-萘酚+重氮鹽(堅(jiān)牢藍(lán)B)(黑色或灰黑色)

第48頁,共69頁，2024年2月25日，星期天正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞（均可+）單核細(xì)胞的陽性可被氟化鈉抑制。氟化鈉抑制率=抑制前的陽性率/積分-抑制后的抑制前的陽性率/積分

×100%第49頁,共69頁，2024年2月25日，星期天臨床評(píng)價(jià)：1、鑒別白血病類型急單急粒急性早幼粒細(xì)胞白血?。◤?qiáng)陽性，不被抑制）急性粒單細(xì)胞白血病第50頁,共69頁，2024年2月25日，星期天其他脂酶染色氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、特異性高。臨床意義：急性粒細(xì)胞白血病有一定數(shù)量白血病細(xì)胞陽性，可以肯定白血病細(xì)胞中有粒系成分，陰性不排除急粒。

第51頁,共69頁，2024年2月25日，星期天醋酸AS-D萘酚酯酶染色染色結(jié)果、臨床意義基本同α-NAE染色。α-丁酸萘酚酯酶染色臨床意義同α-NAE染色，特異性低于α-NAE染色第52頁,共69頁，2024年2月25日，星期天酸性磷酸酶染色原理：偶氮偶聯(lián)法：Gomori硫化鉛法抗酒石酸酸性磷酸酶染色第53頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第54頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第55頁,共69頁，2024年2月25日，星期天臨床評(píng)價(jià)：診斷多毛細(xì)胞白血病毛細(xì)胞呈陽性，陽性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。

第56頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第57頁,共69頁，2024年2月25日，星期天鐵染色1、原理：鐵+亞鐵氰化鉀酸性環(huán)境亞鐵氰化鐵（蘭色）第58頁,共69頁，2024年2月25日，星期天2、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)貯存鐵部位：巨噬細(xì)胞和幼紅細(xì)胞細(xì)胞外鐵：骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中呈彌散藍(lán)色、顆粒狀、小珠狀或塊狀可將細(xì)胞外鐵分為（-）、（+）、（++）（+++）、（++++）。第59頁,共69頁，2024年2月25日，星期天細(xì)胞內(nèi)鐵：指存在于中幼紅、晚幼紅、成熟紅細(xì)胞中的鐵。鐵粒幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞：幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色顆粒在10(6)顆以上，圍核周2/3(1/2)以上者。第60頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第61頁,共69頁，2024年2月25日，星期天第62頁,共69頁，2024年2月25日，星期天細(xì)胞外鐵第63頁,共69頁，2024年2月25日，星期天細(xì)胞內(nèi)鐵第64頁,共69頁，2024年2月25日，星期天環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞第65頁,共69頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果判讀：細(xì)胞外鐵：