版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
關(guān)于游離DNA提取原理和方法游離DNA介紹提取原理提取流程各緩沖液介紹第2頁,共12頁,2024年2月25日,星期天血中游離DNA簡稱循環(huán)核酸指循環(huán)血中游離于細(xì)胞外的部分降解了的機(jī)體內(nèi)源性DNA。游離DNA大部分都是雙鏈DNA分子,血中游離DNA片段遠(yuǎn)小于基因組DNA,片段長度集中在0.18~21kb之間。疾病的早期診斷,預(yù)后,檢測。游離DNA介紹第3頁,共12頁,2024年2月25日,星期天提取DNA總的原則:
1保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;2其他生物大分子的污染應(yīng)降低到最低程度;3核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子;4其他核酸分子,如RNA,也應(yīng)盡量去除。第4頁,共12頁,2024年2月25日,星期天方法比較第5頁,共12頁,2024年2月25日,星期天第6頁,共12頁,2024年2月25日,星期天破壞紅細(xì)胞,通常利用紅細(xì)胞與白細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的差異,先使紅細(xì)胞裂解,經(jīng)離心后收集白細(xì)胞白細(xì)胞裂使膜蛋白和核蛋白變性,游離DNA,通常是采用離子型表面活性劑使蛋白質(zhì)變性除去變性蛋白質(zhì):通常采用蛋白沉淀劑沉淀變性蛋白質(zhì),使DNA留在上清液中在高鹽環(huán)境下使DNA從有機(jī)溶劑如無水乙醇中析出
原理本試劑盒采用離心吸附柱和緩沖液系統(tǒng)。樣品裂解后,DNA在高鹽條件下與硅膠膜結(jié)合,在低鹽,高PH值時(shí)從硅膠膜上洗脫下來。第7頁,共12頁,2024年2月25日,星期天外周血細(xì)胞裂解上層溶液血清抽提干燥溶解離心洗滌酒精沉淀DNA溶液提取流程第8頁,共12頁,2024年2月25日,星期天各緩沖液介紹第9頁,共12頁,2024年2月25日,星期天2.SDS:十二烷基硫酸鈉3.Tris-HCl和NaCl:緩沖液4.EDTA
作用:細(xì)胞裂解時(shí),調(diào)節(jié)溶液的PH,維持一定的離子濃度作用:a.溶解細(xì)胞膜、核膜上脂質(zhì)成分
b.使蛋白質(zhì)變性,與蛋白質(zhì)結(jié)合成為復(fù)合物而沉淀下來
作用:是二價(jià)金屬螯合劑,使影響DNA的DNA酶中的鈣離子和鎂離子和EDTA結(jié)合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA。1.ProteinaseK:作用:能在SDS和EDTA的存在下保持很高的活性,降解蛋白質(zhì),將DNA游離
主要試劑介紹5.酒精
作用:任意比和水相混溶,奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合第10頁,共12頁,2024年2月25日,星期天DNA以弱堿性的Tris或者TE溶解。不存在金屬離子的干擾,故在提取或保存DNA時(shí),大都采用Tris-HCl系統(tǒng),而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的保存:吸附柱:結(jié)構(gòu):特殊硅基質(zhì)吸附材料,特異性吸附DNA,而RNA與蛋白質(zhì)穿過。特點(diǎn):高鹽低pH值結(jié)合核酸,低鹽高pH值洗脫。
第11頁
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025年度高端商務(wù)區(qū)商鋪?zhàn)赓U管理協(xié)議4篇
- 專項(xiàng)工程項(xiàng)目監(jiān)管2024版委托協(xié)議版A版
- 2025年度高速公路服務(wù)區(qū)場標(biāo)準(zhǔn)化改造提升合同4篇
- 二零二五年度高壓直流變壓器采購及運(yùn)輸合同3篇
- 2025年度圖書配送與圖書館管理系統(tǒng)承包合同4篇
- 2025年度拆遷安置補(bǔ)償房屋買賣合同范本(含維修)4篇
- 2024行政文員勞動(dòng)合同范本:合同違約與賠償3篇
- 2024食堂食品安全與承包合同
- 2024講座教授聘任合同模板
- 2025年度城市老舊小區(qū)拆遷安置房買賣合同規(guī)范版4篇
- 物業(yè)民法典知識(shí)培訓(xùn)課件
- 2023年初中畢業(yè)生信息技術(shù)中考知識(shí)點(diǎn)詳解
- 2024-2025學(xué)年山東省德州市高中五校高二上學(xué)期期中考試地理試題(解析版)
- 《萬方數(shù)據(jù)資源介紹》課件
- 麻風(fēng)病病情分析
- 《急診科建設(shè)與設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)》
- TSGD7002-2023-壓力管道元件型式試驗(yàn)規(guī)則
- 2024年度家庭醫(yī)生簽約服務(wù)培訓(xùn)課件
- 建筑工地節(jié)前停工安全檢查表
- 了不起的狐貍爸爸-全文打印
- 春節(jié)新年紅燈籠中國風(fēng)信紙
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論