巴比妥類藥物的分析

關(guān)于巴比妥類藥物的分析基本要求掌握：巴比妥類藥物的鑒別方法，含量測定的銀量法、溴量法和紫外分光光度法。熟悉:巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和分析方法的關(guān)系；特殊雜質(zhì)的檢查方法；含量測定的酸堿滴定法。了解：HPLC法、CE法、GC-MS法在本類藥物含量測定中的應(yīng)用。第2頁,共64頁，2024年2月25日，星期天基本內(nèi)容一、巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)二、鑒別試驗(yàn)三、特殊雜質(zhì)檢查方法四、含量測定練習(xí)與思考第3頁,共64頁，2024年2月25日，星期天結(jié)構(gòu)剖析理化特征鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)檢查含量測定練習(xí)與思考第4頁,共64頁，2024年2月25日，星期天一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物（一）基本結(jié)構(gòu)巴比妥酸的衍生物，結(jié)構(gòu)通式如下巴比妥酸的5，5－取代物1，5，5－取代物C2位硫取代物母核：巴比妥酸，丙二酰脲的結(jié)構(gòu)第5頁,共64頁，2024年2月25日，星期天第6頁,共64頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共64頁，2024年2月25日，星期天第8頁,共64頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共64頁，2024年2月25日，星期天巴比妥類藥物結(jié)構(gòu):性質(zhì)：應(yīng)用：1,3-二酰亞胺鑒別弱酸性苯環(huán)、丙烯基、S鑒別含量測定返回各有特性結(jié)構(gòu)決定性質(zhì)丙二酰脲

丙二酰脲類反應(yīng)

鑒別、含量測定第10頁,共64頁，2024年2月25日，星期天1.弱酸性1，3-二酰亞胺基團(tuán)，能發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu)，在水溶液中發(fā)生二級電離（二）主要性質(zhì)第11頁,共64頁，2024年2月25日，星期天弱酸性弱堿性白色結(jié)晶易溶于有機(jī)溶劑易溶于水H+用于：分離、鑒別、檢查和含量測定。第12頁,共64頁，2024年2月25日，星期天(1)巴比妥類藥物的水解

JP(14)采用這一反應(yīng)鑒別異戊巴比妥和巴比妥。

2.水解反應(yīng)(2)巴比妥類藥物鈉鹽的水解第13頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

3.與重金屬反應(yīng)（丙二酰脲基團(tuán)）可溶性一銀鹽難溶性二銀鹽白色↓

(1)與Ag+的反應(yīng)第14頁,共64頁，2024年2月25日，星期天(2)與Cu2+的反應(yīng)巴比妥類+銅吡啶試液吡啶紫色或紫色↓硫噴妥鈉+銅吡啶試液吡啶綠色第15頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

(3)與Co2+的反應(yīng)第16頁,共64頁，2024年2月25日，星期天(4)與Hg2+的反應(yīng)白色第17頁,共64頁，2024年2月25日，星期天加乙醇后，其反應(yīng)產(chǎn)物可轉(zhuǎn)變?yōu)樽丶t色藍(lán)色

4.與香草醛的反應(yīng)第18頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

5.紫外吸收光譜特征

主要特點(diǎn)：隨著電離級數(shù)的不同，巴比妥類藥物的紫外光譜會發(fā)生顯著的變化。即，溶液pH值的不同以及取代基的不同會對紫外光譜產(chǎn)生影響。第19頁,共64頁，2024年2月25日，星期天A.H2SO4溶液（0.05mol/L）B.pH9.9緩沖液C.NaOH溶液（0.1mol/L）巴比妥類藥物的紫外吸收光譜硫噴妥的紫外吸收光譜HCl溶液(0.1mol/L)－－－

pH10的堿性溶液第20頁,共64頁，2024年2月25日，星期天pH5,5-取代物（nm）1,5,5-取代物（nm）C2硫代（nm）1(原形)無無287（大）238（?。?0(一級電離)240240304（大）255（小）13(二級電離)255240304第21頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

6.色譜行為特征（主要用于鑒別）

（1）TLC

一般采用對照品比較法，要求供試品主斑點(diǎn)應(yīng)與對照品斑點(diǎn)一致。（2）HPLC

與對照品比較保留行為，主要是比較保留時(shí)間和相對保留時(shí)間。第22頁,共64頁，2024年2月25日，星期天二、鑒別試驗(yàn)

(一)丙二酰脲鑒別反應(yīng)這一鑒別試驗(yàn)已經(jīng)收載在中國藥典附錄中的“一般鑒別試驗(yàn)”項(xiàng)下。包括銀鹽反應(yīng)和銅鹽反應(yīng)，分別生成沉淀和呈色反應(yīng)。第23頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

例如：

苯巴比妥鈉的鑒別中國藥典的方法：取本品約0.5g→

加水溶解→加過量稀鹽酸→白色結(jié)晶性沉淀→過濾→用水洗凈沉淀→105℃干燥，熔點(diǎn)應(yīng)為174℃～178℃。(二）測定熔點(diǎn)

巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點(diǎn)第24頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

（三）利用特殊取代基或元素的鑒別試驗(yàn)

1.利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)司可巴比妥鈉原理：含丙烯基，可發(fā)生加成或氧化反應(yīng)（碘、溴）（高錳酸鉀）①與碘試液反應(yīng)第25頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

②與高錳酸鉀的反應(yīng)原理：具有還原性，在堿性溶液中與高錳酸鉀反應(yīng)，使紫色的高錳酸鉀還原成棕色的二氧化錳。第26頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

2.利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)

苯巴比妥①硝化反應(yīng)

苯巴比妥或其鈉鹽，與硝酸鉀和硫酸共熱，生成黃色硝基化合物。黃色第27頁,共64頁，2024年2月25日，星期天③與甲醛-硫酸的反應(yīng)苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅色產(chǎn)物②與亞硝酸鈉-硫酸的反應(yīng)苯巴比妥與亞硝酸鈉-硫酸反應(yīng)生成橙黃色產(chǎn)物，并隨即轉(zhuǎn)變?yōu)槌燃t色。第28頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

3.硫元素的反應(yīng)

硫噴妥鈉可將其硫元素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)硫離子，而顯硫化物的反應(yīng)。如硫噴妥鈉在氫氧化鈉試液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀；加熱后，沉淀轉(zhuǎn)變成黑色的硫化鉛。第29頁,共64頁，2024年2月25日，星期天思考題如何通過化學(xué)法區(qū)分并鑒別四種失去標(biāo)簽的巴比妥類藥物？巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、硫苯妥鈉返回第30頁,共64頁，2024年2月25日，星期天三、特殊雜質(zhì)檢查（3）中性或堿性物質(zhì)（提取重量法）（雜質(zhì)）第31頁,共64頁，2024年2月25日，星期天四、含量測定

銀量法溴量法巴比妥類藥物的含酸堿滴定法量測定方法紫外分光光度提取重量法

HPLC法、GC法第32頁,共64頁，2024年2月25日，星期天（一）銀量法優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，專屬性較強(qiáng)。缺點(diǎn)：受溫度影響較大；以溶液出現(xiàn)渾濁來指示終點(diǎn)難以觀察。1.原理：巴比妥類一銀鹽二銀鹽↓Na2CO3AgNO3終點(diǎn)：電位法（Ag－玻璃電極系統(tǒng)）AgNO3第33頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

2.測定方法與計(jì)算例如:異戊巴比妥(M=226.28)及其鈉鹽(M=248.26)的測定：溶劑：甲醇堿性試液：新配3％無水Na2CO3

滴定液：AgNO3滴定液（0.1mol/L）終點(diǎn)：電位法第34頁,共64頁，2024年2月25日，星期天1.原理：

司可巴比妥鈉含不飽和鍵，與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)（定量過量）Br2+2KI2KBr+I2（剩余）I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6（二）溴量法近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正第35頁,共64頁，2024年2月25日，星期天原料藥剩余滴定法2.計(jì)算

注意事項(xiàng)：（1）操作中要防止溴和碘的逸失。（2）平行條件進(jìn)行空白試驗(yàn)可校正滴定過程和試劑等引入的誤差。第36頁,共64頁，2024年2月25日，星期天（三）酸堿滴定法原理用堿滴定酸要求C·Ka>10-8，巴比妥類pKa=8,滴定時(shí)突躍過小，難以觀察，且在水中溶解度小，故測定時(shí)需解決：溶解度和突躍。方法水－醇混合溶劑中滴定溶劑是為了提高溶解度指示劑：麝香草酚酞，變色范圍9.3～10.5，供試品為一弱酸，突躍在堿區(qū)。第37頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

例如：異戊巴比妥的含量測定取本品約0.5g，精密稱定，加乙醇20ml溶解后，加麝香草酚酞指示劑6滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O3。第38頁,共64頁，2024年2月25日，星期天在膠束水溶液中滴定（溴化十六烷基芐三甲基胺）

增加溶解度，膠束的特性

增加突躍，使用表面活性劑具有堿性，可增加巴比妥的離解，使Ka變大。非水溶液滴定法溶劑:二甲基甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)液：甲醇鈉終點(diǎn)指示：麝香草酚蘭，電位法第39頁,共64頁，2024年2月25日，星期天1.直接測定方法標(biāo)準(zhǔn)品對照法表5-2一些巴比妥類藥物紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)（四）紫外分光光度法第40頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

對照法Lambert-Beer定律第41頁,共64頁，2024年2月25日，星期天每1mg硫噴妥相當(dāng)于1.091mg的C11H17N2NaS。注射用硫噴妥鈉的含量測定：在304nm處，測定A供A對第42頁,共64頁，2024年2月25日，星期天2.提取分離后的紫外分光光度法適用于：含干擾物質(zhì)的樣品原理：巴比妥類藥物具有弱酸性，在三氯甲烷等有機(jī)溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶。第43頁,共64頁，2024年2月25日，星期天巴比妥類鈉鹽酸化三氯甲烷提取水層×氯仿層0.45mol/LNaOH三氯甲烷層×水層調(diào)pHλmax處測A第44頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

USP（24）對苯巴比妥鈉的含量測定采用本法

樣品→溶解→酸化→三氯甲烷提取(250ml)

→精密量取適量三氯甲烷液(5ml)→蒸氣浴上揮干→乙醇、pH9.6緩沖液(100ml)供試品溶液（樣品液(mg/ml)）苯巴比妥對照品→乙醇、pH9.6緩沖液→標(biāo)準(zhǔn)溶液（對照液(μg/ml)）

240nm為測定波長第45頁,共64頁，2024年2月25日，星期天多用于制劑及體液中巴比妥類藥物的含量測定如：苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平的血藥濃度監(jiān)測色譜條件：色譜柱AgilentZORBAXSB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）預(yù)柱：AgilentZORBAXSB-C18柱（4mm×4mm，5μm）流動相：水-甲醇-乙腈(45:45:10)v（五）HPLC返回第46頁,共64頁，2024年2月25日，星期天練習(xí)題[A型題]1.苯巴比妥中檢查的特殊雜質(zhì)是

A.巴比妥

B.間氨基酚

C.水楊酸

D.中性或堿性物質(zhì)

E.氨基酚練習(xí)與思考第47頁,共64頁，2024年2月25日，星期天

2.司可巴比妥鈉《中國藥典》規(guī)定的含量測定方法為

A.中和法

B.溴量法

C.碘量法

D.紫外分光法

E.高錳酸鉀法第48頁,共64頁，2024年2月25日，星期天3.于Na2CO3溶液中加AgNO3試液，開始生成白色沉淀經(jīng)振搖即溶解，繼續(xù)加AgNO3試液，生成的沉淀則不再溶解，該藥物應(yīng)是鹽酸可待因咖啡因C.新霉素D.維生素CE.異戊巴比妥第49頁,共64頁，2024年2月25日，星期天4.與NaNO2～H2SO4反應(yīng)生成橙黃至橙紅色產(chǎn)物的藥物是A.苯巴比妥B.司可巴比妥C.巴比妥D.硫噴妥鈉E.硫酸奎寧第50頁,共64頁，2024年2月25日，星期天5.中國藥典（2000年版）采用AgNO3滴定液（0.1mol/L）滴定法測定苯巴比妥的含量時(shí)，指示終點(diǎn)的方法應(yīng)是A.K2CrO4溶液B.熒光黃指示液C.Fe(III)鹽指示液D.電位法指示終點(diǎn)法E.永停滴定法第51頁,共64頁，2024年2月25日，星期天6.銀量法測定苯巴比妥鈉含量時(shí),若用自身指示法來判斷終點(diǎn),樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾比應(yīng)為A.1:2B.2:1C.1:1D.1:4E.以上都不對第52頁,共64頁，2024年2月25日，星期天7.下列巴比妥類藥物水溶液中酸性最小的藥物是A.苯巴比妥B.巴比妥C.異戊巴比妥D.異戊巴比妥鈉E.以上都不對第53頁,共64頁，2024年2月25日，星期天8.用酸堿滴定法測定巴比妥類藥物含量時(shí)，適用的溶劑為A.堿性B.水C.酸水D.醇－水E.以上都不對第54頁,共64頁，2024年2月25日，星期天9.司可巴比妥鈉（分子量為260.27）采用溴量法測定含量時(shí)，每lml溴滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于司可巴比妥鈉的毫克(mg)數(shù)為1.3012.603C.26.03D.52.05E.13.01第55頁,共64頁，2024年2月25日，星期天10.ChP（2005）注射用硫噴妥鈉采用的含量測定方法為

A.紫外分光光度法

B.銀量法

C.酸堿滴定法

D.比色法

E.非水滴定法第56頁,共64頁，2024年2月25日，星期天11.凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，如司可巴比妥鈉，中國藥典（1990年版）采用的含量測定方法是A.酸量法B.堿量法C.銀量法D.溴量法E.比色法第57頁,共64頁，2024年2月25日，星期天12.巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成配位化合物，顯綠色的藥物是A.苯巴比妥B.異戊巴比妥C.司可巴比妥