ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植對(duì)心衰大鼠心臟功能及心肌重構(gòu)的影響的開題報(bào)告

ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植對(duì)心衰大鼠心臟功能及心肌重構(gòu)的影響的開題報(bào)告一、研究背景及意義心衰是心臟病的一種嚴(yán)重形式，是由于心臟功能減弱以致不能滿足身體的需要而引起的一系列癥狀和體征，如氣促、疲勞、體重增加等。心衰是世界范圍內(nèi)的一種重要公共衛(wèi)生問題，其患病率和死亡率不斷上升。雖然已有多種治療方法，包括藥物治療、心臟起搏器、心臟轉(zhuǎn)流術(shù)等，但治愈仍是一個(gè)難題。干細(xì)胞移植治療心衰是一種新興的治療方法。近年來，研究表明多能干細(xì)胞和造血干細(xì)胞在心臟再生中的潛在應(yīng)用價(jià)值，但其臨床應(yīng)用仍受到一些限制。因此，研究成熟的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）作為基因載體，將相關(guān)基因?qū)隡SCs，可大幅度提高移植干細(xì)胞的生存率，有效促進(jìn)心血管再生，改善心衰大鼠心臟功能，從而成為一種潛在的治療方案。二、研究目的本研究旨在探究ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植對(duì)心衰大鼠心臟功能及心肌重構(gòu)的影響，并進(jìn)一步明確其作用機(jī)制。三、研究計(jì)劃1.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)建立心衰大鼠模型：利用連續(xù)6周冠狀動(dòng)脈狹窄模型制備心衰大鼠模型；(2)分離及培養(yǎng)MSCs：從大鼠骨髓中分離純化MSCs，進(jìn)行擴(kuò)增、鑒定及培養(yǎng)；(3)構(gòu)建ADM基因質(zhì)粒：采用PCR擴(kuò)增ADM基因，將其克隆進(jìn)入質(zhì)粒載體中；(4)ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs：采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將ADM基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MSCs，過表達(dá)轉(zhuǎn)染效率；(5)制備ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植液：將轉(zhuǎn)染成功的MSCs收集制備成移植液；(6)心肌移植：將制備好的ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植液直接注射至心肌組織內(nèi)；(7)檢測(cè)心衰大鼠心肌功能：采用M模式超聲心動(dòng)圖儀檢測(cè)心衰大鼠心臟功能，統(tǒng)計(jì)LVFS、LVEF值；(8)追蹤MSCs移植存活情況：采用熒光素酶體外實(shí)驗(yàn)（IVIS）檢測(cè)MSCs存活情況；(9)檢測(cè)心肌重構(gòu)指標(biāo)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Westernblot檢測(cè)心肌重構(gòu)指標(biāo)基因表達(dá)情況。2.實(shí)驗(yàn)時(shí)間表(1)前期準(zhǔn)備工作：2個(gè)月(2)建立心衰大鼠模型及分離MSCs：2個(gè)月(3)構(gòu)建ADM基因質(zhì)粒及ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs：2個(gè)月(4)制備ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植液及心肌移植：1個(gè)月(5)檢測(cè)心衰大鼠心肌功能和心肌重構(gòu)指標(biāo)：1個(gè)月。3.實(shí)驗(yàn)預(yù)期結(jié)果(1)制備成功ADM基因載體和ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs；(2)ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植能夠顯著改善心衰大鼠心肌功能；(3)ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植具有促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖和減少心肌重構(gòu)的作用。四、研究難點(diǎn)與創(chuàng)新點(diǎn)1.研究難點(diǎn)（1）心衰大鼠模型的構(gòu)建；（2）MSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定；（3）ADM基因載體構(gòu)建及脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染MSCs；（4）注射后MSCs存活情況檢測(cè)。2.研究創(chuàng)新點(diǎn)（1）應(yīng)用ADM基因轉(zhuǎn)染MSCs移植治療心衰的方法進(jìn)行研究；（2）追蹤MSC