方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容

1010頁驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、周密度〔包括重復(fù)性、中間周密度和重現(xiàn)性〕、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。一、準(zhǔn)確度：是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以百分回9二、周密度：是指在規(guī)定的條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)過屢次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。1、重復(fù)性：一樣條件下，一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的周密度稱為重復(fù)性。至少9次。23、重現(xiàn)性：不同試驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的周密度。分析方法被法定標(biāo)準(zhǔn)承受應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗(yàn)。性。四、檢測(cè)限：指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量，無須定量。用百分?jǐn)?shù)、ppm或ppb表示。度。或量的區(qū)間。八、耐用性：指在肯定的測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。方法驗(yàn)證內(nèi)容如下。一、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率〔%〕表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度原料藥可用純度的比照品或樣品進(jìn)展測(cè)定個(gè)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)展比較。比較。下，這一項(xiàng)可不必再做。雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度說明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比〔%〕或面積比〔%〕。數(shù)據(jù)要求93分別制備3份供試品溶液，進(jìn)展測(cè)定。應(yīng)報(bào)告參加量的回收率〔%〕，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限?！惨庖?：是否對(duì)所設(shè)定的濃度范圍作出要求，如：該方法用于藥品的含量測(cè)定，回收率試驗(yàn)的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于含量100％的±20％之間；用于溶出〔釋放〕曲線考察時(shí)，回收率試驗(yàn)的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于全曲線范圍的上、中、下部位?！扯⒅苊芏冉潭?。周密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在一樣條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的周密度稱為重復(fù)性；在同一個(gè)試驗(yàn)室，室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的周密度，稱為重現(xiàn)性。含量測(cè)定和雜質(zhì)的定量測(cè)定應(yīng)考慮方法的周密度。1．重復(fù)性933100%的濃度水平，用至少測(cè)定6中間周密度同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。重現(xiàn)性重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素果。數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。三、專屬性專屬性系指在其他成分〔如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等〕可能存在下，承受的方法能正確專屬，應(yīng)承受多個(gè)方法予以補(bǔ)充。鑒別反響組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反響〔不呈正反響？〕。含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定中的位置。色譜法中的分別度應(yīng)符合要求。量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)能否得到分別。一個(gè)閱歷證了的或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照耀，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可承受二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)展峰純度檢查。四、檢測(cè)限通過測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。常用的方法如下。非儀器分析目視法用濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被牢靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。2．信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法3∶12∶1濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。3．?dāng)?shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖譜，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果。五、定量限定量限系指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具肯定準(zhǔn)確度和周密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法爭(zhēng)論時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限。10∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。六、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。5轉(zhuǎn)換，再進(jìn)展線性回歸計(jì)算。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。〔意見4：“線性”、“范圍”中，如測(cè)定方法用于溶出〔釋放〕曲線考察時(shí)，是否規(guī)定樣品濃度的范圍應(yīng)涵蓋整條曲線。〕七、范圍范圍系指能到達(dá)肯定周密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的凹凸限濃度或量的區(qū)間。劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%～120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%～130%，依據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的±20%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的＋20%；雜質(zhì)測(cè)定，爭(zhēng)論時(shí)，范圍應(yīng)依據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬訂為規(guī)定限度的±20%。假設(shè)含量測(cè)定與雜質(zhì)-20〔或上限〕的＋20%。八、耐用性方法中寫明。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流淌相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫溫，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。附表檢驗(yàn)工程和驗(yàn)證內(nèi)容工程 鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定及溶出量測(cè)定內(nèi)容定量限度準(zhǔn)確度 －＋－＋周密度 －－－＋重復(fù)性 －＋－＋中間周密度－＋①－＋①專屬性②＋＋＋＋檢測(cè)限－－③＋－定量限－＋－－線性－＋－＋范圍－＋－＋耐用性＋＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間周密度。②如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。③視具體狀況予以驗(yàn)證。床前明月光，疑是地上霜。二、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容〔一〕準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率〔%〕表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。測(cè)定方法的準(zhǔn)確度可用純度的比照品做加樣回收測(cè)定，即于被測(cè)成分含量的供試品中再周密加入肯定量的純度的被測(cè)成分比照品除以參加比照品量計(jì)算回收率。回收率%=式中：ABC在加樣回收試驗(yàn)中，應(yīng)留意比照品的參加量與供試品中被測(cè)成分含有量之和必需在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；應(yīng)留意參加比照品的時(shí)間〔供試品預(yù)處理前〕當(dāng)，過小則引起較大的相對(duì)誤差，過大則干擾成分相對(duì)削減，真實(shí)性差。數(shù)據(jù)要求63個(gè)不同濃39參加量與所取供試品含量之比掌握在1:1品參加量、測(cè)定結(jié)果和回收率(％)計(jì)算值，以及回收率(％)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差〔RSD％〕或可信限?！捕持苊芏戎苊芏认抵冈谝?guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)屢次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。周密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。用于定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)考察方法的周密度。周密度包括重復(fù)性、中間周密度和重現(xiàn)性。重復(fù)性在一樣操作條件下，由一個(gè)分析人員在較短的間隔時(shí)間內(nèi)測(cè)定所得結(jié)果的周密度稱為重復(fù)性。63個(gè)不同濃39中間周密度在同一個(gè)試驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的周密度，稱為中間周密度。不同分析人員、不同設(shè)備等。重現(xiàn)性在不同試驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的周密度，稱為重現(xiàn)性。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)承受時(shí)，應(yīng)進(jìn)展重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如，建立獸藥典分析方法時(shí)素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。〔三〕專屬性1.意義與要求專屬性系指在其他成分可能存在下，承受的方法能正確測(cè)定出藥材、飲片、藥材提取不夠?qū)?，?yīng)承受其他方法予以補(bǔ)充。鑒別試驗(yàn)鑒別應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或構(gòu)造相像化合物區(qū)分。不含被測(cè)成分的供試品，以及構(gòu)造代表性圖像或圖譜。含量測(cè)定和限量檢查以不含被測(cè)成分的供試品(除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方)試驗(yàn)說明〔除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方查?！菜摹硻z測(cè)限檢測(cè)限系指供試品中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。確定檢測(cè)限常用的方法如下。1.直觀法用一系列濃度的供試品進(jìn)展分析，試驗(yàn)出能被牢靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。信噪比法僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把低濃度供試品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)展比較3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖譜，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果?！参濉扯肯薅肯尴抵腹┰嚻分斜粶y(cè)成分能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具肯定準(zhǔn)確度和周密度。用于限量檢查的定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)確定定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)展確定?！擦尘€性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與供試品中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)周密稀釋，或分別周密稱樣，制備5數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)展線性回歸計(jì)算。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。〔七〕范圍范圍應(yīng)依據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、周密度結(jié)果及要求確定。對(duì)于有毒溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的±20％。〔八〕耐用性耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于應(yīng)在方法中寫明。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流淌相的組成比例或pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱，點(diǎn)樣方式及薄層開放時(shí)溫度及相對(duì)濕度的變化等。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。〔九〕系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對(duì)一些儀器分析方法，在進(jìn)展方法驗(yàn)證時(shí)，有必要將分析設(shè)備、電子儀器與試驗(yàn)操作、統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需依據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。色譜方法對(duì)分析設(shè)備、電子儀器的依靠程度較高，因此全部色譜方法均應(yīng)進(jìn)展該指標(biāo)驗(yàn)證，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成局部。具體驗(yàn)證參數(shù)和方法參考《中國(guó)獸藥典》有關(guān)規(guī)定。三、方法再驗(yàn)證在某些狀況下，如原藥提取工藝轉(zhuǎn)變、制劑處方或工藝轉(zhuǎn)變、分析方法轉(zhuǎn)變等，均有在某些狀況下，如原藥提取工藝轉(zhuǎn)變、制劑處方或工藝轉(zhuǎn)變、分析方法轉(zhuǎn)變等，均有驗(yàn)證。再驗(yàn)證原則：依據(jù)轉(zhuǎn)變的程度進(jìn)展相應(yīng)的再驗(yàn)證。當(dāng)原藥提取工藝或制劑工藝發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)，含量測(cè)定方法的專屬性就需要再進(jìn)展驗(yàn)證，以證明含量測(cè)定方法中發(fā)生的成分變化對(duì)主成份的測(cè)定無干擾。當(dāng)制劑的處方組成轉(zhuǎn)變、輔料變更時(shí)，可能會(huì)影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度，因此需要進(jìn)展輔料對(duì)鑒別、對(duì)含量測(cè)定影響的方法再驗(yàn)證。當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一工程分析方法發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)，如承受高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生轉(zhuǎn)變，則需要重供給檢測(cè)限、專屬性、準(zhǔn)確度、周密度、線性等相應(yīng)的方法學(xué)爭(zhēng)論資料，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。周密度專屬性要求要求要求要求——要求要求*——要求檢測(cè)限————要求*——定量限——要求——*——線性要求要求——*——驗(yàn)證工程類驗(yàn)證工程類型類型I 類型II定量測(cè)定類型III 類型IV限度試驗(yàn)準(zhǔn)確度要求要求**——范圍要求要求**——工程鑒別限量檢查含量測(cè)定及內(nèi)容定量 限度溶出量測(cè)定準(zhǔn)確度－+ －+重復(fù)性－+ －+中間周密度－+① －+①重現(xiàn)性②++ ++專屬性③++ ++檢測(cè)限－－ +－定量限－+ －－線性－+ －+范圍－+ －+耐用性++ ++①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間周密度。②重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)承受時(shí)做。③如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。 上表中列舉了在不同類型