動物細胞與組織培養(yǎng)

關(guān)于動物細胞與組織培養(yǎng)第一節(jié)動物組織細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)一、動物細胞特點動物細胞屬于真核細胞，與細菌等原核細胞比進化程度更高，結(jié)構(gòu)、成分更復(fù)雜，功能更全面。動物細胞的連接：封閉連接：緊密連接、間壁連接錨定連接：粘合帶與粘合斑，橋粒與半橋粒通訊連接：間隙連接，胞間連絲，化學(xué)突觸第2頁,共99頁，2024年2月25日，星期天3.動物細胞的特點及生長特性

動物細胞大，無細胞壁動物細胞生長緩慢，倍增時間長，易受污染需氧量少，對機械攪拌或剪切力敏感動物細胞間主要以聚集體形式存在原代細胞一般繁殖50代即退化死亡第3頁,共99頁，2024年2月25日，星期天一些不同形狀的人體細胞第4頁,共99頁，2024年2月25日，星期天Hepatocytes(肝)第5頁,共99頁，2024年2月25日，星期天

第6頁,共99頁，2024年2月25日，星期天血液凝塊

第7頁,共99頁，2024年2月25日，星期天

白血球巨噬細胞纖滅癌細胞Ｔ細胞與Ｂ細胞免疫細胞第8頁,共99頁，2024年2月25日，星期天樹突細胞:

第9頁,共99頁，2024年2月25日，星期天嗜中性粒細胞吞噬志賀桿菌

第10頁,共99頁，2024年2月25日，星期天巨核細胞

第11頁,共99頁，2024年2月25日，星期天骨細胞

第12頁,共99頁，2024年2月25日，星期天成骨細胞

第13頁,共99頁，2024年2月25日，星期天破骨細胞(紫色)

第14頁,共99頁，2024年2月25日，星期天膠質(zhì)細胞第15頁,共99頁，2024年2月25日，星期天正常衰老細胞第16頁,共99頁，2024年2月25日，星期天正常衰老細胞（紅色）和死亡細胞第17頁,共99頁，2024年2月25日，星期天細胞凋亡的核變

第18頁,共99頁，2024年2月25日，星期天癌癥細胞

第19頁,共99頁，2024年2月25日，星期天

大片自由基和被其污染至病的細胞

細胞變異，增大的癌癥細胞

第20頁,共99頁，2024年2月25日，星期天乳腺癌細胞第21頁,共99頁，2024年2月25日，星期天腦部細胞癌變

第22頁,共99頁，2024年2月25日，星期天由于營養(yǎng)過剩導(dǎo)致的細胞和由此導(dǎo)致死亡

第23頁,共99頁，2024年2月25日，星期天病死的肌細胞

第24頁,共99頁，2024年2月25日，星期天SEMofretinaofeyeshowingrodcells(photoreceptors）掃描電鏡的眼睛顯示視網(wǎng)膜視桿細胞第25頁,共99頁，2024年2月25日，星期天Scanningelectronmicrographofahumanspermcontactingahamsteregg.

第26頁,共99頁，2024年2月25日，星期天人上皮細胞培養(yǎng)7d尿路上皮細胞第27頁,共99頁，2024年2月25日，星期天小鼠胚胎成纖維細胞

第28頁,共99頁，2024年2月25日，星期天體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞

第29頁,共99頁，2024年2月25日，星期天黑色素細胞第30頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第二節(jié)動物細胞與組織培養(yǎng)

基本概念

一分類:動物細胞與組織培養(yǎng)：

(CellandTissueCulture)指的是從動物組織或細胞從體內(nèi)取出，在模擬體內(nèi)生理環(huán)境，無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下，使之生存和生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。

細胞培養(yǎng)(CellCulture)

培養(yǎng)物是單個細胞和細胞群。

器官培養(yǎng)（OrganCulture）培養(yǎng)的是器官的原基、器官的一部分或整個器官，使之在體外生存、生長和保持一定功能的方法。第31頁,共99頁，2024年2月25日，星期天

ClassificationofCellCulturesPrimaryCulture

Cellstakendirectlyfromatissuetoadish

原代培養(yǎng)：直接取自動植體的組織或細胞的培養(yǎng)。SecondaryCulture

Cellstakenfromaprimarycultureandpassedordividedinvitro.

傳代培養(yǎng)：從原代培養(yǎng)的細胞的繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。Thesecellshavealimitednumberofdivisionsorpassages.Afterthelimit,theywillundergoapoptosis.

Apoptosisisprogrammedcelldeath第32頁,共99頁，2024年2月25日，星期天Contactinhibition

Whencellscontacteachother,theyceasetheirgrowth.

CellsarrestinG0phaseofthecellcycle

Transformedcellswillcontinuetoproliferateandpileuponeachother

第33頁,共99頁，2024年2月25日，星期天PrimaryCultureretentionofthe3Dshapeoutgrowthandmigrationofcells第34頁,共99頁，2024年2月25日，星期天細胞系(cellline)：原代細胞經(jīng)第一次傳代后，形成的細胞群體，即具有增殖能力，類型均勻的培養(yǎng)細胞，一般為有限細胞系。細胞株：細胞系經(jīng)過克隆或其他方法而得的單一類型的細胞群體。

第35頁,共99頁，2024年2月25日，星期天二發(fā)展歷史動物細胞組織培養(yǎng)的奠基人是美國生物學(xué)家哈里森，1907年蓋玻片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法。1923年，法國學(xué)者卡勒爾（Carrel）設(shè)計了卡氏瓶培養(yǎng)法，擴大了組織生存空間。1951年，厄爾（Earle）發(fā)明了體外培養(yǎng)動物細胞的人工合成培養(yǎng)基。卡瑞爾把無菌技術(shù)帶到組織培養(yǎng)中。第36頁,共99頁，2024年2月25日，星期天三動物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用

a.生物制品的生產(chǎn)

b.轉(zhuǎn)基因動物的培養(yǎng)

c.檢測有毒物質(zhì)

d.醫(yī)學(xué)研究

第37頁,共99頁，2024年2月25日，星期天四培養(yǎng)細胞按生長方式分:（一）貼附型細胞（1）成纖維細胞型細胞：（2）上皮型細胞:

（3）游走型細胞（4）多形型細胞（二）非貼附型細胞

(懸浮型)

但有些細胞既可貼附生長，也可懸浮生長。第38頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（一）貼附型細胞貼附生長是大多數(shù)細胞在體內(nèi)生長的基本存在方式。貼附型細胞在培養(yǎng)時能貼附在支技物表面生長。如羊水細胞為貼附型細胞，常表現(xiàn)為成纖維型細胞和上皮細胞生長。

第39頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第40頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第41頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（1）成纖維細胞型細胞：長梭形或不規(guī)則，細胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長，細胞中央有卵園形核，胞質(zhì)向外伸出2-3個長短不同的突起，生長時呈放射狀、漩渦狀走向。第42頁,共99頁，2024年2月25日，星期天成纖維型細胞

在培養(yǎng)中的細胞凡形態(tài)與成纖維細胞類似時，皆可稱之為成纖維細胞。本型細胞由形態(tài)與體內(nèi)成纖維細胞的形態(tài)相似而得名.除真正的成纖維細胞外，凡由中胚層間質(zhì)起源的組織細胞常呈本類形態(tài)生長。人胚肺細胞在顯微鏡下呈現(xiàn)為典型的成纖維細胞型。第43頁,共99頁，2024年2月25日，星期天成纖維細胞第44頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（2）上皮型細胞:此類型細胞在培養(yǎng)器皿支持物上生長具有扁平狀，細胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時彼此緊密連接成單層細胞。生長時呈膜狀移動，處于膜邊緣的細胞總與膜相連，很少單獨行動。起源于內(nèi)、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。

Hela細胞呈現(xiàn)為典型的上皮細胞型。

第45頁,共99頁，2024年2月25日，星期天上皮型細胞第46頁,共99頁，2024年2月25日，星期天主動脈血管內(nèi)皮細胞（100倍）第47頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（3）游走型細胞本型細胞在支持物上散在生長，一般不連成片。細胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起，呈活躍的游走或變形運動，速度快且不規(guī)則。此型細胞不很穩(wěn)定，有時亦難和其它型細胞區(qū)別。在一定的條件下，由于細胞密度增大聯(lián)成片后，可呈類似多角型或成纖維細胞形態(tài)。第48頁,共99頁，2024年2月25日，星期天體外培養(yǎng)的游走型細胞具有類似巨噬細胞樣的特征。主要是：單核巨噬細胞系統(tǒng)的細胞，淋巴細胞，腫瘤細胞。第49頁,共99頁，2024年2月25日，星期天單核巨噬細胞1、游走型細胞在支持物上分散生長，一般不連接成片、形成群落；2、細胞胞質(zhì)常伸出偽足和突起。3、生長位置不固定，呈游走和變形運動，速度快、方向不規(guī)則。4、細胞內(nèi)易出現(xiàn)色暗的吞噬性顆粒。第50頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（4）多形型細胞形態(tài)上不規(guī)則的細胞，一般分胞體和胞突兩部分,如神經(jīng)組織細胞.第51頁,共99頁，2024年2月25日，星期天（二）非附型細胞懸浮生長細胞：血液白細胞、淋巴組織細胞、某些腫瘤細胞、雜交瘤細胞、轉(zhuǎn)化細胞系等。這類細胞特點：胞體始終是球形、密度較高，培養(yǎng)效率高、易大規(guī)模生產(chǎn)。第52頁,共99頁，2024年2月25日，星期天五.影響細胞形態(tài)學(xué)特征的因素

血清成分、培養(yǎng)基成分、添加成分、培養(yǎng)基的酸堿度、氣相環(huán)境、溫度等。

如,Hela細胞原本是一種上皮型癌細胞,但在過酸或過堿的條件下培養(yǎng),可以呈現(xiàn)梭形,當(dāng)酸堿度適中時又可以恢復(fù)上皮型特征。第53頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)動物組織細胞培養(yǎng)要求一體外培養(yǎng)特點:

大多數(shù)動物細胞要附在物體上表面生長，動物細胞培養(yǎng)對營養(yǎng)要求更嚴格，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血清。對環(huán)境適應(yīng)性差，對環(huán)境敏感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。第54頁,共99頁，2024年2月25日，星期天二培養(yǎng)工具:培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)管、多孔培養(yǎng)板等。細胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主。器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。第55頁,共99頁，2024年2月25日，星期天根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位。

第56頁,共99頁，2024年2月25日，星期天三、培養(yǎng)條件

細胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細胞基本相同。

【討論】多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？提示：無菌、無毒的環(huán)境。第57頁,共99頁，2024年2月25日，星期天1）恒定的溫度:37℃，

維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。低溫下會使細胞代謝速率降低第58頁,共99頁，2024年2月25日，星期天2）PH：7.2-7.４當(dāng)PH低于6或高于7.6時的生長會受到影響，甚至死亡。用來檢測PH的變化：紅色--pH7.4，橙色--pH7.0，黃色--pH6.5，藍紅色--pH7.6，紫色--pH7.8。第59頁,共99頁，2024年2月25日，星期天3)氣體：ＣＯ２有調(diào)節(jié)PH的作用。氣體是人體細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

第60頁,共99頁，2024年2月25日，星期天4）營養(yǎng)—培養(yǎng)基：

在保證細胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細胞進行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物及無機鹽類等。只有滿足了這些基本條件，細胞才能在體外正常存活、生長。動物細胞的培養(yǎng)基一般分為天然、合成、無血清培養(yǎng)基幾種，此外細胞培養(yǎng)還需要一些常用的溶液。第61頁,共99頁，2024年2月25日，星期天合成培養(yǎng)基

1951年厄爾開發(fā)了供動物細胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。人工合成培養(yǎng)基，如109培養(yǎng)液、DMEM、199、RPMI-1640，IMEM，MEM培養(yǎng)液等。第62頁,共99頁，2024年2月25日，星期天天然培養(yǎng)基直接采用取自動物體液或從組織中提取的成分作培養(yǎng)液，主要有血清、組織提取液、雞胚汁等。血清是天然培養(yǎng)基中最有效和最常用的培養(yǎng)成分。它含有許多維持細胞生長繁殖和保持細胞生物學(xué)性狀不可缺少的未知成分。使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合成培養(yǎng)基合用，能使細胞碩利增殖生長。第63頁,共99頁，2024年2月25日，星期天常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。第64頁,共99頁，2024年2月25日，星期天氨基酸是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，氨基酸中有12種是細胞本身不合成的，必須由培養(yǎng)液提供。激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、增殖刺激因子(MSA)、類胰島素生長因子(IGFl、IGF2)等。

水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成0．5％溶液，微酸性。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。第65頁,共99頁，2024年2月25日，星期天無血清培養(yǎng)基動物血清成分復(fù)雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質(zhì)量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子，激素等。第66頁,共99頁，2024年2月25日，星期天5)細胞培養(yǎng)溶液平衡鹽水（BSS）：

Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液：

NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）細胞消化液:

胰蛋白酶溶液．EDTA溶液．膠原酶溶液第67頁,共99頁，2024年2月25日，星期天抗生素溶液：1)青、鏈霉素:每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素.2)卡那霉素：終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液。3）制霉菌素：濃度25U/ml，小瓶分裝，每瓶一次用完。第68頁,共99頁，2024年2月25日，星期天6)、無污染環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當(dāng)細胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

第69頁,共99頁，2024年2月25日，星期天四細胞培養(yǎng)設(shè)施

1、實驗室設(shè)計

細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養(yǎng)室的設(shè)計實施原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

第70頁,共99頁，2024年2月25日，星期天細胞培養(yǎng)實驗室1.準(zhǔn)備室2.緩沖室

準(zhǔn)備室風(fēng)淋3.培養(yǎng)室第71頁,共99頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)室

專用于組織細胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣間、緩沖間、操作間。內(nèi)設(shè)超凈工作臺、培養(yǎng)箱等細胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，應(yīng)具備紫外消毒、通風(fēng)及溫控設(shè)施。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機及倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及毒好的無菌物品等

第72頁,共99頁，2024年2月25日，星期天風(fēng)淋室：

風(fēng)淋室是生物潔凈室的理想配套設(shè)備，它不僅可以清除人體和物品表面附著的塵埃，減少帶入潔凈室的灰塵量，而且兼有氣閘室的功能，可防止非潔凈空氣的侵入。風(fēng)淋室的板壁采用輕質(zhì)隔熱夾芯鋼板，吹淋板采用進口不銹鋼制作，吹淋口方向可調(diào)，風(fēng)淋時間可在30-99秒間的調(diào)整。風(fēng)淋室可以配合加熱器，冬天可以加熱，溫度可調(diào)，一般控制溫度在30-35℃較為適宜。

第73頁,共99頁，2024年2月25日，星期天

超凈工作臺

也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。第74頁,共99頁，2024年2月25日，星期天CO2培養(yǎng)箱

哺乳動物離體細胞培養(yǎng)和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒足溫度下才能生存,溫差變化一般不應(yīng)超過0.5度，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有較高靈敏度。

CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應(yīng)一定量的CO2,一般5%即可維持培養(yǎng)液PH值穩(wěn)定。

第75頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第76頁,共99頁，2024年2月25日，星期天冰箱細胞培養(yǎng)的冰箱應(yīng)特別注意清潔，

防止污染。第77頁,共99頁，2024年2月25日，星期天水純化裝置細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。一般需要使用重蒸或三蒸水配置各種培養(yǎng)用液。第78頁,共99頁，2024年2月25日，星期天過濾裝置各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進行除菌消毒處理。微化濾膜濾器是目前應(yīng)用最廣泛的過濾裝置。第79頁,共99頁，2024年2月25日，星期天細胞冷凍貯存器細胞冷凍貯存具有經(jīng)濟、省力和較好保持細胞生物學(xué)特性的優(yōu)點，目前各實驗室主要使用液氮容器貯存細胞。第80頁,共99頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)器皿

培養(yǎng)器皿包括各種規(guī)格的玻璃、塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿，吸管，離心管等。第81頁,共99頁，2024年2月25日，星期天洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。分析間：顯微鏡、計算機及打印機等。

第82頁,共99頁，2024年2月25日，星期天第83頁,共99頁，2024年2月25日，星期天無菌操作的要領(lǐng)

由于體外培養(yǎng)的細胞缺乏機體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。超凈工作臺消毒

打開紫外線殺菌燈照射消毒20～30分鐘，然后關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機，流入的空氣是經(jīng)過除菌板過濾的空氣，工作臺可保持無菌環(huán)境。洗手

操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用0.2%新潔爾滅或75%的酒精棉球擦拭。

第84頁,共99頁，2024年2月25日，星期天火焰消毒

所使用物品均應(yīng)經(jīng)過燒灼，所用瓶口等開啟或封蓋時均需迅速旋轉(zhuǎn)過火焰進行消毒。

注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過長。

燒過的用具均要待冷卻后再接觸組織細胞。

吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼,否則會燒焦形成炭膜,再用時會將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。

第85頁,共99頁，2024年2月25日，星期天合理布局

右手使用方便的用品放右側(cè)，左手使用方便的用品放左側(cè)。酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立,易增加落菌機會）。吸取各種用液應(yīng)分別使用吸管，不能混用。

第86頁,共99頁，2024年2月25日，星期天五)、培養(yǎng)細胞形態(tài)分析

培養(yǎng)細胞隨貼附支持物形狀不同而形態(tài)各異，最常見的是貼附于平面支持物細胞。在一般光鏡下生存中的細胞是均質(zhì)而透明的，結(jié)構(gòu)不明顯。細胞在生長期常有1-2個核仁在細胞機能狀態(tài)不良時，細胞輪廓會增強，反差增大。若胞質(zhì)中時而出現(xiàn)