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第第頁土壤淀粉酶(SoilAmylase,S-AL)試劑盒說明書土壤淀粉酶(SoilAmylase,SAL)試劑盒說明書微量法100T/48S注意:正式測定之前選擇23個預期差異大的樣本做預測定。測定意義:淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來自于微生物,是一種重要的酶制劑,廣泛應用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。測定原理:淀粉酶水解淀粉產生還原糖,可與3,5二硝基水楊酸反應生成紅棕色物質,在508nm處有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內與還原糖量成正比。需自備的儀器和用品:天平、水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。試劑的組成和配制:試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。若出現沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。試劑三:液體12mL×1瓶,4℃保存。測定操作表:對照管測定管土樣(g)0.020.02甲苯(μL)101025℃靜置15min試劑一(μL)11050試劑二(μL)60充分混勻,37℃震蕩1h,8000rpm,25℃,離心10min上清液(μL)100100試劑三(μL)100100充分混勻,90℃水浴5min,待冷卻后,于微量石英比色皿/96孔板中測定508nm吸光值,分別記為A對照管和A測定管,△A=A測定管A對照管。計算公式:a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線:y=0.2525x0.034,R2=0.9917酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個酶活力單位。SAL(mg/d/g鮮重)=(△A+0.034)÷0.2525×V反總÷W÷T=10.464×(△A+0.034)÷WV反總:反應體系總體積,0.11mL;T:反應時間,1/24d;W:樣本質量,g。b.用96孔板測定的計算公式如下標準曲線:y=0.1263x0.034,R2=0.9917酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個酶活力單位。SAL(mg/d/g)=(△A+0.034)÷0.1263×V反總÷W÷T=20.928×(△A+0.
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