（高清版）WST 834-2024 剛地弓形蟲試驗臨床應用

WSWS/T834—2024ClinicalapplicationoftestsforToxoplasmaWS/T834—2024I——將安全預防措施更改為生物安全（見4，2013年版的6年版的4.1），在直接鏡檢中增加了概述（見6.2.1.1）、體液標本（見6.2.1.2）、組織活檢標本印片（見6.2.1.3）、組織活檢標本切片（見6檢測指標（見6.3.2）和抗體檢測方法（見6.3.3），刪除了剛地弓形蟲IgG抗體檢測2013年版的4.2.4）和剛地弓形蟲IgE抗體方法的選擇中增加概述（見6.4.1）、初篩實驗室（見6.4.2）和確證實驗室7.2)、實驗室內(nèi)結(jié)果可比性（見7.3）和實驗室加了概述（見8.1），將確定抗體狀況更改為特殊人群發(fā)生感染的風險評估（見8.2，見2013將新生兒感染的診斷更改為先天性感染的診斷（見8.5，見2013年——在附錄A中新增檢驗程序性能驗證（見A.2），刪除了試驗選擇（見2013年版的A.2）、假陽性WS/T834—20241剛地弓形蟲試驗臨床應用GB/T38576人類血液樣本采集GB/T38735人類尿液樣本采集WS/T573感染性疾病免疫測定程序及結(jié)果報告WS/T661靜脈血液標本采集指南CNAS-CL02-A001醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則的應用CNAS-GL037臨床化學定量檢驗程序性能驗CNAS-GL038臨床免疫學定性檢驗程序性能驗3.1剛地弓形蟲Toxoplasmagondii3.2身有核細胞內(nèi),形成包囊后可長期寄生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)或橫紋肌內(nèi),免疫功能正常情況下可不出現(xiàn)明顯WS/T834—202423.3免疫功能低下者或缺陷者易發(fā)病，為機會性人4生物安全險較高的直接鏡檢和組織培養(yǎng)等操作過程中，存在感染相關(guān)人員的風險，應嚴格按照《醫(yī)學實驗室安通常可在-20℃以下冷凍保存180天。凍存標本如需多次使用，能分裝的應分裝，避免多次凍融。不同類型和不同檢驗項目的標本，均應避免細菌污染，按照要求常溫或冷鏈和組織活檢標本（腦組織、淋巴結(jié)、肺組織、骨髓、肝臟組織、脾臟組織等）。骨髓標本應使用EDTA檢標本，常溫3天內(nèi)送檢。若是多種標本需要同一天平行檢測，在5.4核酸檢測標本W(wǎng)S/T834—20243組織、淋巴結(jié)、肺組織、骨髓、肝臟組織、脾臟組織等）。血液和骨髓標本應使用EDT5.5血清學檢測標本項目，可將實驗室分為弓形蟲病初篩實驗室和6.2病原學檢查用10％甲醛溶液固定，水沖洗，依次經(jīng)70％、8將染液覆蓋涂片、印片或是切片表面，染色1min～3min，滴加等量的磷酸鹽緩沖液至玻片上，輕WS/T834—20244脊液、支氣管肺泡灌洗液或羊水離心沉淀，用培養(yǎng)基將沉淀物重懸后與組織細胞（血清或體液中的循環(huán)抗原比特異性抗體出現(xiàn)早，是篩查病原體存在的重要依據(jù)，可使用ELISA雙抗附錄A。目前國內(nèi)尚無通過國家藥品監(jiān)督管理局注冊的弓形蟲抗原檢測試劑盒。如果實驗室自行研制檢為確定是否感染，可應用分子生物學技術(shù)如聚合靈敏度起著至關(guān)重要的作用。目前國內(nèi)尚無通過國家藥品監(jiān)督管理局注冊的弓形蟲PCR試劑盒為靶基因，引物和探針相結(jié)合使用不僅可提高檢測的特異性和靈敏度，而且無需進行PCR擴增后的產(chǎn)物序列為靶基因，并提供靶基因序列、擴增體系和擴增條件來介紹實時熒光PCR檢測弓形蟲核6.3抗體檢測WS/T834—20245血清學檢測弓形蟲抗體是目前臨床實驗室診斷弓形蟲感染的主要方法。IgM、IgG、IgA、IgE和IgG親和力檢測均有助于弓形蟲感染和弓形蟲病的診斷，檢測方法主要包括ELISA、化學發(fā)光免疫分析及免IgM：感染后第1周即可在血清中檢測到，被認為是急性弓形蟲病早期敏感的診斷指標IgG：感染后1周～2周可在血清中檢測到，通常在1個月～2個月內(nèi)達到高峰個體下降速度不同，往往可終身持續(xù)陽性。定性的IgG抗體被認為是感染過的指標，無法區(qū)分既往和近期感染。定量IgG抗體4倍以上滴度或濃度增高可提示近期活動IgG親和力：在急性感染期IgG與抗原結(jié)合力較弱，在慢性感染期抗體與抗原結(jié)親和力檢測是區(qū)分既往和近期感染的另一指標。高IgG親和力提示感染至少發(fā)生在3個月～5個月之前，為判斷慢性感染最有用的指標，可排除急性感染。但IgG低親和力并不一定提示近期感染，因低親和力或是單次檢測IgM陽性，IgG陰性或陽性。上述幾種情況一般可以作為弓形蟲近期感染用間接法，IgM檢測可使用間接法或捕獲法。間接法是將可溶性抗原包被于固相載體；患者血清與抗原取吸光度值。不同廠商的產(chǎn)品操作步驟不盡相同，應按照產(chǎn)品說明書要求進行實驗。弓形蟲IgG抗體有抗體。計算尿素處理標本與未處理標本的終點滴度比值，以百分數(shù)CLIA是目前弓形蟲IgG和IgM抗體測定的主流方法，其精密度、靈敏度和特異性均高于ELISA，可以做IgG、IgM定量檢測，但需要使用化學發(fā)光免疫分析儀，其中IgG檢測最常使用間接法或是雙抗原夾心法，IgM檢測常使用捕獲法。不同廠商的產(chǎn)品檢測原理和操作步驟不盡相同，應按照產(chǎn)品說明書要求進WS/T834—20246ICT可定性檢測弓形蟲IgG和IgM抗體。將特異性抗原固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)6.4檢驗方法的選擇移植供者、器官移植受者移植前后、HIV陽性者、疑似感染者等常規(guī)篩查。有條件的初篩實驗室宜開展弓形蟲IgG親和力檢測，在弓形蟲IgG檢測陽性后，進一步檢測IgG親和力，以區(qū)為弓形蟲病診斷較難，應將IgG、IgM和IgG親和力檢測結(jié)果提示可能近期感染的患者標本送至弓形蟲病目前國內(nèi)尚無官方認可的弓形蟲病確證實驗室，此處確證實驗室特指除開展弓形蟲抗體IgG、IgM和IgG親和力檢測外，還同時開展弓形蟲病原學檢查的實驗室。該類實驗室通常至少應開展弓形蟲血清行聯(lián)合檢測，具體可根據(jù)實驗室自身條件進行選擇，但至少應包括血清學篩查試驗和1項確證試驗，確樣品可以獲取，因此本部分主要規(guī)定弓形蟲7.2室內(nèi)質(zhì)控實驗室應常規(guī)開展弓形蟲檢測項目的室內(nèi)質(zhì)控。每檢測日或分析批使用陰性、弱陽性和/或陽性外部質(zhì)控品進行質(zhì)控。陽性質(zhì)控品濃度宜在2～4倍臨界值，陰性質(zhì)控品濃度宜在0.5倍臨界值左右。使用7.3實驗室內(nèi)結(jié)果可比性7包括人員（手工）和不同方法/檢測系統(tǒng)間的比對，至少選擇2份陰性標本（至少1份其它標志物陽性的原因，并采取必要的糾正指施，及評估糾正指施的有效性，保留相應的結(jié)果不一致時應分析不一致的原因，必要時，采取有效的糾正措施。應保留參加能力驗證/室間質(zhì)評的代方案并提供客觀證據(jù)，確定檢驗結(jié)果的可8.2特殊人群發(fā)生感染的風險評估篩查血清中的弓形蟲IgG抗體，選擇ELISA或CLIA等靈敏度高的試驗即可。IgG抗體陰性一般提示未獲得感染，陽性提示可能感染弓形蟲。以下情況應篩查血清中是否存在弓形蟲I——育齡婦女妊娠前：免疫力正常的婦女弓形蟲IgG抗體陽性提示有免疫力，將感染垂直傳播給胎——首次HIV陽性確診后：弓形蟲IgG抗體陽性且CD4+T淋巴細胞計數(shù)＜100/μL,提示存在需要治療——器官移植供者捐贈前：供者弓形蟲IgG抗體陽性提示受者存在器官移植發(fā)生弓8.3急性獲得性感染的診斷力檢測結(jié)果能夠提供額外的證據(jù)支持或否定近期感染。IgM陰性基本上可排除近期感染。IgM和IgG均陽性可提示近期感染；但是，一些患者初始感染后血清IgWS/T834—20248---±不確定：重新采集標本檢測IgM；如果結(jié)果仍是±,應3周內(nèi)重新采集標本檢測。-+±-不確定：重新采集標本檢測IgG；如果結(jié)果仍是±,應3周內(nèi)重新采集標本檢測?！馈馈?+-+±不確定：重新采集標本檢測IgM；如果結(jié)果仍是±,應3周內(nèi)重新采集標本檢測。++注陽性陰性；±,可疑陽性。8.4妊娠及孕前感染診斷所有孕婦應盡早（妊娠前3個月最為理想）進行弓形體抗體IgG和IgM的篩查試驗。妊娠期感染診斷和采取及時的治療十分重要。疑似母體感染孕婦應轉(zhuǎn)至有胎兒醫(yī)學的產(chǎn)前診斷機構(gòu)進行診治。妊娠后第1次檢測弓形體抗體IgG和IgM，如果在妊娠的較早階段（4周～12周）IgG抗體陽性、IgM感染，IgG親和力高提示慢性感染4個月基本如果采集胎兒血液標本，應進行病原體形態(tài)學檢查、弓形蟲IgG、IgM和IgA檢測。結(jié)合非特異性感WS/T834—20249可做出先天性感染的診斷。新生兒血清弓形蟲IgM或IgA抗體陽性，2～4天后復測弓形蟲IgM仍為陽性，或10天后復測弓形蟲IgA仍為陽性，提示先天性弓形蟲感染?？梢芍袠猩窠?jīng)系統(tǒng)感染時，采集腦脊液進之外的實驗室檢測。當疑似疾病處于活動期時，血清弓形蟲IgG抗體陽性支持眼部弓形蟲病的診斷，但呈升高趨勢，因此弓形蟲IgM抗體陰性不能排除眼部弓組織、胎盤等部位中的蟲體進行直接鏡檢、分離培養(yǎng)或核酸檢測來確陽性供者的移植，有發(fā)生弓形蟲感染的風險；IgG抗體陽性有潛伏感染再激活的風險，宜連續(xù)監(jiān)測外周所有艾滋病病毒感染者確診后應立即檢測弓形蟲IgG抗體以發(fā)現(xiàn)潛伏感染。大多數(shù)弓形蟲腦炎的艾WS/T834—2024A.1試劑盒目前屬于體外診斷試劑第三類產(chǎn)品的弓形蟲抗體IgG、IgM和IgG親和力測定試劑盒通過國家藥品監(jiān)督管A.2檢驗程序性能驗證WS/T834—2024B.1.1B1基因序列（基因序列號AF1gaattcgttcgacagaaagggagcaagagttgggactaaatcgaagctgagatgctcaaagtcgaccgcgagatagaagggctgactcgaaccagatgtgctaaaggcgtcattgctgttctgtcctatcgcaacggagttcttcccagacgtggatggttccgcctccttcgtccgtcgtaatatcaggccttctgttctgttcgctgtctgtctagggcacccttactgcaagagagaggtcatatcgtcccatgaagtcgaccacctgtttcctctcttcactgtcacgtacgacatcgcattcaagggaagagatctctcgttcgtgtattcgagacaagagaggtccgcccccacaagacggctgaagaatgcaacattcttgtgctgcctcctctcatgccagaagaagggtacgtgttgcatcataacaagagctgtatttcccgctggcaaatacaggtgaaatgtacctccagaactagtatcgtgcggcaatgtgccacctcgcctcttgggagaaaaagaggaagagacgctgccgctgttttgcaaatgaaaagtttcgcagtacaccaggagttggattttgtagagcgtctctcttcaagcagcgtattgtcgagtagatcagaaaggaactgccatgagtataagaaaaaaatgtgggaatgaaagagacgctaatgtgtttgcataggttgcagtcactgacgagctcccc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