GB-T生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價

技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationforefficacyevaluationofheterocyclic

pesticidesdegradationbybiologicalproducts

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥的功效評價原理、試劑與材料、儀器設(shè)備與器具、分析步驟

和結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解類雜環(huán)類農(nóng)藥的效果評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T15818培養(yǎng)基配置方法

SN/T1591進(jìn)出口茶葉中9種有機(jī)雜環(huán)類農(nóng)藥殘留的檢驗方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文本。

3.1

生物產(chǎn)品biologicproducts

利用生物技術(shù)獲得的微生物和酶產(chǎn)品。

3.2

雜環(huán)類農(nóng)藥heterocyclicpesticides

分子中含有雜環(huán)結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物農(nóng)藥。

3.3

降解功效degradationefficacy

生物產(chǎn)品降解能力。

4原理

生物產(chǎn)品對氨基甲酸酯類農(nóng)藥降解處理后，經(jīng)液液萃取，凈化，濃縮，定容后，采用氣相色譜-質(zhì)

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譜聯(lián)用技術(shù)檢測，外標(biāo)法定量。計算生物制品對雜環(huán)類農(nóng)藥的降解效率。

5儀器和設(shè)備

5.1恒溫振蕩器：轉(zhuǎn)速0-300r/min；溫控范圍，室溫-100℃。

5.2分光光度計：波長330nm-800nm，吸光度精確至0.001。

5.3pH計：精度0.01。

5.4高速冷凍離心機(jī)：最小離心力為8000g，具有1.5mL離心管。

5.5分析天平：精度0.001g、0.01g、0.1g。

5.6恒溫水浴鍋：精度為±0.1℃。

5.7比色皿：1cm。

5.8氣相色譜儀：配質(zhì)譜檢測器。

5.9色譜柱：30m×0.25mm毛細(xì)管柱，壁涂5%苯基聚硅氧烷，膜厚0.25μm。

5.10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5.11活性炭固相萃取小柱：250mg或相當(dāng)者。

5.12中性氧化鋁固相萃取小柱：250mg或相當(dāng)者。

5.13固相萃取裝置，帶真空泵。

5.14微量注射器：10μL。

6試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

6.1雜環(huán)類農(nóng)藥

雜環(huán)類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99％。

6.2基礎(chǔ)培養(yǎng)基

按照GB/T15818中方法配制。或選用商品化的預(yù)制干燥培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照商品說明書加水配制。

6.30.01mol/L磷酸鹽緩沖液，pH8.0

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分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4，量取Na2HPO461mL,NaH2PO439mL,用3

mol/L的稀鹽酸和1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH備用。

7分析步驟

7.1試驗設(shè)計

不同類型生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效試驗設(shè)計應(yīng)符合表1要求。

表1.生物產(chǎn)品降解雜環(huán)類農(nóng)藥功效試驗設(shè)計

產(chǎn)品種類

項目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

1.供測樣品

處理設(shè)計2.失活樣品

3.空白對照

雜環(huán)類農(nóng)藥選擇莠去津、氯苯嘧啶醇、腐霉利、吡蟲啉、多菌靈、百草枯

將雜環(huán)類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用丙酮配制成1.00mg/mL的儲備溶液，

農(nóng)藥處理

4℃冷藏保存?zhèn)溆?/p>

重復(fù)次數(shù)不少于3次

降解反應(yīng)條件按正交試驗結(jié)果確定

7.2微生物產(chǎn)品試驗實施

7.2.1培養(yǎng)基制備

選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基，或根據(jù)微生物特殊生長需要對培養(yǎng)基進(jìn)行改良。

7.2.2供試樣品處理

塊狀固體產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行研磨處理。

7.2.3失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進(jìn)行121oC，30min殺菌處理。

7.2.4最佳反應(yīng)體系確定

設(shè)計正交試驗，影響因素宜選取微生物制品添加量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時間、底物濃度等，

確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.2.5降解試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應(yīng)體系確定

的底物濃度，制備底物溶液，滅菌后備用。然后根據(jù)微生物添加量，制備成反應(yīng)體系為100mL的培養(yǎng)

液，在最佳反應(yīng)體系條件下進(jìn)行降解反應(yīng)。

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7.3酶產(chǎn)品試驗實施

7.3.1供試樣品處理

固體酶產(chǎn)品應(yīng)進(jìn)行研磨處理，稱取一定質(zhì)量的供試固體酶粉，采用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀

釋為不同濃度（g/mL）備用；若供試樣品為液體，用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀釋為不同濃度（mL/mL）

備用。

7.3.2失活樣品處理

取供試的固體或液體酶樣品在100oC下進(jìn)行30min的酶失活處理。

7.3.3最佳反應(yīng)條件確定

設(shè)計正交實驗，影響因素宜選擇酶濃度、底物濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、緩沖液體系及其pH值

等，確定最佳反應(yīng)體系條件。

7.3.4降解試驗

取25mL離心管9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應(yīng)體系確定

的酶濃度、底物濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、pH值，制備成反應(yīng)體系為10mL的反應(yīng)液，在最佳反應(yīng)

體系條件下進(jìn)行降解反應(yīng)。

8結(jié)果分析

8.1樣品前處理

按照SN/T1591-2005要求進(jìn)行處理。

8.2測定

按照SN/T1591-2005要求進(jìn)行測定

8.3結(jié)果計算

降解率按照式（1）計算：

..............................(1)

式中：

R——降解率（%）；

Xi——底物原始濃度（mg/L）；

Xa——為供試樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）；

Xb——為失活樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）；

Xc——為空白樣品降解反應(yīng)終點底物濃度（mg/L）。

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以平行樣的平均值為最終的降解率值，計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。

8.4結(jié)果判定

以降解率的大小評價被測試生物產(chǎn)品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時，降解效果為

好；降解率大于等于60%，小于80%時，降解效果為良好；降解率大于等于40%，小于60%