臨床分子生物學(xué)檢驗復(fù)習(xí)提綱

臨床分子生物學(xué)檢驗復(fù)習(xí)提綱臨床分子生物學(xué)檢驗DVA的一級結(jié)構(gòu)是由哪種化學(xué)鍵連接？兩條單鏈間：堿基氫鍵；相鄰堿基間：范德華力；脫氧核苷酸間：3’-5’磷酸二酯鍵可以出現(xiàn)在人體循環(huán)系統(tǒng)中的游離核苷酸是？脫氧核苷酸，核糖核酸原核生物DNA的復(fù)制方式是？θ型半保留復(fù)制核小體結(jié)構(gòu)中的組蛋白是哪些蛋白？各自的作用有？H2A、H2B、H3、H4：核心顆粒，形成核小體。H1：連接線上，鎖定核小體、參與包裝PCR體系中抑制Taq酶活性的物質(zhì)有哪些？過量加入什么會減少Mg2+濃度導(dǎo)致Taq酶活性降低？游離的Mg2+濃度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基團，螯合劑如EDTA均可與鎂離子結(jié)合減少Mg2+濃度。PCR擴增時，鏈的延伸從什么地方開始？對于引物是哪一端？模板鏈呢？從引物的3’端開始，方向5’到3’；模板DNA序列的3’端；3’端在波長260nm的紫外線下，A值=1時雙鏈DNA的濃度大約相當(dāng)于？50ug/ml的雙鏈DNA。（40ug/ml的單鏈DNA或單鏈RNA，33ug/ml的單鏈寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸濃度的鑒定）計算公式：雙鏈DNA＝50×A260樣本×稀釋倍數(shù)÷1000（ug/ul）單鏈DNA／RNA＝40×A260樣本×稀釋倍數(shù)÷1000（ug/ul）單鏈寡聚核苷酸DNA＝33×A260樣本×稀釋倍數(shù)／1000（ug/ul）關(guān)于基因的定義正確的是？能編碼有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能單位。是遺傳的結(jié)構(gòu)和功能單位。一個基因大都包括編碼蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA的編碼序列，保證轉(zhuǎn)錄和加工所必須的調(diào)控序列（啟動子，增強子），5’端、3’端非編碼序列。β—地中海貧血患者的基因缺陷主要是？基因突變中的點突變10.Taq酶的特性有？有很高的耐熱穩(wěn)定性酶量增加使反應(yīng)特異性下降，酶量過少影響反應(yīng)產(chǎn)量；TaqDNA聚合酶無3′→5′外切酶活性，因而無校正功能，在復(fù)制新鏈的過程中會發(fā)生堿基錯配；TaqDNA聚合酶在每次循環(huán)中產(chǎn)生的移碼突變率為1/30000，堿基替換率為1/8000，因此擴增的片段越長，錯配的機率越高。實時熒光定量PCR技術(shù)中非特異性熒光染色技術(shù)？SYBRGreenI12.人類基因組DNA多態(tài)性的形式？限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）；短序列重復(fù)序列（STR）;單核苷酸多態(tài)性（SNP）13.常用于菌種鑒定的分子標(biāo)志物是？16sRNA14.真核生物染色體的DNA三級結(jié)構(gòu)不是閉環(huán)雙鏈超螺旋結(jié)構(gòu)的是？15.原核生物RNA聚合酶的特性有？原核生物細(xì)胞中只有1種RNA聚合酶，可參與合成mRNA、tRNA和rRNA。RNA聚合酶催化聚合反應(yīng)時需要Mg2+或Mn2+。該酶無校正功能。PCR反應(yīng)的特異性取決于？引物DNA的變性是指？在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。變性后其它理化性質(zhì)變化：增色效應(yīng) 粘度下降比旋度下降 浮力密度升高酸堿滴定曲線改變 生物活性喪失18.參與DNA復(fù)制的酶有哪些？（1）DNA聚合酶（2）拓?fù)洚悩?gòu)酶：:兼具內(nèi)切酶和連接酶活力，能迅速將DNA超螺旋或雙螺旋緊張狀態(tài)變成松馳狀態(tài)，便于解鏈。(3）DNA解鏈酶（4）單鏈結(jié)合蛋白(SSB)：結(jié)合在解開的DNA單鏈上，防止重新形成雙螺旋。(5）引物酶和引發(fā)體：啟動RNA引物鏈的合成。(6）DNA連接酶第一個分離到的抑癌基因是？視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因（Rb基因）20.1978年簡悅威采用Southen分子雜交技術(shù)檢測出了什么疾?。跨牋罴?xì)胞貧血癥核酸的分離和純化中，沉淀DNA的常用試劑是？常用的有機溶劑有：乙醇、異丙醇、聚乙二醇常用的鹽類有：醋酸鈉、醋酸鉀、醋酸銨、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂等。通過紫外分光光度法可對核酸純度進行鑒定，怎么鑒定？反過來是否成立？否通過A260與A280的比值來判斷有無蛋白質(zhì)的污染。在TE緩沖液中：純DNA的A260／A280比值為1.8；純RNA的A260／A280比值為2.0【注意事項：（1）蛋白質(zhì)及酚的污染均可使比值下降，可通過蛋白質(zhì)在280nm的高吸收峰與酚在270nm的高吸收峰來鑒別。（2）RNA污染可致DNA樣品的比值高于1.8。（3）比值為1.8的DNA溶液不一定是純DNA溶液，可能兼有蛋白質(zhì)、酚、RNA的污染。（4）2.0是高質(zhì)量的RNA的標(biāo)志，但由于RNA二級結(jié)構(gòu)的不同，其讀數(shù)可能會在1.8～2.1之間波動。RNA溶液的pH值會影響A260／A280的讀數(shù)，在水溶液中A260／A280的比值比在Tris緩沖液（pH7.5）的讀數(shù)低0.2～0.3。因此，精確測定RNA的濃度應(yīng)使用水溶液，精確測定RNA的純度應(yīng)使用Tris10mmol/L（pH7.5）溶液?！?3.對于等位基因突變位點已被闡明的一些遺傳病，可以采用基因診斷的方法是？直接診斷：Southern印跡技術(shù)多重PCR技術(shù)PCR-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）等位基因特異性寡核苷酸（ASO）DNA芯片技術(shù)（DNAchip）單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）變性梯度凝膠電泳（DGGE）DNA序列分析（DNAsequencing）GGTACC24.限制性內(nèi)切酶的（通常指Ⅱ類）特點是？（ⅡGGTACC回文結(jié)構(gòu)CCTAGG切口：平端切口--平末端粘端切口--粘性末端【同功異源酶：來源不同的限制酶，能識別和切割同一位點。同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識別序列不完全相同，但切割DNA后產(chǎn)生相同的粘性末端】例如:淀粉液化芽胞桿菌（Bacillusamyloliguefaciens）H株第1種限制性內(nèi)切酶，命名為BamHⅠ25以mRNA為模板合成cDNA的酶是（RT—PCR內(nèi)容）？逆轉(zhuǎn)錄酶26.Sanger法DNA測序時ddNTP（雙脫氧核苷酸，少一個羥基）的作用是？ddNTPs是反應(yīng)終止劑，可以當(dāng)作正常堿基參與復(fù)制，一旦鏈入DNA中，其后就不能再繼續(xù)連接。27Southern印跡法的步驟有？=1\*GB3①待測核酸樣品的制備=2\*GB3②

瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品=3\*GB3③電泳凝膠預(yù)處理=4\*GB3④轉(zhuǎn)膜=5\*GB3⑤探針標(biāo)記=6\*GB3⑥預(yù)雜交=7\*GB3⑦Southern雜交=8\*GB3⑧洗膜=9\*GB3⑨放射性自顯影檢測28.DVA芯片技術(shù)的本質(zhì)？核酸分子雜交技術(shù)影響限制性內(nèi)切酶活性的物質(zhì)有？乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高濃度金屬離子,均會降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.大腸桿菌（原核生物）基因組的特點？DNA較小；基因數(shù)目較少；通常為一條環(huán)狀雙鏈DNA（dsDNA）；只有一個DNA復(fù)制起始點；GC含量差異很大；基因組DNA位于細(xì)胞中央的核區(qū)，無核膜，形成類核結(jié)構(gòu)；結(jié)構(gòu)基因中無內(nèi)含子；多數(shù)為單拷貝基因，編碼rRNA、tRNA的基因為多拷貝；具有編碼同功酶的基因。乙肝病毒（病毒）基因組特點？=1\*GB3①分子較小，基因數(shù)少；=2\*GB3②雙鏈DNA病毒（逆轉(zhuǎn)錄：是一類特殊類型的單鏈正鏈RNA病毒，含有RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶，能使RNA反轉(zhuǎn)錄生成DNA。）【每種病毒只含一種核酸（RNA或DNA），可為雙鏈或單鏈、環(huán)狀或線性】=3\*GB3③基因組中有基因重疊現(xiàn)象；=4\*GB3④有操縱子結(jié)構(gòu)和相關(guān)基因叢集；=5\*GB3⑤少或無重復(fù)序列；=6\*GB3⑥基因組中編碼序列占90%以上；=7\*GB3⑦含有不規(guī)則結(jié)構(gòu)基因。32檢測目標(biāo)是RNA的雜交技術(shù)是？Northern印跡雜交檢測目標(biāo)是DNA的雜交技術(shù)是？Southern印跡雜交、反向點雜交（RDB）、原位雜交細(xì)胞內(nèi)壽命最短的RNA是？mRNA細(xì)胞內(nèi)含量最多的RNA是？rRNA細(xì)胞內(nèi)具有調(diào)控功能的RNA是？miRNAPCR結(jié)果電泳圖的閱讀，各個條帶分別代表的意義？哪些是marker,哪些是有效條帶？哪些是非特異擴增？哪些是引物二聚體？產(chǎn)生這些條帶的原因？DNA模板濃度過高引物濃度過高，形成引物二聚體TaqDNA聚合酶酶量過多dNTP濃度過高Mg2+濃度過高退火溫度過低延伸時間過長C+G堿基含量在引物中比例過高【引物二聚體是在PCR反應(yīng)中，兩條引物上的互補堿基相結(jié)合形成的聚合體，這種聚合體出現(xiàn)了，就相當(dāng)于原本可以擴增的原料鏈減少了，即會導(dǎo)致擴增的效率降低?！科渲泻苤匾囊粋€就是引物自身的原因，也就是設(shè)計的引物特異性不好，不能有效的和模板進行結(jié)合，而出現(xiàn)引物自身配對結(jié)合的情況其次還可能是PCR體系及反應(yīng)條件的問題，如果PCR體系中引物、鎂離子以及酶濃度過高，模板量過低，退火時間過長等，都容易產(chǎn)生二聚體39.根據(jù)堿基互補原則計算DNA中ATGC各種的含量？和人類線粒體基因組有關(guān)的疾病有哪些？（了解）耳聾，糖尿病41.RNA鏈的合成方向？5’→3’42.抑癌基因的作用？（存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一類可抑制細(xì)胞過度生長與增殖的基因，從而有潛在抑癌作用，當(dāng)這類基因發(fā)生突變、缺失或失活時，可引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。）誘導(dǎo)終末分化維持基因穩(wěn)定觸發(fā)衰老，誘導(dǎo)細(xì)胞程序性死亡抑制蛋白酶活性或改變DNA甲基化酶活性調(diào)節(jié)血管形成促進細(xì)胞間聯(lián)系參與原核生物轉(zhuǎn)錄終止的因子是？ρ因子【原核生物轉(zhuǎn)錄的終止有兩種主要機制.一種機制是需要蛋白質(zhì)因子ρ（Rho）的參與,稱為依賴ρ因子(ρfactor)的轉(zhuǎn)錄終止機制,另一種機制是在離體系統(tǒng)中觀察到,純化的RNA聚合酶不需要其他蛋白質(zhì)因子參與,可使轉(zhuǎn)錄終止,稱為不依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止機制.】原核生物DNA聚合酶Ⅰ具有的酶活性有？主要用于修復(fù)DNA5’→3’聚合酶活性與延伸能力3’→5’外切酶活性與校對功能（保真性