臨床化學檢驗操作規(guī)程

臨床化學檢驗操作規(guī)程

蛋白質測定

血清總蛋白（TP）測定

雙縮腺法（常規(guī)測定，標化測定）

【試劑】

選用市售優(yōu)質試劑，蛋白標準液使用市售定值參考血清

（非定值質控血清）

【操作】

按試劑盒儀器專用說明書設置程序，輸入?yún)?shù)，用自動

或半自動生化分析儀自動測定或手工操作比色測定，波長

540nln。

【標本】

血清（血漿）一般空腹為宜，忌溶血。

尿液：收集24小時的尿液，防腐，并記錄其總量。

血清白蛋白（ALB）測定

溟甲酚綠法

【試劑】

市售優(yōu)質試劑。

【操作】

按試劑盒及儀器使用說明書設置程序，輸入?yún)?shù)，用自

動或半自動生化分析儀自動測定，或手工比色測定，波長

630nm。

【標本】

血清（漿）空腹為宜，忌溶血，室溫可保存8小時,2~8t

可保存48小時。

糖類測定

體液葡萄糖測定

1.葡萄糖氧化酶（G0D）法，波長505nm。

2.已糖激酶（HK）法，波長340nm。

3.鄰甲苯胺（0—TB）法，波長630nm。

4.葡萄糖脫氫酶（GDH）法，波長340nm。

【試劑】

市售優(yōu)質試劑。

【操作】

1.按試劑盒中的說明書手工操作，比色測定，如GOD

法,O~TB法；

2.按試劑及儀器的使用說明書設置程序，輸入?yún)?shù)，

用自動或半自動生化分析儀測定；

3.手工測定推薦GOD法，HK法宜用自動生化分析儀測

定，該法為公認的參考方法。

【標本】

1.血清(一般空腹血為宜)或草酸鉀一氟化鈉抗凝血

漿，若暫不能測定，應即時分離出血清密封4?8T保存；

2.腦脊液：宜用GOD、HK、O~TB法測定，暫不能測定

應4?8℃保存；

3.尿液：收集24h尿，防腐，記錄總量，以0—TB法

及GOD氧電極法測定為宜。

葡萄糖耐量試驗(OGTT)

【方法】

1.空腹抽血、留尿，送檢空腹血糖及尿糖；

2.稱取葡萄糖75克溶於200~300ml開水中，令受試者

一次服下，記下開始服糖的時間；

3.服糖后每隔0.5h、lh、2h、3h,各抽血留尿一次，

送檢血、尿糖；

4.將各次所測血糖和尿糖定性結果以數(shù)字或曲線報告。

受試者受試前三天可正常進食，但應停用胰島素或其它

降糖藥；服糖后每次抽血應準時，時間誤差應控制在±3分

鐘以內。

無機離子測定

鉀鈉測定

火焰光度法（參考方法）

【試劑】

鉀、鈉標準，市售，或自配。

【操作】

嚴格按各廠家出售的火焰光度計的說明書操作，用直接

法或內標法測定，直接法每次測鈉前均應測定幾個標準液的

激發(fā)光強度繪制標準曲線，或用120、140、160mmol/L三個

鈉標準液作比較法測定計算，鉀可用單一標準液來計算測定

結果。

離子選擇電極(ISE)法

【試劑】

由生產(chǎn)該儀器的廠家提供，不同廠家其配方不盡相同，

不可相互代用。

【操作】

按各廠家出產(chǎn)的電解質分析儀的使用說明書操作，經(jīng)定

標通過，穩(wěn)定后用直接電位法或間接電位法測定。

【標本】

血清應盡快與血球分離，即時測定，或冰箱內保存；尿

液應作適當倍數(shù)稀釋，使尿鉀濃度在以內，尿鈉

測定讀數(shù)應在高、中、低，三個標準液中的兩個標準讀數(shù)之

間。

氯化物測定

電極法

【試劑】

定標液由生產(chǎn)該類分析儀的廠家提供，各廠家的配方不

盡相同不可相互替代使用。

【操作】

各廠家生產(chǎn)的電解質分析儀一次進樣可同時測定、K\

Na\CL，操作程序與鉀、鈉電極法測定同。

硝酸汞滴定法

【試劑】

市售試劑或參照有關書刊文獻自配，滴定指示劑宜選二

苯卡巴蹤，該試劑應貯於棕色瓶中避光保存。

【操作】

按試劑說明書或相應文獻規(guī)定的程序操作，對溶血、黃

疸及混濁的血清標本，可用其無蛋白濾液滴定。

硫新酸汞比色法

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑。

【操作】

按試劑說明書的程序操作，比色測定，或按試劑及儀器

使用說明書要求設置程序，輸入?yún)?shù)用自動或半自動生化分

析儀自動測定，波長460nm。

【標本】

血清、尿、腦脊液。血樣抽出后應迅速將血清分出，以

避免氯離子轉移作用使測得結果偏高。

血鈣測定

1.EDTA絡合滴定法；

2.鄰甲盼酰絡合酮比色法。波長:575nm；

3.甲基麝香草酚蘭比色法。波長：610nm；

4.離子選擇電極（ISE）法。

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑。

ISE法需用儀器生產(chǎn)廠家提供的定標液（同鉀鈉，氯ISE

測定法）。

【操作】

按市售試劑操作（滴定法與比色法）或按ISE法鉀鈉氯

鈣電解質分析儀說明書操作；滴定法與比色法測得的是總

鈣，ISE法測得的為離子鈣，離子鈣的含量與樣品的pH有關,

故所用的儀器應帶有pH測定校正程序，以計算出在生理pH

（7.4）下的鈣離子濃度。

【標本】

血清或肝素抗凝之血漿，不可用鈣螯合劑或草酸鹽抗凝

的血漿。

血氣分析

用血氣與酸堿分析儀進行分析，同時測定PCO2、P02、與

pH三項基本指標，由此演算出氣體酸堿平衡診斷的其它各項

指標，血氣分析屬危重，搶救病人的監(jiān)測項目。

【試劑】

嚴格使用各儀器生產(chǎn)廠家提供的與其儀器配套專用試

劑，不同廠家的試劑不可任意代用，定標液清洗液室溫存放

即可。

【標本】

肝素抗凝動脈血，或動脈化的毛細血管血，采血針管內

不得留有氣泡，血采出后立即用小橡皮塞或塑料塞密封采血

管，隔絕血液與外界空氣的接觸，并立即送檢，如暫不能送

檢應即時置4~8t冰箱中保存，時間以不超過2小時為宜。

【操作】

血氣與酸堿分析儀基本上分為帶有電解質測定和不帶

有電解質測定二大類（有的除帶有電解質外，尚帶有葡萄糖,

Urea及乳酸的測定），在氣體定標上，一類為直接標準氣定

標，另一類為儀器配氣定標，嚴格按儀器使用說明書規(guī)定操

作、保養(yǎng)，測樣前進行儀器定標，并輸入病人抽血樣時的體

溫，Hb含量等參數(shù)，定標通過，穩(wěn)定后方可進行血樣測定。

酶類測定

血清丙氨酸氨基移換酶（ALT）測定

血清門冬氨酸氨基移換酶（AST）測定

這兩個酶的測定在方法上、操作程序上以及試劑等的要

求上基本一致。

賴氏（Reitman）法（比色法）

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑，每批試劑的空白管吸光度應W0.015A,

如超出此范圍則應檢查試劑及儀器等方面的問題。

【操作】

按試劑盒的說明書手工操作，比色測定，波長505nm；

并從預先繪制好的標準曲線中查得該酶的活性。

酶偶聯(lián)速率法（連續(xù)監(jiān)測法）

【試劑】

市售成套試劑，有“單試劑法”及“雙試劑法”二種市

售試劑盒均可使用，目前推薦雙試劑法，它是ALT、AST測

定的首選法，市售的ALT、AST底物溶液其起始吸光度必須

大於1.2A,空白測定值必須小於5u/L,否則提示此試劑已

不合格，不能使用。

【操作】

按試劑及儀器使用說明書設定程序，輸入?yún)?shù)，用自動

生化分析儀測定，波長340rlm。

【標本】

血清，忌溶血，血清應即時分離，室溫可保存二天，4℃

可保存一周，-25七可保存一月，但不推薦冰凍保存，更不

宜反復凍溶，遇有嚴重脂血或黃疸的血清樣品，測定時應作

血清標本對照管(賴氏法)。

血清堿性磷酸酶(ALP)測定

連續(xù)監(jiān)測法

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑，其中的磷酸對硝基苯酚底物液要求：

1.酶水解轉換率(4-NPP-4NP)必須大於98%。

2.4-NPP的摩爾吸光度:波長311nm介質10mmol/LNaOH,

1-1

溫度25℃E=9867±76L.mor?cmo

3.游離4-NPVO.3mmol/mol4-NPP；

4.無機磷酸VlOmmol/mol4-NPP。

試劑應貯于棕色瓶中4~8C保存。

【操作】

按試劑盒及儀器說明書要求，設定程序，輸入?yún)?shù)用自

動或半自動生化分析儀測定，波長450nm。

比色法

【試劑】

市售或按正式出版的書刊文獻自配。

【操作】

按試劑盒或相應文獻規(guī)程比色測定，波長510nm；標準

曲線繪制，樣品測定，查標準曲線求得ALP活力單位。

【標本】

血清或肝素抗凝血漿。忌用草酸鹽、檸檬酸鹽，EDTA-

Na2抗凝血。

血清（尿液）淀粉酶測定

碘一淀粉比色法

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑或參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二版

自配，底物緩沖淀粉液配好后其PH應在7.0±0.1范圍內，

貯冰箱保存。

【操作】

參照試劑盒說明書或上述“規(guī)程”第二版，手工比色測

定，波長600nln。

肝功能試驗

血清總膽紅素(TBIL)和結合膽紅素(DBIL)測定

改良「G法

【試劑】

參照書刊文獻(如《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二版)

自配，配制標準液的膽紅素應符合如下標準，純膽紅素的氯

仿溶液在25P當光徑1.000±0.OOlCm,波長453nm條件下其

摩爾吸光系數(shù)應在60700±1600范圍內，偶氮膽紅素的摩爾

吸光系數(shù)應在74380±866范圍內，配制標準液的稀釋劑須

含白蛋白，可用牛血清白蛋白或人血清代替人血清白蛋白。

標準液應貯於棕色瓶中避光保存，在市售試劑中以含堿性酒

石酸的靈敏度特異性高。

【操作】

按試劑盒說明書或相應書刊文獻規(guī)程手工操作，比色測

定，波長600rlm.制作準曲線。血樣測定，從標準曲線上求

TBIL及DBIL的含量以umol/L報告。

也可按廠家提供的試劑及儀器使用的說明書的要求將

相應的程序及參數(shù)設入，用自動生化分析儀測定。

【標本】

血清，空腹血為宜，脂血、脂溶性色素及嚴重溶血干擾

此測定，暫不能測定的標本應避光保存，室溫可穩(wěn)定8h,

2~8七可保存48h。

含疊氮鈉作防腐劑的質控血清不宜用此法測定膽紅素。

膽紅素氧化酶(BOD)法

【試劑】

市售成套試劑。BOD試劑復溶后2~8匕可保存一周。

【操作】

按廠家提供的試劑及儀器說明書要求設置程序輸入?yún)?/p>

數(shù)用自動生化分析儀測定。波長450或460nln。

【標本】

血清要求與改良J-G法相似。

二甲亞楓(DMS0)法

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑。

【操作】

按試劑盒說明書手工操作比色測定或用自動生化儀測

定。波長560nmo

【標本】

血清、輕度脂血，溶血標本對結果無明顯影響、重度脂血、

溶血標本須作標本空白進行較正。

血清肌肝Cr測定

堿性苦味酸去蛋白終點法

【試劑】

市售試劑。

【操作】

按試劑說明書手工操作，比色測定。波長510nm。

制備無蛋白濾液，顯色、比色、計算結果以Crumol/L

報告。

【標本】

血清（漿）2~4寸可保存三天。

堿性苦味酸鹽反應一速率法

【試劑】

市售試劑盒。

【操作】

按試劑盒及儀器使用說明書要求設定相應的程序及各

項參數(shù)用自動生化分析儀測定。波長510nm。

【標本】

與前法同。血清（漿）

尿液，用蒸鐳水作20~50倍稀釋后測定。

血清尿酸UA測定

磷鴿酸還原法

【試劑】

按有關書刊文獻，如《全國臨僦檢驗操作規(guī)程度》第二

版自配或市售試劑盒。

【操作】

按相關書刊文獻規(guī)程或市售試劑說明書手工操作，制備

無蛋白濾液，比色測定（波長660nm）計算，以umol/L報告

結果。

【標本】

血清（漿）（但忌用抗凝劑草酸鉀抗凝的血漿）尿液。

血、尿標本室溫可穩(wěn)定3天。

尿酸一過氧化物酶偶聯(lián)法

【試劑】

市售試劑盒，或按有關書刊文獻自配。

【操作】

按相應書刊文獻規(guī)程或試劑盒說明書手工操作比色測

定，或用自動生化分析儀測定。波長520rlln。

【標本】

同磷鴿酸還原法。以甲醛為防腐劑的尿酸標準液不可用

於此法測定。但可用於磷鴇酸還原法。

血液脂類測定

標本采集與處理

1.受檢者抽血前二周應保持平衡的飲食習慣，近期體

重穩(wěn)定無外傷，手術等意外情況。并注意如有使用降糖、降

脂、降壓、避孕藥，受體阻滯劑，免疫抑制劑，激素藥

物等，則應根據(jù)所用藥物特性停藥數(shù)天或數(shù)周后再作血液脂

類檢測。

2.空腹抽血，TG,脂蛋白，載脂蛋白測定應至少禁食

12小時（僅作膽固醇測定不必強求空腹）24小時內不作劇

烈運動。抽血前不要久站立。至少應靜坐5分鐘。抽血時止

血帶使用不可超過1分鐘。

3.標本用血清，也可用肝素或EDTA.Na?抗凝之血漿。

EDTA.Na?濃度不宜太高。

4.血標本室溫放置不得超過3h,放置30~45分鐘后應

即時分離出血清（漿）蓋封於49冰箱中可穩(wěn)定至少4天，

如需長期保存，應於-7（rc中冰凍存放，不可反復凍融。

血清總膽固醇（TC）測定

酶法（CHOD~PAP法）

【試劑】

市售現(xiàn)成試劑。

【操作】

按試劑及儀器使用說明書要求設定程序，輸入?yún)?shù)用自

動或半自動生化分析儀測定（速率法）終點法可手工操作，

用普通分光光度計比色測定。波長500nm或520nln。

【標本】

血清(漿)參看本節(jié)的標本采集與處理。

【附注】

本法為中華醫(yī)學會檢驗學會推薦的TC測定常規(guī)方法(中

華醫(yī)學檢驗雜志，1995、18：185)O

膽固醇標準液以定值參考血清為宜，而不宜用Choi的

水溶液作標準。C