用ModFit軟件分析DNA倍體和細(xì)胞周期

DNA倍體和細(xì)胞周期分析

2021/3/29星期一1細(xì)胞周期和DNA倍體分析的原理G0/G1期DNA含量為2CS期細(xì)胞,DNA含量開始增加,>2CG2/M期細(xì)胞,DNA含量開始增加至4C1、正常細(xì)胞DNA含量穩(wěn)定在2C水平2、性細(xì)胞DNA含量為1C3、處于增殖期至分裂期細(xì)胞由

2C增加至4C4、凋亡細(xì)胞DNA斷裂,含量<2C2021/3/29星期一2細(xì)胞經(jīng)熒光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞DNA含量，可得到細(xì)胞周期三個時相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（％），可以反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)和非二倍體（異倍體）的DNA含量Diploid:100.00%DipG1:54.38%at46.90DipG2:15.91%at91.61DipS:29.71%G2/G1:1.95%CV:5.23G0/G1SG2/M2021/3/29星期一3DNA檢測的常用術(shù)語

表示流式分析中DNA含量的分辨率或精確度。通常由G0/G1峰的CV來反映【

%CV=（SD/mean）x100】。影響CV的因素主要包括兩方面：儀器因素（如液流、光路、機(jī)器調(diào)試等）和樣本制備及染色過程對標(biāo)本的人為影響。1.變異系數(shù)（CoefficientofVariation，CV）2021/3/29星期一4DI指的是腫瘤樣本G0/G1峰的平均道數(shù)與人正常二倍體G0/G1峰的平均道數(shù)之間的比值。DI為1意味著二倍體（2c）（一般正常范圍為0.9~1.1）。倍體（Ploidy）：原指染色體數(shù)目。流式中用來描述總的DNA含量。二倍體細(xì)胞有正常細(xì)胞的DNA含量但不除外染色體異常。DI為1.9-2.1的細(xì)胞為四倍體（CV為5%時）。在二倍體和四倍體區(qū)域之外的統(tǒng)稱異倍體。2.DNA指數(shù)（DNAindex，DI）和倍體（Ploidy）DNA檢測的常用術(shù)語

2021/3/29星期一5結(jié)果分析CellQuest、WinMDI等軟件均可以進(jìn)行分析，但需要手工進(jìn)行參數(shù)統(tǒng)計和計算；推薦使用ModFit分析軟件（分析如下：）1、打開軟件；2、在FL2-W/FL2-A散點圖中設(shè)定單個細(xì)胞門（R1），去除聚集細(xì)胞，必要時可以設(shè)兩個門。3、在FL2-A直方圖中顯示R1中細(xì)胞的DNA含量直方圖注：該軟件可以自動分析，也可手動分析；可以分析凋亡、異倍體、各期比例等；結(jié)果均自動計算。2021/3/29星期一6ModFit分析2021/3/29星期一7ModFit分析2021/3/29星期一8ModFit分析2021/3/29星期一9ModFit分析2021/3/29星期一10ModFit分析2021/3/29星期一11ModFit分析2021/3/29星期一12:qq.003Dateanalyzed:3-Jun-2009Model:1DA0A_DSFAnalysistype:ManualanalysisDiploid:100.00%DipG1:63.02%at44.61DipG2:18.55%at86.71DipS:18.44%G2/G1:1.94%CV:6.12TotalS-Phase:18.44%TotalB.A.D.:5.45%Apoptosis:15.11%Mean:19.05Debris:6.04%Aggregates:1.72%Modeledevents:2775Allcycleevents:2166Cycleeventsperchannel:50RCS:6.238ModFit分析2021/3/29星期一13ModFit分析2021/3/29星期一14【重要參數(shù)】DI（DNA指數(shù),判斷倍體數(shù)）=（標(biāo)本G0/G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù)）/（正常二倍體細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞峰的平均熒光道數(shù)）PI(增殖指數(shù),表示細(xì)胞的增殖活性)（%）＝（S+G2M）/（G0/G1+S+G2M）×100%SPF(S期細(xì)胞比率,表示細(xì)胞的增殖活性)（%）=S/（G0/G1+S+G2M）×100%2021/3/29星期一15【倍體和細(xì)胞周期分析】發(fā)現(xiàn)DNA異倍體(二倍體峰DI>1.1或<0.9；四倍體峰DI>2.1或<1.9)，診斷為腫瘤或癌前病變；如無明顯異倍體，但有一個突出的4倍體細(xì)胞峰和>15%的S期細(xì)胞，并伴有G0/G1峰的CV>9%，提示為腫瘤或增生旺盛的病變

；如無明顯異倍體，但G0/G1峰的CV增大，并伴有>10%~15%的S期細(xì)胞和一個突出的4倍體峰，診斷為可疑腫瘤或增生旺盛的病變。2021/3/29星期一16發(fā)現(xiàn)癌前病變，協(xié)助腫瘤早期診斷

在腫瘤的診斷、預(yù)后判斷和治療中的作用

在指導(dǎo)腫瘤化療中的作用

【臨床意義】2021/3/29星期一17乳腺癌DNA異倍體患者生存率乳腺癌腫瘤細(xì)胞異倍體患者長期生存率顯著下降2021/3/29星期一18【臨床病例】Diploid:46.75%DipG1:97.54%at46.06DipG2:0.58%at92.12DipS:1.88%G2/G1:2.00%CV:2.26Aneuploid1:47.55%An1G1:93.05%at49.83An1G2:0.00%at99.67An1S:6.95%G2/G1:2.00%CV:2.13DI:1.08Aneuploid2:5.70%An2G1:94.97%at55.72An2G2:5.03%at103.44An2S:0.00%G2/G1:1.86%CV:4.52DI:1.21AL骨髓2021/3/29星期一19Diploid:64.50%DipG1:92.45%at49.24DipG2:2.30%at98.48DipS:5.26%G2/G1:2.00%CV:3.21Aneuploid1:35.50%

An1G1:97.69%at58.53An1G2:0.00%at123.89An1S:2.31%G2/G1:2.12%CV:3.14DI:1.19TotalAneuploidS-Phase:2.31%TotalS-Phase:4.21%TotalB.A.D.:0.35%Debris:1.14%Aggregates:0.00%Modeledevents:3567Allcycleevents:3526Cycleeventsperchannel:47RCS:2.356MM骨髓2021/3/29星期一20宮頸脫落細(xì)胞2021/3/29星期一21Diploid:97.61%DipG1:97.74%at49.78DipG2:0.02%at99.57DipS:2.25%G2/G1:2.00%CV:6.49Aneuploid1:2.39%An1G1:84.90%at75.79An1G2:15.10%at109.99An1S:0.00%G2/G1:1.45%CV:3.