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第第頁植物葉綠素(chlorophyll)含量試劑盒說明書植物葉綠素(chlorophyll)含量試劑盒說明書微量法100T/96S注意:正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義:植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中,其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān),是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標(biāo)。測(cè)定原理:葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可計(jì)算得葉綠素a和葉綠素b以及總?cè)~綠素含量。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:天平、研缽、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃試管、錫箔紙、丙酮。試劑組成和配制:試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。測(cè)定操作:1.稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織,去掉中脈,稱取約0.1g,剪碎,用蒸餾水洗干凈。2.提取液的準(zhǔn)備:取240mL蒸餾水和960mL丙酮,充分混勻待用。3.加入1mL蒸餾水,少量試劑一(約50mg),在黑暗或弱光條件下充分研磨,轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。4.用提取液沖洗研缽,將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管,用提取液補(bǔ)充至10mL,玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h,觀察試管底部組織殘?jiān)黽an全變白則提取wan全,若組織殘?jiān)磜an全變白,繼續(xù)浸提至其wan全變白。5.取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板,提取液調(diào)零,測(cè)定663nm和645nm處吸光值,分別記為A663和A645。計(jì)算公式:葉綠素a含量(mg/g鮮重)=(12.7×A663–2.69×A645)×V提×D÷m÷1000=0.01×(12.7×A663–2.69×A645)×D÷m葉綠素b含量(mg/g鮮重)=(22.9×A645–4.68×A663)×V提×D÷m÷1000=0.01×(22.9×A645–4.68×A663)×D÷m葉綠素總含量(mg/g鮮重)=(20.21×A645+8.02×A663)×V提×D÷m÷1000=0.01×(20.21×A645+8.02×A663)×D÷mV提:提取液體積,10mL;D:稀釋倍數(shù);m:樣本質(zhì)量,g注意事項(xiàng):1.葉綠素對(duì)光敏感,研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進(jìn)行。2.一定要浸提至組織殘?jiān)黽an全變白,否則提取不充分。3.用提取液
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