關(guān)于膽紅素的若干問題

關(guān)于膽紅素的若干問題宋克征（總工程師）寧波美康生物科技有限公司學(xué)術(shù)講座5/8/20241關(guān)于膽紅素的若干問題珠蛋白COFe2+膽綠素還原酶NADPH+H+NADP+Hb血紅素膽綠素膽紅素血紅素加氧酶系一、來源單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)）（一）膽紅素的代謝5/8/20242關(guān)于膽紅素的若干問題膽紅素線狀結(jié)構(gòu)膽紅素的X線衍射結(jié)構(gòu)二、結(jié)構(gòu)與性能5/8/20243關(guān)于膽紅素的若干問題三、膽紅素在血液中的運(yùn)轉(zhuǎn)白蛋白與膽紅素結(jié)合的意義（1）可以進(jìn)入血液循環(huán)。（2）可以阻止膽紅素透過細(xì)胞膜，進(jìn)入血腦屏障。5/8/20244關(guān)于膽紅素的若干問題四、與膽紅素競(jìng)爭(zhēng)白蛋白的因素pH環(huán)境和鈣離子某些陰離子藥物：磺胺類抗菌素、巴比妥和水楊酸鹽游離脂肪酸等白蛋白的分子濃度5/8/20245關(guān)于膽紅素的若干問題五、膽紅素在肝細(xì)胞內(nèi)的代謝膽紅素葡萄糖醛酸一酯膽紅素葡萄糖醛酸二酯（結(jié)合膽紅素）攝取結(jié)合排入膽汁血液白蛋白－膽紅素（間）白蛋白膽紅素（間）連接蛋白－膽紅素連接蛋白2UDP葡萄糖醛酸2UDP葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）連接蛋白肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素5/8/20246關(guān)于膽紅素的若干問題雙葡萄糖醛酸酯占85-90％單葡萄糖醛酸酯占10-15％六、結(jié)合膽紅素的結(jié)構(gòu)5/8/20247關(guān)于膽紅素的若干問題七、膽紅素在腸道的運(yùn)轉(zhuǎn)進(jìn)入新一輪的膽紅素代謝5/8/20248關(guān)于膽紅素的若干問題（二）黃疸黃疸的分類（1）

溶血性黃疸，肝前性黃疸（2）肝細(xì)胞黃疸，肝性黃疸（3）阻塞性黃疸，肝后性黃疸（4）體質(zhì)性黃疸，慢性先天性黃疸5/8/20249關(guān)于膽紅素的若干問題（三）δ膽紅素一、δ膽紅素的結(jié)構(gòu)和性能二、δ膽紅素存在的意義5/8/202410關(guān)于膽紅素的若干問題一、δ膽紅素的結(jié)構(gòu)和性能δ膽紅素的半衰期為17-23天δ膽紅素不被肝細(xì)胞攝取，不能通過腎小球85%δ膽紅素與重氮試劑呈直接反應(yīng)δ膽紅素具有良好的穩(wěn)定性δ膽紅素有一個(gè)新名稱——膽蛋白非酯型酯型5/8/202411關(guān)于膽紅素的若干問題二、δ膽紅素存在的意義膽紅素多了一個(gè)成分。

TBIL=Bu＋mBc+dBc＋Bδδ膽紅素的發(fā)現(xiàn)讓人們認(rèn)識(shí)到臨床好轉(zhuǎn)但黃疸不退的真實(shí)原因。δ膽紅素的出現(xiàn)讓人們懂得了用測(cè)Bc代替直接膽紅素的測(cè)定，這樣可以更加直接地了解真實(shí)病情。計(jì)算Bδ/TBIL有助于判斷恢復(fù)期肝病的預(yù)后。δ膽紅素在正常人以及高Bu病人（新生兒黃疸）中缺乏。δ膽紅素僅在那些脂型高膽紅素血癥的病人血清中被檢測(cè)到。5/8/202412關(guān)于膽紅素的若干問題（四）新生兒膽紅素一、新生兒的生理性黃疸50-60%足月產(chǎn)的嬰兒和大于80%的早產(chǎn)兒于出生后2-3天出現(xiàn)黃疸，4-5天出現(xiàn)高峰。一般足月兒兩周內(nèi)消退，早產(chǎn)兒3-4周消退。生理性黃疸的上限：足月兒<205.2μmol/L早產(chǎn)兒<257μmol/L二、病理性黃疸的特點(diǎn)1.生后24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)2.重癥黃疸>205-265μmol/L3.持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)4.可以退而再現(xiàn)5/8/202413關(guān)于膽紅素的若干問題三、核黃疸的風(fēng)險(xiǎn)下面列出的數(shù)據(jù)供我們檢驗(yàn)新生兒膽紅素的時(shí)候作為警戒性的參考足月新生兒膽紅素>308-362μmol/L

早產(chǎn)病弱兒膽紅素>137-205μmol/L

有可能出現(xiàn)新生兒的核黃疸。提示盡快進(jìn)入藍(lán)光治療。光療十分有效，膽紅素會(huì)迅速下降。用420-470nm波長(zhǎng)，每日可下降51.3-85.5μmol/L。光療的機(jī)理在藍(lán)光照射下，體內(nèi)的膽紅素很快會(huì)從ZZ構(gòu)型轉(zhuǎn)化為EE構(gòu)型，使膽紅素的極性增加，能溶于水，從而有害的毒性膽紅素（Bu）會(huì)大量從尿和膽汁中排出體外。5/8/202414關(guān)于膽紅素的若干問題（五）膽紅素的檢測(cè)一、SFDA對(duì)膽紅素測(cè)定的新要求標(biāo)準(zhǔn)化：企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，逐級(jí)升高。量值溯源：通過一條比較鏈，使檢測(cè)的結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)值與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來。檢測(cè)系統(tǒng)：完成一個(gè)項(xiàng)目所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序等的組合，量值溯源要求采用整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)。基體效應(yīng)5/8/202415關(guān)于膽紅素的若干問題基體效應(yīng)分析樣品中，除分析物以外的所有其他物質(zhì)和組分，稱為該分析物的基體，亦稱“介質(zhì)”或“基質(zhì)”。檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)樣品中的分析物時(shí)，處于分析物周圍的所有非分析物對(duì)分析物參與反應(yīng)的影響，稱基體效應(yīng)。對(duì)定標(biāo)和質(zhì)控的基體效應(yīng)應(yīng)予以特別關(guān)注。對(duì)基體效應(yīng)大小的估計(jì)強(qiáng)調(diào)采用回收實(shí)驗(yàn)。5/8/202416關(guān)于膽紅素的若干問題二、測(cè)準(zhǔn)膽紅素的基本方法方法不復(fù)雜，測(cè)準(zhǔn)很困難！膽紅素的特性——不穩(wěn)定存在三怕：怕熱、怕光、怕氧化羅氏公司對(duì)膽紅素不穩(wěn)定的估計(jì)cfas校正液使用說明書對(duì)膽紅素可用的穩(wěn)定時(shí)間的規(guī)定TBILDBIL15-25℃

6小時(shí)3小時(shí)2-8℃

24小時(shí)8小時(shí)-20℃

2周2周（只許融凍一次）5/8/202417關(guān)于膽紅素的若干問題正常值質(zhì)控異常值質(zhì)控

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8小時(shí)4小時(shí)2-8℃

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2周2周（只許融凍一次）

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2周2周（只許融凍一次）5/8/202418關(guān)于膽紅素的若干問題3.基本方法的設(shè)計(jì)必須充分考慮、周到地照顧到以上關(guān)于穩(wěn)定時(shí)限的規(guī)定。安排好定標(biāo)和質(zhì)控的兩個(gè)環(huán)節(jié)，是能否測(cè)準(zhǔn)的根本關(guān)鍵。在實(shí)際的操作中，思想上要有“動(dòng)”的觀念，去觀察分析結(jié)果而作相應(yīng)的修正，如果觀察不仔細(xì)，很容易脫靶，使結(jié)果超出允許范圍。5/8/202419關(guān)于膽紅素的若干問題三、化學(xué)氧化法測(cè)膽紅素的實(shí)踐按檢測(cè)系統(tǒng)規(guī)定做好準(zhǔn)備，實(shí)施舉例如下：儀器：Hitachi7060試劑：美康化學(xué)氧化法測(cè)總直膽紅素雙試劑校準(zhǔn)品：以羅氏cfas為模板，美康公司自產(chǎn)T/D兩項(xiàng)混合校正液（凍干品）質(zhì)控品：以羅氏高低二水平質(zhì)控為模板，美康公司自產(chǎn)T/D兩項(xiàng)混合質(zhì)控液（凍干品）操作參數(shù)5/8/202420關(guān)于膽紅素的若干問題5.操作參數(shù)方法：兩點(diǎn)終點(diǎn)法；反應(yīng)總時(shí)間，10分鐘；光徑，1.0cm；波長(zhǎng)，546nm/450nm（主）；樣品:R1:R2為8:240:60(μL)步驟：樣品＋R1孵育5分鐘，測(cè)空白吸光度A1，

加入R2反應(yīng)5分鐘，測(cè)最后吸光度A2。計(jì)算：5/8/202421關(guān)于膽紅素的若干問題6.注意貫徹“動(dòng)”的觀念，具體操作嚴(yán)格做到定標(biāo)與質(zhì)控使用中嚴(yán)格遵守規(guī)定的時(shí)限要求，還要做到同步操作。以上規(guī)定，可隨不同牌號(hào)的儀器，做適當(dāng)?shù)男薷?，但不能改?dòng)比例。結(jié)果評(píng)判：試劑空白吸光度<0.01

準(zhǔn)確度：優(yōu)等，靶值±10％以內(nèi)及格，質(zhì)控進(jìn)入允許范圍線性范圍：TBIL>684μmol/LDBIL>342μmol/L

r2≥0.995幾點(diǎn)體會(huì)5/8/202422關(guān)于膽紅素的若干問題d.幾點(diǎn)體會(huì)對(duì)臨床的肝細(xì)胞黃疸、阻塞型黃疸樣品直膽/總膽≥50%有時(shí)DBIL結(jié)果出現(xiàn)零值。這是正?，F(xiàn)象，答案應(yīng)在膽紅素代謝中去找。權(quán)威雜志上