朊病毒的發(fā)現與研究課件

朊病毒的發(fā)現與研究5/8/20241朊病毒的發(fā)現與研究課件一.朊病毒的定義

朊病毒又稱蛋白質侵染因子、毒朊或感染性蛋白質，是一類能侵染動物并在宿主細胞內復制的小分子無免疫性疏水蛋白質。5/8/20242朊病毒的發(fā)現與研究課件二.朊病毒引起的疾病18世紀冰島羊瘙癢病1920sH.CreutzfieldtA.Jacob人克雅氏病1950s巴布亞-新幾內亞（G.ajdusek）庫魯病1980s英國瘋牛病5/8/20243朊病毒的發(fā)現與研究課件

丹尼爾·伽杜塞克

（D.Gajdusek)

由于查明庫魯病的病因，認為是一種潛伏期極長的進行性病毒

獲得1976年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎

5/8/20244朊病毒的發(fā)現與研究課件

三.朊病毒的發(fā)現

1997年，為肯定斯坦利·普魯希納在研究克雅氏?。–reutzfeldt-Jakobdisease，CJD）病原體的過程中發(fā)現了朊蛋白（Prion），并在其致病機理的研究方面的貢獻。授予其諾貝爾生理學或醫(yī)學獎5/8/20245朊病毒的發(fā)現與研究課件研究困難人們對這類疾病的研究，困難較大，主要表現在：

發(fā)病率低病程慢傳染病/遺傳病不清楚病因/病原物找不到共同特征：

病程慢，都有神經系統(tǒng)退行性癥狀，腦部出現淀粉樣沉淀，形成海綿狀空斑人們猜想：

這是一種“慢病毒”在起作用

1.改進檢測方法目標：分離，純化病原物，并加以鑒定5/8/20246朊病毒的發(fā)現與研究課件艱巨的研究歷程普魯西納1972年遇見一列克雅氏病人，病人6星期后死去1974年普魯西納正式開始對羊搔癢病開始研究，1982年發(fā)表第一篇文章1975年起，普魯西納得到并用于研究的經費共5000多萬美元5/8/20247朊病毒的發(fā)現與研究課件普魯西納的研究工作

目標：分離，純化病原物，并加以鑒定，每步都離不開檢測方法5/8/20248朊病毒的發(fā)現與研究課件把瘙癢病從羊轉至小鼠發(fā)病潛伏期3-5年4-5個月5/8/20249朊病毒的發(fā)現與研究課件得到難以相信的實驗結果

原來預期得到一種小型病毒結果所有實驗數據表明：病原物不是小型病毒，不含核酸，而是蛋白質粒子經過八年的實驗反復論證（1974-1982）發(fā)表第一篇文章:

提出羊瘙癢病病原物是一種蛋白質粒子

蛋白質類的感染顆粒（ProteinoceousInfectiousParticle，Prion）

5/8/202410朊病毒的發(fā)現與研究課件質疑？？？沒有核酸，這個病原物如何增殖？如何復制本身的遺傳信息是不是存在核酸，只是未能檢測出來5/8/202411朊病毒的發(fā)現與研究課件隨著研究深入，得到更多打破傳統(tǒng)觀念的結果（1）尋找Prn-p基因編碼朊蛋白的基因，不但在染病動物腦中存在，在正常動物腦中也有，而且表達的一樣多正常小鼠（PrPc)

得病小鼠（PrPsc）結論：PrPsc的出現可能不是調節(jié)基因起作用的5/8/202412朊病毒的發(fā)現與研究課件（2）朊蛋白在正常動物腦中的功能是什么剔除PrP基因的遺傳工程小鼠，看不出病癥，看起來一切正常，亦能正常生育（3）PrP%小鼠做出貢獻把染病小鼠的腦提取物接種給PrP%小鼠，不染病，接種給普通小鼠卻染病由此得出：PrPc蛋白的存在是染病的必要條件5/8/202413朊病毒的發(fā)現與研究課件（4）PrPc蛋白的一些性質由208個氨基酸殘基組成，分子量33-35kd（大小僅為最小病毒的1%）含有一對二硫鍵和2個N型復合糖鏈，二硫鍵和糖基化位點都在C端N端有22個氨基酸殘基組成的信號肽序列C端有由23個氨基酸殘基組成的糖基磷酸肌醇錨（GPI)受體結合位點。說明PrPc是一種膜結合糖蛋白5/8/202414朊病毒的發(fā)現與研究課件（5）PrPc與PrPsc的一級結構都由同一基因編碼，氨基酸序列完全相同兩者并無共價修飾的區(qū)別利用傅里葉轉換紅外光譜對兩者結構進行比較，發(fā)現兩者的二級結構有很大區(qū)別5/8/202415朊病毒的發(fā)現與研究課件PrPc和PrPsc的立體結構比較

PrPc：有4個α-螺旋極少β折疊

PrPsc:

有2個α-螺旋有4個β-折疊

5/8/202416朊病毒的發(fā)現與研究課件（6）PrPc和PrPsc在高級結構上的差別，在細胞內蛋白質的行為和代謝特征上也反應出來

PrPcPrPsc胞內定位細胞表面胞質內蛋白酶水解水解完全局部水解5/8/202417朊病毒的發(fā)現與研究課件（7）綜合以上結果，提出理論假設：

羊瘙癢病的發(fā)生是因為PrPsc的入侵，把腦細胞中原來就有的PrPc“帶壞”，使正常的PrPc重新折疊，形成新的高級結構PrPsc

增多的PrPsc形成淀粉樣沉淀，造成腦細胞破壞，形成空斑5/8/202418朊病毒的發(fā)現與研究課件四.朊病毒的感染，預防以及治療

人或動物感染PrPsc↓由淋巴細胞進入中樞神經系統(tǒng)或直接進入中樞神經系統(tǒng)↓與神經元表面正常的PrPc作用↓

PrPc→PrPsc→導致神經元細胞凋亡裂解5/8/202419朊病毒的發(fā)現與研究課件

人類朊蛋白病的起病方式有散發(fā)行，遺傳性，傳染性等。80%的病例不是傳染的結果，而是散發(fā)的，有或者沒有遺傳易感性。5/8/202420朊病毒的發(fā)現與研究課件

抗性抵抗蛋白酶K的消化作用標準的高壓蒸汽滅菌（121.3℃，20min），不能破壞朊病毒，需要高壓蒸汽滅菌134℃，≥2h，才能使其失去傳染性對輻射，紫外線，及常用消毒劑有很強抗性5/8/202421朊病毒的發(fā)現與研究課件預防消滅已知的感染牲口，對病人進行適當的隔離加強肉品檢驗，不許病牛羊肉上市，禁止其產品與人接觸禁止使用污染的食物，對神經外科的操作及器械進行消毒要嚴格規(guī)范化，對角膜及硬腦膜的移植要排除供者患病的可能對有家庭型疾病的家屬更應注意防止其接觸該病5/8/202422朊病毒的發(fā)現與研究課件治療化學治療特異性抗體治療：單克隆抗體免疫被動療法RNA干擾免疫治療5/8/2024