第十三章 發(fā)熱、疼痛及抗課件

第十三章發(fā)熱、疼痛及抗應(yīng)激實驗方法吉林大學藥學院第十三章發(fā)熱、疼痛及抗[造模機制]發(fā)熱反應(yīng)大多是由致熱因子作用于機體，產(chǎn)生和釋放內(nèi)熱原，并進一步影響體溫調(diào)節(jié)中樞，使體溫調(diào)定點提高，體溫相應(yīng)升高。此外，物理方法可直接刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，引起體溫升高。2024/5/82第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*發(fā)熱動物模型常用實驗動物

實驗前需挑選健康、體溫合格的動物。*家兔發(fā)熱反應(yīng)較靈敏而穩(wěn)定，故在發(fā)熱研究中最為常用。也可以選大鼠。而小鼠和豚鼠的恒溫功能差，對發(fā)熱刺激的反應(yīng)性低，不宜用于復制發(fā)熱模型。2024/5/83第十三章發(fā)熱、疼痛及抗發(fā)熱動物模型常用致熱原(因子)

復制發(fā)熱動物模型的常用致熱原有：傷寒、副傷寒菌苗、大腸桿菌菌液、細菌內(nèi)毒素(感染性)、干酵母、角叉菜膠、松節(jié)油、2,4-二硝基苯酚、蛋白胨及脫脂奶粉(非感染性)等。*引起動物發(fā)熱所需致熱原的劑量與致熱原的致熱效價、實驗動物的耐受力等有關(guān)。故同一致熱原在不同時間、條件、在不同批動物中使用時，所需劑量可能很不一致。因此，在每次實驗前，應(yīng)通過預試驗來確定致熱原的合適劑量。2024/5/84第十三章發(fā)熱、疼痛及抗常用發(fā)熱動物模型

復制發(fā)熱動物模型時，一般首選內(nèi)毒素引起的家兔發(fā)熱模型，然后為干酵母致大鼠發(fā)熱模型、角叉菜膠致大鼠發(fā)熱模型和2,4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型。2024/5/85第十三章發(fā)熱、疼痛及抗內(nèi)毒素引起家兔發(fā)熱模型

[造模原理]

內(nèi)毒素（endotoxin）是最重要的致熱原，進入機體后可激活單核巨噬細胞產(chǎn)生內(nèi)生性致熱原，內(nèi)生性致熱原經(jīng)血流進入大腦，于下丘腦前部引起體溫調(diào)節(jié)中樞環(huán)核苷酸系統(tǒng)改變，前列腺素合成增加，體溫調(diào)定點上移，產(chǎn)熱增加，散熱減少，引起發(fā)熱。2024/5/86第十三章發(fā)熱、疼痛及抗[模型評價]

*

本法為測定藥物解熱作用的最經(jīng)典通用方法，體溫曲線呈內(nèi)毒素發(fā)熱的典型雙峰熱型，結(jié)果穩(wěn)定、可靠、重復性好，是研究解熱藥作用的有用方法。[注意事項]

室溫、劑量等。2024/5/87第十三章發(fā)熱、疼痛及抗干酵母引起大鼠發(fā)熱模型

[造模原理]

用酵母（yeast）混懸液給大鼠（或家兔）皮下注射，先引起動物體溫下降。一段時間后動物體溫明顯升高，并持續(xù)較長時間，局部有明顯炎癥反應(yīng)，與臨床伴內(nèi)臟或皮膚有明顯急性炎癥的里熱證類似，故可用此作為發(fā)熱動物模型以研究藥物的解熱效果。2024/5/88第十三章發(fā)熱、疼痛及抗[結(jié)果]皮下注射干酵母懸液后，大鼠體溫先有一個迅速而明顯的體溫降低階段，至4h左右始恢復正常，然后迅速升高，至7~10h達高峰，持續(xù)12h以上。[模型評價]啤酒酵母、甜酒干酵母及面包酵母。啤酒酵母的來源及保存不便，且其用量不易做到各批實驗保持一致。面包酵母制成懸液給大鼠皮下注射，能引起與啤酒酵母類似的體溫變化，原料易得可長期保存。

[注意事項]操作上的細節(jié)。2024/5/89第十三章發(fā)熱、疼痛及抗角叉菜膠引起大鼠發(fā)熱模型

[造模原理]較大劑量的角叉菜膠皮下注入可引起一個持續(xù)的炎癥反應(yīng)，并激活巨噬細胞，引起發(fā)熱。[模型評價]角叉菜膠所致大鼠發(fā)熱時，注射腳爪部位有紅、熱、腫、痛為特點的強烈的急性炎癥，又有全身發(fā)熱。發(fā)熱有一個較長的潛伏期且穩(wěn)定，*故本法是一個用以研究解熱藥作用的有用模型，尚能同時結(jié)合觀察藥物對角叉菜膠所致急性鼠爪腫脹的影響，則對闡明清熱藥作用尤為有用。2024/5/810第十三章發(fā)熱、疼痛及抗2,4-二硝基苯酚引起大鼠發(fā)熱模型[造模原理]2,4-二硝基苯酚（2,4-dinitrophenol）是一種代謝刺激劑，注入體內(nèi)后可引起產(chǎn)熱增強，造成機體發(fā)熱。[模型評價]

本法發(fā)熱迅速，穩(wěn)定，消退也快，致熱劑價廉易得，使用大鼠，故本法是一個較好的發(fā)熱模型。但本法發(fā)熱機制在于剌激產(chǎn)熱，為全面評價藥物解熱作用，還須與其他方法如內(nèi)毒素所致發(fā)熱配合應(yīng)用。2024/5/811第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*發(fā)熱實驗注意事項實驗動物：發(fā)熱實驗模型對動物的要求較高，以家兔最為常用，發(fā)熱反應(yīng)典型而穩(wěn)定。亦可選用大鼠。小鼠、豚鼠則因恒溫機能差，對發(fā)熱刺激反應(yīng)性低，不宜選用。動物體重：家兔體重2kg左右效果最好，大鼠體重以150~200g為最適宜。2024/5/812第十三章發(fā)熱、疼痛及抗注意事項

3.實驗室溫：實驗環(huán)境低溫時家兔的發(fā)熱反應(yīng)比在常溫環(huán)境中強而持久，因此在實驗時應(yīng)使室溫保持在偏低水平（17℃~25℃）。4.劑量的選擇：給動物注射菌液或內(nèi)毒素時，注射量與發(fā)熱反應(yīng)強度并不一定成正比，注入量過大，體溫有時不但不升高反而下降。劑量的選擇必須恰到好處，每次實驗前預實驗確定致熱源劑量。2024/5/813第十三章發(fā)熱、疼痛及抗注意事項5.給藥途徑：靜注菌液或內(nèi)毒素等引起的發(fā)熱較皮下注射迅速而強烈，但化學刺激必須皮下注射才能引起較強的反應(yīng)。6.篩選解熱藥物時，應(yīng)選用3項模型和方法，每一種模型需采用兩種不同的動物進行藥效學評價。陽性對照藥可用安乃近或復方氨基比林。2024/5/814第十三章發(fā)熱、疼痛及抗常用實驗動物正常體溫范圍

狗：37.5~39.9℃；豚鼠：37.3~39.5℃；

貓：38.0~39.0℃；大鼠：36.6~38.3℃；

兔：38.0~39.2℃；小鼠：36.0~38.0℃；

人

2024/5/815第十三章發(fā)熱、疼痛及抗第二節(jié)疼痛動物模型

疼痛作為主觀的感受和體驗，是一種復雜的生理心理反應(yīng)。動物實驗只能間接借助由于傷害性刺激引起的“痛”反應(yīng)作為測量指標。2024/5/816第十三章發(fā)熱、疼痛及抗二、疼痛動物模型熱刺激法化學刺激法機械刺激法電刺激法2024/5/817第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*熱刺激致疼痛模型

第十三章發(fā)熱、疼痛及抗[造模原理]

小鼠的足部接觸熱板，受熱刺激而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)（舔后足），以產(chǎn)生痛反應(yīng)時間為痛閾值。通過測量給藥小鼠痛閾值的改變而反映藥物的鎮(zhèn)痛作用。小鼠熱板法2024/5/819第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物雌性小鼠，體重20g左右2024/5/820第十三章發(fā)熱、疼痛及抗熱板刺激測痛儀2024/5/821第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作方法調(diào)節(jié)恒溫水浴55±5℃金屬盤底部接觸水面；秒表記錄小鼠置于熱板后舔后足時間為該鼠的痛閾值；用藥前測定兩次計算平均值（同時篩選小鼠，大于5s小于30s合格）；給藥后每隔30min-60min測定1次，連續(xù)數(shù)次。2024/5/822第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作方法痛閾值超過60s即停止測試計算痛閾提高百分率以時間為橫坐標，痛閾提高率為縱坐標，繪制鎮(zhèn)痛作用曲線2024/5/823第十三章發(fā)熱、疼痛及抗模型評價方法簡便易行，觀察指標明確動物可反復利用敏感性差，對作用弱的鎮(zhèn)痛藥不敏感。2024/5/824第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*注意事項選用雌性動物，體重以20g為適宜。為避免個體差異，剔除痛閾<5s或>30s，或喜歡跳躍者。室溫選擇在13℃-20℃，以減少動物反應(yīng)波動。2024/5/825第十三章發(fā)熱、疼痛及抗大鼠及家兔光熱法

2024/5/826第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制

聚光燈光束凸透鏡聚焦大鼠的尾巴家兔鼻部甩尾甩頭2024/5/827第十三章發(fā)熱、疼痛及抗鼠尾輻射刺激測痛儀2024/5/828第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物大鼠，體重200g左右，雄性；家兔，體重2kg左右。

2024/5/829第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟（大鼠）

75%乙醇擦凈大鼠尾部，用墨汁在距尾端1/3處標出光刺激點的位置，固定、調(diào)節(jié)輻射熱測痛儀的焦距，并在聚焦的鼠臺檔板上作一標記，測痛時使鼠尾光刺激點的位置與檔板上的標記對映重合。每次實驗應(yīng)于每日同一時間進行，每次設(shè)生理鹽水或溶媒對照。2024/5/830第十三章發(fā)熱、疼痛及抗從照射開始到甩尾反應(yīng)的潛伏期作為痛閾。實驗開始時先測2次，每次間隔5min，計算其平均值為基礎(chǔ)痛閾。選用潛伏期在5s以內(nèi)的動物。間隔一段時間后測給藥后潛伏期。光照截止時間6s或以潛伏期升高150%為限。操作步驟（大鼠）2024/5/831第十三章發(fā)熱、疼痛及抗計算公式2024/5/832第十三章發(fā)熱、疼痛及抗模型評價大鼠甩尾法操作方便，反應(yīng)恒定，重復性好，對于篩選麻醉性鎮(zhèn)痛藥及非麻醉性鎮(zhèn)痛藥均適用，故使用最多。甩尾反應(yīng)是一種脊髓反應(yīng)，骨骼肌松弛藥也可出現(xiàn)陽性結(jié)果，篩選藥物時應(yīng)注意。2024/5/833第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟（家兔）家兔鼻部或嘴角附近剪毛后，用墨汁劃出測痛的區(qū)域，以輻射熱照射引起甩頭的反應(yīng)時間作為痛閾。實驗開始時，測定2~3次痛閾，每次刺激不超過30s，取其平均值為100%。2024/5/834第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟（家兔）為避免皮膚灼傷，用藥后若痛閾升高超過基礎(chǔ)痛閾的200%，應(yīng)停止照射。家兔痛閾正常參數(shù)為7s±0.3s。2024/5/835第十三章發(fā)熱、疼痛及抗化學刺激致疼痛模型第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*（一）扭體法2024/5/837第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制小鼠或大鼠腹腔內(nèi)注入化學刺激物，由于刺激腹膜可引起深部、大面積較持久的疼痛刺激，*致使動物產(chǎn)生扭體反應(yīng)，表現(xiàn)為腹部收縮內(nèi)陷、軀體扭曲、后肢伸展及臀部抬高等。

鎮(zhèn)痛藥對此有抑制作用，可明顯減少發(fā)生扭體反應(yīng)的鼠數(shù)。2024/5/838第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟將化學刺激物注入動物腹腔內(nèi)。扭體反應(yīng)可表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹（呈蜂窩腰）、軀干與后腿伸張、臀部高舉起等。實驗時室溫宜恒定于20℃，因室溫過低，小鼠扭體次數(shù)減少。大鼠所用藥物劑量可根據(jù)體重增加。2024/5/839第十三章發(fā)熱、疼痛及抗（二）鉀離子透入法2024/5/840第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制采用一定強度的直流電經(jīng)動物不同部位的皮下透入飽和氯化鉀溶液，可使家兔縮腿、掙扎、揚爪或使大鼠甩尾、嘶叫等均可作為致痛指標。2024/5/841第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟家兔：應(yīng)用“直流電鉀離子測痛儀”大鼠：應(yīng)用“K+-4型測痛儀”2024/5/842第十三章發(fā)熱、疼痛及抗[造模原理]

*大、小鼠足底皮下注射甲醛溶液所造成的疼痛反應(yīng)分為兩個時相：0~10min為第1時相（早期相），是甲醛溶液直接刺激C纖維所致；10~60min為第2時相（遲發(fā)相），有炎癥機制參與。阿片類鎮(zhèn)痛藥對這兩個時相均有抑制作用，解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥只對第2時相起作用。此外，尚誘發(fā)中樞痛覺易化狀態(tài)，動物出現(xiàn)明確的保護反應(yīng)。（三）甲醛溶液法2024/5/843第十三章發(fā)熱、疼痛及抗（四）催產(chǎn)素法及前列腺素E法

可模擬痛經(jīng)。2024/5/844第十三章發(fā)熱、疼痛及抗機械刺激致疼痛模型第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟大鼠尾尖壓痛法(大鼠壓痛測定裝置)小鼠尾根部加壓法(彈簧式壓力測痛儀)2024/5/846第十三章發(fā)熱、疼痛及抗電刺激致疼痛模型第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制電流刺激動物的尾部、足跖、齒等部位，引起疼痛反應(yīng)。反應(yīng)以動物產(chǎn)生嘶叫為指標。比較給藥前后痛閾值的變化，以測定藥物的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。2024/5/848第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟小鼠尾刺激法大鼠尾刺激法小鼠足跖刺激法家兔齒髓刺激法2024/5/849第十三章發(fā)熱、疼痛及抗三、抗應(yīng)激實驗方法應(yīng)激反應(yīng)系指在過度緊張性刺激的作用下，機體由原來的正常平衡狀態(tài)轉(zhuǎn)入非特異性的緊張狀態(tài)。引起應(yīng)激反應(yīng)的刺激稱為應(yīng)激原（stressor),如創(chuàng)傷、感染、中毒、大失血、精神刺激、寒冷、高溫、放射損傷等。2024/5/850第十三章發(fā)熱、疼痛及抗應(yīng)激反應(yīng)常用方法小鼠游泳實驗耐缺氧實驗常壓缺氧減壓缺氧腦循環(huán)缺氧化學性缺氧實驗

耐低溫和耐高溫2024/5/851第十三章發(fā)熱、疼痛及抗小鼠游泳實驗

第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制小鼠落水后，由于本能驅(qū)使其游泳掙扎使鼻孔露出水面呼吸，直至體力不支而下沉溺死。計算①自投入水中開始至鼻孔沉入水面的時間，為小鼠游泳時間（也有以②鼻孔沉入水面10s不能浮起的時間③死亡時間作為計算終點者），可作為判斷小鼠體力強壯和耐疲勞程度的客觀指標。2024/5/853第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物成年小鼠，雌雄不限2024/5/854第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟玻璃缸內(nèi)水深20cm，小鼠投入后，用秒表計鼻孔沉入水面所需時間，為小鼠游泳時間。為縮短觀察時間，可于小鼠尾部吊一定重量（體重的5%~10%）負重物。2024/5/855第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟水溫應(yīng)保持恒定，常用25℃±0.5℃冰水游泳試驗，體力與應(yīng)激反應(yīng)的綜合指標。2024/5/856第十三章發(fā)熱、疼痛及抗*注意事項本模型應(yīng)選用同性別小鼠，體重盡可能一致。最好是單只小鼠游泳，如果2只以上同時游泳，應(yīng)不使小鼠彼此靠近，否則會影響實驗結(jié)果。2024/5/857第十三章發(fā)熱、疼痛及抗注意事項水溫應(yīng)保持一致。小鼠進食多少影響體重稱量的準確性，也影響游泳時間，故宜禁食12~24h后進行實驗。2024/5/858第十三章發(fā)熱、疼痛及抗小鼠爬桿實驗

[基本原理]

由于身體的重量，小鼠抓持在垂直的有機玻璃棒上將消耗體力，直至體力不支而下落到水中。爬桿時間的長短可反應(yīng)動物靜用力時疲勞的程度。2024/5/859第十三章發(fā)熱、疼痛及抗耐缺氧實驗

第十三章發(fā)熱、疼痛及抗常壓缺氧實驗2024/5/861第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制缺氧時氧化不全的酸性代謝產(chǎn)物和二氧化碳的蓄積，可通過對化學感受器或直接對中樞的刺激，反射性地引起呼吸加深加快，心博加快加強，輸出量增加，血液重新分配以保證重要臟器的血液供應(yīng)，缺氧晚期，生命活動的重要器官—腦和心臟的缺氧，是引起動物常壓缺氧死亡的主要原因。2024/5/862第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物體重18~22g健康小鼠，雌雄兼用。2024/5/863第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟給受試藥15~30min后，將小鼠放入裝有15g鈉石灰的250或500ml廣口瓶內(nèi)（每瓶只放一只），瓶口周圍涂以凡士林，以保證密封觀察并記錄小鼠缺氧死亡時間，比較給藥組與對照組小鼠的耐缺氧時間。2024/5/864第十三章發(fā)熱、疼痛及抗模型評價此法簡單易行，為整體動物實驗，不受設(shè)備條件限制是其優(yōu)點，但特異性不高。2024/5/865第十三章發(fā)熱、疼痛及抗注意事項每個廣口瓶內(nèi)最好只放一只小鼠，以防互相擾動影響測定。如需要，可將給藥小鼠與對照鼠配對放于同一容器內(nèi)進行觀察，但要防止互相干擾。容器蓋的密封性、小鼠體重、室溫等條件都可導致實驗差異，應(yīng)從嚴掌握。2024/5/866第十三章發(fā)熱、疼痛及抗減壓缺氧實驗2024/5/867第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制把容器內(nèi)的空氣部分抽出形成低壓環(huán)境。小鼠在低壓缺氧情況下，受低壓和缺氧兩種因素影響，引起心肌缺氧和腦缺氧因腦比心臟對缺氧更敏感，腦缺氧引起呼吸衰竭可能為動物死亡的主要原因。2024/5/868第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物成年健康小鼠，體重18~22g，雌雄均可

2024/5/869第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟選擇健康小鼠，隨機分組，設(shè)受試藥組及對照組。給藥30~45min后，將小鼠配對放入玻璃干燥器內(nèi)，容器底部放鈉石灰，容器邊緣涂上凡士林，保證密封。2024/5/870第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟使用減壓缺氧裝置使玻璃干燥器形成負壓干燥器內(nèi)小鼠死亡達半數(shù)時，立即移動活塞，使干燥器與大氣相通，同時記錄時間。計算兩組動物的存活率。2024/5/871第十三章發(fā)熱、疼痛及抗注意事項本法特異性不高。壓力數(shù)值、動物體重、室溫等條件的差異可影響實驗結(jié)果。減壓缺氧裝置的導管接點、活塞等必須用凡士林封嚴，保證整個系統(tǒng)密閉。也可采用動物生存時間為指標，進行組間比較。

2024/5/872第十三章發(fā)熱、疼痛及抗腦循環(huán)障礙性缺氧2024/5/873第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物健康小鼠，體重23±2g，雌雄不限。2024/5/874第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作步驟將小鼠麻醉后進行頸部手術(shù)，分離兩側(cè)頸總動脈，結(jié)扎后觀察對生存時間的影響，將給藥組和對照組的結(jié)果進行比較。本實驗主要反映動物對腦缺血缺氧的耐受能力。2024/5/875第十三章發(fā)熱、疼痛及抗化學性缺氧實驗

2024/5/876第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制氰化物可致呼吸鏈中斷，使組織不能利用血中的氧，引起組織缺氧。亞硝酸鹽大量進入機體后，可形成高鐵血紅蛋白癥，引起組織缺氧和其他中毒癥狀。2024/5/877第十三章發(fā)熱、疼痛及抗實驗動物體重18~22g小鼠，雌雄不限。2024/5/878第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作方法氰化物中毒小鼠腹腔注射0.1%氰化鉀溶液10mg/kg體重（0.1ml/10g體重），觀察受試藥組與對照組動物生存時間，進行統(tǒng)計處理。2024/5/879第十三章發(fā)熱、疼痛及抗操作方法亞硝酸鈉中毒小鼠腹腔內(nèi)注射2%亞硝酸鈉溶液200mg/kg體重（0.1ml/10g體重），以動物生存時間為指標，比較給藥組與對照組動物的生存時間。2024/5/880第十三章發(fā)熱、疼痛及抗耐低溫和耐高溫實驗第十三章發(fā)熱、疼痛及抗耐低溫實驗2024/5/882第十三章發(fā)熱、疼痛及抗造模機制寒冷刺激可使機體