項(xiàng)目一：菌落總數(shù)的商品化試劑盒快速檢測法

食品微生物檢驗(yàn)任務(wù)七菌落總數(shù)的商品化試劑盒快速檢測法知識(shí)目標(biāo)1.了解測試片菌落總數(shù)測定的基本原理。2.掌握測試片菌落總數(shù)計(jì)數(shù)、數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報(bào)告。素質(zhì)目標(biāo)技能目標(biāo)培養(yǎng)學(xué)生形成生物安全意識(shí)、環(huán)保意識(shí)、標(biāo)準(zhǔn)意識(shí)、社會(huì)服務(wù)意識(shí)。1.掌握蔬菜的無菌采樣、樣品預(yù)處理及稀釋。2.掌握菌落總數(shù)測試片接種方法。任務(wù)目標(biāo)討論：為什么要進(jìn)行食品微生物快速檢測？原理：菌落總數(shù)測試片是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有標(biāo)準(zhǔn)的培養(yǎng)基和氧化三苯四氮唑指示劑，菌落在測試片上呈紅色或粉紅色，這樣可增強(qiáng)菌落計(jì)數(shù)效果。知識(shí)點(diǎn)一檢測原理及范圍適應(yīng)范圍：適用于肉類、魚類和海產(chǎn)品、水果和蔬菜制品、乳制品和雜品等食品種類中菌落總數(shù)的測定。檢樣制備樣品勻液選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度，各取1mL加入菌落測試片待稀釋液擴(kuò)散測試片的部分培養(yǎng)計(jì)算菌落總數(shù)結(jié)果報(bào)告檢驗(yàn)程序計(jì)數(shù)各測試片菌落數(shù)知識(shí)點(diǎn)二稱取氯化鈉2.55g，加入300mL蒸餾水，量取225mL分裝錐形瓶中，分別移取9mL到4支小的試管中。121℃高壓滅菌15min。0.85%無菌生理鹽水配制實(shí)驗(yàn)器材、試劑的準(zhǔn)備500mL燒杯1個(gè)：配制生理鹽水；錐形瓶2個(gè)：裝225mL0.85%無菌生理鹽水；1mL4支（滅菌）移液管10mL1支菌落總數(shù)測試片8片；試管4根；玻璃儀器準(zhǔn)備準(zhǔn)備工作知識(shí)點(diǎn)二實(shí)驗(yàn)器材、試劑的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)操作安全知識(shí)點(diǎn)三

操作前，用鑷子取酒精棉球消毒桌子、消毒手蔬菜樣品：以黃瓜為例，黃瓜用無菌刀在無菌環(huán)境下去皮、打漿，無菌稱取25g樣品+225mL0.85%滅菌生理鹽水無菌采樣知識(shí)點(diǎn)四樣品稀釋、接種及培養(yǎng)

用量筒量取225mL0.85%無菌生理鹽水至稀釋瓶中。（注意：稀釋瓶、帶塞錐形瓶開蓋前要過火，量筒、裝有0.85%無菌生理鹽水的錐形瓶及其塞子應(yīng)放在酒精燈周圍15cm的范圍內(nèi)）知識(shí)點(diǎn)五25g+225mL生理鹽水10-110-210-39mL無菌生理鹽水1mL1mL1mL1mL1mL1mL1mL樣品稀釋、接種及培養(yǎng)知識(shí)點(diǎn)五-1-1-2-2-3-300倒平板樣品稀釋、接種及培養(yǎng)知識(shí)點(diǎn)五測試片接種

2.垂直滴加1mL樣液于測試片中央

4.用壓板的平板使樣液均勻分布于圓形接種區(qū)，靜置1min使膠凝固1.將測試片置于平坦桌面，提起上層膜3.緩慢落下上層膜，切勿直接落下，以免氣泡產(chǎn)生將測試片的透明面朝上，水平置于培養(yǎng)箱內(nèi)，可堆疊至30片，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±2h培養(yǎng)倒平板樣品稀釋、接種及培養(yǎng)知識(shí)點(diǎn)五菌落計(jì)數(shù)到培養(yǎng)時(shí)間后應(yīng)立即計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)紅色菌落。知識(shí)點(diǎn)六菌落計(jì)數(shù)知識(shí)點(diǎn)六說明：

①不論菌落大小都應(yīng)計(jì)數(shù)；

②當(dāng)細(xì)菌濃度很高時(shí)，整個(gè)測試片會(huì)變成紅色或粉紅色，將結(jié)果記錄為“多不可計(jì)”；

③本測試片有20個(gè)等分方格，當(dāng)菌落數(shù)量過多計(jì)數(shù)困難時(shí)，可選擇幾個(gè)有代表性菌落的小方格，計(jì)算平均菌落數(shù)，再乘以相應(yīng)倍數(shù)，即可得到整個(gè)測試片上的估算菌落數(shù)。數(shù)據(jù)處理與報(bào)告知識(shí)點(diǎn)七若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)（30CFU～300CFU），計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g(mL)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。選取菌落數(shù)在30～300個(gè)之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)算菌落總數(shù)。序號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)計(jì)算及菌落總數(shù)報(bào)告（CFU/g或mL）10-110-210-3150、523、50、0（50+52）×10∕2=510cfu/mL=5.1×102若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按以下公式計(jì)算。式中:N———樣品中菌落數(shù)；C———平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和；n1———第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù)；n2———第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù)；d———稀釋因子(第一稀釋度)。序號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)計(jì)算及菌落總數(shù)報(bào)告（CFU/g或mL）10-110-210-32多不可計(jì)232、24433、35(232+244+33+35)×102/〔2+（0.1×2）〕﹦2.5×104數(shù)據(jù)處理與報(bào)告知識(shí)點(diǎn)七若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為“多不可計(jì)”，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。序號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)計(jì)算及菌落總數(shù)報(bào)告（CFU/g或mL）10-110-210-33多不可計(jì)多不可計(jì)310、306（310×306）×103∕2=3.1×105數(shù)據(jù)處理與報(bào)告知識(shí)點(diǎn)七若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。序號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)計(jì)算及菌落總數(shù)報(bào)告（CFU/g或mL）10-110-210-3420、182、11、0（20+18）×10∕2=1.9×102

5000＜1×10=＜10數(shù)據(jù)處理與報(bào)告知識(shí)點(diǎn)七若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。序號(hào)不同稀釋度的菌落數(shù)計(jì)算及菌落總數(shù)報(bào)告（CFU/g或mL）10-110-210-36多不可計(jì)318、32626、28（26+28）×103∕2=2.7×1047多不可計(jì)306、30818、20（206+308）×102∕2=3.1×104數(shù)據(jù)處理與報(bào)告知識(shí)點(diǎn)七報(bào)告①菌落數(shù)小于100CFU時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。②菌落數(shù)大于或等于100CFU時(shí)，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。③若所有平板上為蔓延菌落而無法計(jì)數(shù)，則報(bào)告菌落蔓延。④若空白對(duì)照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。⑤稱重取樣以CFU/g為單位報(bào)告，體積取樣以CFU/mL為單位報(bào)告。生化處理知識(shí)點(diǎn)八檢測過程中所用的所有器具、培養(yǎng)后