動物寄生蟲學(xué)檢驗技術(shù)（動物疫病檢驗課件）

動物寄生蟲學(xué)檢驗概述1病原學(xué)檢查2免疫血清學(xué)診斷3分子生物學(xué)診斷病原學(xué)檢查病原學(xué)檢查1234糞便檢查法皮膚刮取物檢查法肌肉壓片鏡檢法血液檢查法5678淋巴結(jié)穿刺檢查法腹水檢查法實驗動物接種法尿液檢查法糞便要盡量新鮮，干燥糞便易導(dǎo)致蟲卵變形，對牛和馬等大動物，可通過直腸檢查法從直腸掏取，對于羊、犬、貓等中小動物，一般用食指鉤取少量糞便。若采樣糞便不能及時檢查，可將其加入到50～60℃的福爾馬林溶液中，以保持蟲卵的固有形態(tài)。1、糞便檢查法病原學(xué)檢查2、皮膚刮取物檢查法在脫毛皮膚和健康皮膚交界處刮取皮屑，這里的螨較多，刮取時先剪毛，取凸刃小刀，在酒精燈上消毒，用手握刀，使刀刃與皮膚表面垂直，刮取皮屑時，應(yīng)刮到皮膚輕微出血，然后將皮屑置于黑色背景的培養(yǎng)皿內(nèi)觀察是否有蟲體。病原學(xué)檢查主要用于旋毛蟲的檢測，在左右膈肌角分別剪取24粒肌肉粒，置于載玻片上，制作肌肉壓片，低倍顯微鏡鏡檢觀察在被檢測的肌肉壓片中是否含有肌旋毛蟲包囊。3、肌肉壓片鏡檢法病原學(xué)檢查血液檢查法用于伊氏錐蟲、巴貝斯蟲和泰勒蟲等血液內(nèi)寄生蟲的檢查。一般采取病畜耳靜脈血液，做成血液涂片鏡檢，或直接鮮血壓片鏡檢，或血液離心后將蟲體濃集制片鏡檢，發(fā)現(xiàn)某種寄生蟲即可確診。4、血液檢查法病原學(xué)檢查消毒后術(shù)者以左手食指和拇指固定淋巴結(jié)，右手持注射器將針頭直接刺入肩前淋巴結(jié)或股前淋巴結(jié)內(nèi)，深度依淋巴結(jié)大小而定，然后邊拔針邊用力抽吸，將淋巴結(jié)內(nèi)的液體和細胞成分吸出，固定注射器內(nèi)栓拔出針頭后將注射器取下，充氣后再將針頭內(nèi)的抽出液噴射到玻璃片上制成均勻涂片，染色鏡檢。5、淋巴結(jié)穿刺檢查法病原學(xué)檢查本法主要用于弓形蟲病的生前診斷。常規(guī)消毒局部皮膚和術(shù)者手臂，穿刺腹腔取腹水，在玻片上抹片，瑞氏染色后鏡檢觀察是否含有滋養(yǎng)體。6、腹水檢查法病原學(xué)檢查7、實驗動物接種法用采自患病動物病料對易感實驗動物進行人工接種，待蟲體在其體內(nèi)大量繁殖后再對實驗動物進行蟲體檢查。常采用清晨尿液，沉淀后取沉淀檢查，本方法著重于檢查泌尿系統(tǒng)寄生蟲蟲體，由于泌尿系統(tǒng)寄生蟲較少，因而此法較少用，我國南方主要用于檢查豬腎蟲。8、尿液檢查法病原學(xué)檢查寄生蟲本身及其分泌物、代謝產(chǎn)物等均可作為抗原刺激動物機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，可以通過已知抗原或抗體，檢測動物血清中相應(yīng)抗體或者抗原的存在性，從而判斷該動物是否患有這種寄生蟲病。免疫血清學(xué)診斷分子生物學(xué)診斷技術(shù)即基因和核酸診斷技術(shù)，主要包括DNA探針和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）兩種技術(shù)。分子生物學(xué)診斷

蠕蟲病的實驗室檢驗1直接涂片法2漂浮法3沉淀法尼龍篩集卵法蟲卵計數(shù)法45直接涂片法直接涂片法操作方法1、取1～2滴甘油與水的等量混合液，滴在載玻片；2、用牙簽取黃豆大小的糞便與載玻片上的水混勻；3、除去較粗的糞渣；4、將糞液涂成薄膜；5、蓋上蓋玻片，置于低倍鏡下檢查。直接涂片法回旋法操作步驟取2～3g糞樣加清水2～3倍，充分混勻成懸液后用玻璃棒攪拌1min，使之成回旋運動，在攪拌過程中迅速提起玻璃棒，將棒端附著的液體放于載玻片上涂開，加上蓋玻片在鏡下檢查。檢查時多取幾滴懸液。直接涂片法注意事項1、涂片的厚薄以在載玻片的下面墊上有字的紙時，紙上的字跡隱約可見為宜。2、該法簡便、易行、快速、適合于蟲卵量大的糞便檢查，但對蟲卵含量低的糞便檢出率低，故此法每個樣品必須檢查3～5片。3、檢查蟲卵時，先用低倍鏡順序觀察蓋玻片下所有部分，發(fā)現(xiàn)疑似蟲卵物時，再用高倍鏡仔細觀察。因一般蟲卵色彩較淡，鏡檢時視野宜稍暗一些。漂浮法漂浮法漂浮法的原理是采用比重高于蟲卵的漂浮液，使糞便中的蟲卵與糞便渣子分開而浮于液體表面，然后進行檢查。

飽和鹽水漂浮法對大多數(shù)線蟲卵、絳蟲卵及某些原蟲卵囊均有效，但對吸蟲卵、后圓線蟲卵和棘頭蟲卵效果較差。漂浮法操作方法1、取糞便10g；2、加飽和鹽水100ml；3、用玻棒攪勻，通過60目銅篩過濾到另一膠杯中；4、靜置半小時；5、用干凈的蓋玻片與液面平行接觸以沾取表面液膜，然后蓋在載玻片上檢查。漂浮法示意圖漂浮法注意事項1、漂浮時間的選擇；2、漂浮液的保存；3、漂浮液的選擇；4、避免相互污染。漂浮法示意圖沉淀法沉淀法沉淀法的原理是利用蟲卵比重比水大的特點，讓蟲卵在重力的作用下，自然沉于容器底部，然后進行檢查。沉淀法用于檢查糞便中的吸蟲卵。沉淀法操作方法1、取糞便5g；2、加清水100ml；3、用玻棒攪勻，通過60目銅篩和漏斗過濾到離心管中。4、置離心機上離心2～3分鐘；5、傾去上層液，保留沉渣；6、再加清水混勻；7、再離心；8、再傾去上層液，保留沉渣；9、如此反復(fù)操作2～3次直到上層液體透明，最后傾去上層液；10、用吹吸均勻后，吸取適量沉渣檢查。沉淀法注意事項1、注意此法糞量少，一次糞檢最好多看幾片，以提高檢出率。2、可將離心沉淀法和漂浮法結(jié)合起來應(yīng)用。尼龍篩集卵法尼龍篩集卵法操作方法1、取糞便5～10g；2、加水?dāng)噭颍?、通過40或60目銅篩過濾；4、濾下液再通過260目尼龍篩過濾；5、在尼龍篩中繼續(xù)加水沖洗，直到洗出液變清為止；6、挑取260目尼龍篩中的糞渣抹片檢查。注意事項此法適用于寬度大于60微米球蟲卵囊。因通過260目尼龍篩過濾、沖洗后，直徑小于40微米的細糞渣和可溶性色素均被洗去而使蟲卵集中。尼龍篩集卵法蟲卵計數(shù)法蟲卵計數(shù)法麥克馬斯特氏法計數(shù)室的構(gòu)造：計數(shù)室是由兩片載玻片制成，制作時為了使用方便，常將其一片切去一條，使之較另一片窄一些。在較窄的玻片上刻以1cm見方的劃度2個，后選取厚度1.5mm的玻片切成小條墊于兩玻片間，以環(huán)氧樹脂粘合。計數(shù)室的構(gòu)造操作方法1、取糞便2g，置研缽中；2、先加入10ml水，攪勻，再加飽和食鹽水50ml；3、充分振蕩混勻；4、用60目銅篩過濾；5、將濾液振蕩混勻后立即吸取糞液充滿麥克馬斯特計數(shù)板兩個計數(shù)室；6、置于顯微鏡臺上，靜置2～3分鐘；7、計數(shù)兩個計數(shù)室的蟲卵數(shù)。蟲卵計數(shù)法注意事項1、所取糞便應(yīng)干凈卵囊；2、計數(shù)蟲卵時，不能有遺漏和重復(fù)；3、蟲卵計數(shù)只能是對寄生蟲感染程度的一個大致推斷。蟲卵計數(shù)法

螨蟲病的實驗室檢驗1病料的采集2病料的檢查方法3實驗的注意事項病料的采集病料的收集病料收集方法1、在新生的患部與健康部交界處，剪去長毛；2、器械消毒后取凸刃小刀在體表刮取病料，操作時使刀刃與皮膚表面垂直，反復(fù)刮取表皮，直到稍微出血為止；3、將刮到的病料收集到培養(yǎng)皿或其他容器內(nèi)，取樣處用碘酒消毒。病料的檢查方法26534添加標(biāo)題1直接檢查法顯微鏡直接檢查法病料的檢查方法蟲體濃集法溫水檢查法培養(yǎng)皿內(nèi)加溫法蠕形螨的檢查檢查方法1、直接檢查法將刮下物放在黑紙上或有黑色背景的容器內(nèi)，置溫箱中（30～40℃）或用白熾燈照射一段時間，然后收集從皮屑中爬出的黃白色針尖大小的點狀物在鏡下檢查。病料的檢查方法2、顯微鏡直接檢查法將刮下的皮屑，放于載玻片上，滴加煤油，覆以另一張載玻片。搓壓玻片使病料散開，分開載玻片，置顯微鏡下檢查。病料的檢查方法3、蟲體濃集法先取較多的病料，置于試管中，加入10%氫氧化鈉溶液，浸泡過夜，使皮屑溶解，蟲體自皮屑中分離出來。然后待其自然沉淀（或以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀5min），蟲體即沉于管底，棄去上層液，吸取沉渣檢查。病料的檢查方法4、溫水檢查法

先取較多的病料，置于試管中，加入10%氫氧化鈉溶液，浸泡過夜，使皮屑溶解，蟲體自皮屑中分離出來。然后待其自然沉淀（或以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀5min），蟲體即沉于管底，棄去上層液，吸取沉渣檢查。病料的檢查方法5、培養(yǎng)皿內(nèi)加溫法將刮取到的干的病料，放于培養(yǎng)皿內(nèi)，加蓋。將培養(yǎng)皿放于盛有40～45℃溫水的杯上，經(jīng)10～15min后，將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)，則蟲體與少量皮屑黏附于皿底，大量皮屑則落于皿蓋上，取皿底檢查。病料的檢查方法6、蠕形螨的檢查蠕形螨寄生在毛囊內(nèi)，檢查時先在動物四肢的外側(cè)和腹部兩側(cè)、背部、眼眶四周，頰部和鼻部的皮膚上按摩，是否有砂粒樣或黃豆大的結(jié)節(jié)。如有，用小刀切開擠壓，看到有膿性分泌物或淡黃色干酪樣團塊時，則可將其挑在載片上，滴加生理鹽水1～2滴，均勻涂成薄片，上覆蓋玻片，在顯微鏡下進行觀察。病料的檢查方法實驗的注意事項實驗的注意事項注意事項1、螨對寄生部位有一定的選擇性，多數(shù)寄生于體表皮膚柔軟而毛少的部位。根據(jù)其發(fā)育規(guī)律和生活習(xí)性，確定采集蟲體的時間和部位。2、蟲體和病料采取中應(yīng)嚴(yán)防散布病原。犬耳癢螨感染

原蟲病的實驗室檢驗1消化道原蟲檢查法2血液內(nèi)原蟲檢查法消化道原蟲檢查法消化道原蟲檢查法根據(jù)所采取的方法不同，糞便內(nèi)球蟲卵囊的檢查方法分為直接涂片法、漂浮法、錦綸篩兜淘洗法等。球蟲卵囊檢查法注意事項：①球蟲卵囊一般直徑小于40μm，若使用錦綸篩兜淘洗法時，蟲卵可以通過260目網(wǎng)篩篩孔，故應(yīng)取濾液檢查。②當(dāng)需鑒定球蟲的種類時，可將濃集后的卵囊加2.5％的重鉻酸鉀溶液，在25℃溫箱中培養(yǎng)，待其孢子形成后進行觀察。③為了推測動物體內(nèi)球蟲的感染強度、判斷抗球蟲藥物的療效、評價疫苗的免疫保護性，通常要進行卵囊的計數(shù)，即每克糞樣中球蟲卵囊數(shù)值（OPG）。消化道原蟲檢查法球蟲卵囊檢查法1、血球板計數(shù)法取1g糞樣，溶于10ml水中，制成10倍稀釋液。攪拌均勻后，取1滴置血球計數(shù)板中，顯微鏡下計數(shù)。為了數(shù)據(jù)的可靠性，可以重復(fù)幾次計數(shù)，算其平均值。球蟲卵囊檢查法消化道原蟲檢查法2、載玻片計數(shù)法取1g糞樣，溶于10ml水中，制成10倍稀釋液。取0.05ml（50微升）置于載玻片上，蓋上蓋玻片后，計算整個卵囊數(shù)（OPG＝b×200，b代表整個卵囊數(shù)值）。3、麥克馬斯特法計數(shù)法消化道原蟲檢查法1、飽和蔗糖溶液漂浮法取糞樣5～10克，加5倍自來水?dāng)噭颍?0目篩網(wǎng)過濾，濾液以離心10分鐘，棄上清，按糞樣量的10倍體積加飽和蔗糖液，攪勻后以再離心10分鐘，然后用小鐵絲環(huán)蘸取漂浮液表層涂片，以10×100倍油鏡鏡檢。隱孢子蟲卵囊檢查法消化道原蟲檢查法2、抗酸染色法取糞樣5～10克，加5倍水?dāng)噭颍?0目尼龍篩過濾，將濾液涂片、干燥，滴加改良抗酸染色液第一液（堿性復(fù)紅4g，95%酒精20ml，石炭酸8ml，蒸餾水100ml），5～10分鐘后用水沖洗，再滴加第二液（98%濃硫酸10ml，蒸餾水90ml），5～10分鐘后用水沖洗，滴加第三液（0.2g孔雀綠，蒸餾水100ml）1分鐘后水洗，干燥后以油鏡觀察。消化道原蟲檢查法結(jié)腸小袋纖毛蟲檢查法操作方法：檢查時取新鮮的稀糞一小團，放在載玻片上加1～2滴溫?zé)岬纳睇}水混勻，挑去粗大的糞渣，蓋上蓋玻片，在低倍鏡下檢查時即可見到活動的蟲體。消化道原蟲檢查法血液內(nèi)原蟲檢查法將采出的血液滴在潔凈的載玻片上，加等量的生理鹽水與之混合，加上蓋玻片，立即放顯微鏡下用低倍鏡檢查，發(fā)現(xiàn)有運動的可疑蟲體時，可再換高倍鏡檢查。直接鏡檢法血液內(nèi)原蟲檢查法涂片染色鏡檢法血液內(nèi)原蟲檢查法涂片染色鏡檢法一、涂片①采血滴于潔凈的載玻片一端；②另取一塊邊緣光滑的載玻片，作為推片。先將此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移動，觸及血滴，使血均勻分布于兩玻片之間，形成一線；③推片于載玻片形成30～45度角，平穩(wěn)快速向前推進，使血液循接觸面散布均勻，即形成血薄片；④抹片后，自然干燥，滴加甲醇固定。血液內(nèi)原蟲檢查法二、染色（1）姬姆薩染色血涂片經(jīng)甲醇固定后，放置姬姆薩使用液15～30分鐘（過夜效果更好），取出后，用潔凈的水沖洗，自然干燥后，油鏡鏡檢。血液內(nèi)原蟲檢查法二、染色（2）瑞氏染色取已干燥的血涂片，滴加瑞氏染液覆蓋血膜，靜置2分鐘，加入等量緩沖液，用吸球輕輕吹動，使染液與緩沖液充分混勻，放置5～10分鐘。傾去染液，然后用水沖洗，血涂片自然干燥后即可鏡檢。血液內(nèi)原蟲檢查法（3）離心集蟲法在離心管中加2％的檸檬酸生理鹽水3～4ml，再加血液6～7ml；混勻后，以500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，使其中大部分紅細胞沉降；將含有少量紅細胞、白細胞和蟲體的上層血漿，用吸管移入另一離心管中，補加一些生理鹽水，以2500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10分鐘，取其沉淀制成抹片，染色檢查。血液內(nèi)原蟲檢查法錐蟲寄生蟲病的免疫學(xué)診斷1皮內(nèi)實驗2環(huán)卵沉淀實驗3間接血凝試驗4酶聯(lián)免疫吸附試驗皮內(nèi)實驗實驗原理：宿主在寄生蟲變應(yīng)原刺激后，體內(nèi)產(chǎn)生親細胞性抗體，當(dāng)其與相應(yīng)抗原結(jié)合后，肥大細胞和嗜堿性粒細胞脫顆粒，釋放生物活性物質(zhì)，引起注射抗原的局部皮膚出現(xiàn)皮丘及紅疹，以此便可判斷體內(nèi)是否含有某種特異性抗體存在。皮內(nèi)實驗操作方法：按照1:3000的比例制備新鮮成蟲勻漿，使用無菌注射器和皮試針頭對待檢動物進行皮試注