《施馬倫貝格病診斷技術(shù)gbt+43159-2023》詳細(xì)解讀

《施馬倫貝格病診斷技術(shù)gb/t43159-2023》詳細(xì)解讀contents目錄1范圍2規(guī)范性引用文件3術(shù)語和定義4縮略語5生物安全措施6臨床診斷7樣品采集與處理contents目錄8實(shí)驗(yàn)室診斷9綜合判定附錄A(規(guī)范性)病毒分離及血清中和試驗(yàn)相關(guān)溶液的配制附錄B(資料性)熒光RT-PCR引物和探針序列信息附錄C(規(guī)范性)DEPC處理水的配制附錄D(規(guī)范性)阻斷ELISA抗體檢測相關(guān)溶液的配制contents目錄附錄E(資料性)血清中和試驗(yàn)(噬斑減少中和試驗(yàn))測定示例參考文獻(xiàn)011范圍0102涵蓋的病毒種類與SBV密切相關(guān)的其他蟲媒病毒，如近似施馬倫貝格病毒。施馬倫貝格病毒（Schmallenbergvirus，簡稱SBV）的各個(gè)亞型。適用的樣本類型動(dòng)物的血液、組織、分泌物和排泄物等樣本。環(huán)境中的水源、土壤、昆蟲等可能攜帶病毒的樣本。123包括病毒分離、鑒定和純化等技術(shù)。病原學(xué)檢測如酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等。血清學(xué)檢測如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等。分子生物學(xué)檢測適用的檢測方法和技術(shù)0102標(biāo)準(zhǔn)的適用領(lǐng)域和對(duì)象為動(dòng)物養(yǎng)殖、屠宰、加工、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)的施馬倫貝格病監(jiān)測和防控提供技術(shù)支撐。適用于動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、動(dòng)物診療機(jī)構(gòu)、科研院校等。022規(guī)范性引用文件03遵循我國相關(guān)的法律法規(guī)和診斷技術(shù)規(guī)范，確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。01本標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)國內(nèi)外施馬倫貝格病相關(guān)的診斷技術(shù)、病原學(xué)、流行病學(xué)等研究資料制定。02參照了世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）對(duì)施馬倫貝格病的診斷、報(bào)告和監(jiān)測要求。診斷技術(shù)依據(jù)相關(guān)術(shù)語定義詳細(xì)闡述了施馬倫貝格病、病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化等相關(guān)術(shù)語及其定義。對(duì)診斷過程中涉及的樣品采集、保存、運(yùn)輸?shù)刃g(shù)語進(jìn)行規(guī)范，確保各方溝通順暢，減少誤解。介紹了施馬倫貝格病的病原學(xué)診斷方法，包括病毒分離鑒定、分子生物學(xué)檢測等。闡述了血清學(xué)診斷方法，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、病毒中和試驗(yàn)（VNT）等。簡述了臨床診斷及流行病學(xué)調(diào)查在施馬倫貝格病診斷中的應(yīng)用。診斷方法概述03介紹了樣品處理的方法和步驟，包括樣品的預(yù)處理、提取、純化等，為后續(xù)檢測工作奠定基礎(chǔ)。01明確了樣品采集的種類、時(shí)間、部位及數(shù)量等要求，確保樣品的有效性和代表性。02規(guī)定了樣品的保存條件、運(yùn)輸方式及注意事項(xiàng)，防止樣品在采集、保存和運(yùn)輸過程中發(fā)生變質(zhì)或損壞。樣品采集與處理033術(shù)語和定義施馬倫貝格病是一種由施馬倫貝格病毒引起的、主要影響反芻動(dòng)物的急性或慢性非化膿性腦炎。該病以發(fā)熱、沉郁、共濟(jì)失調(diào)、抽搐、癱瘓和死亡為特征，對(duì)畜牧業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。定義臨床表現(xiàn)施馬倫貝格病病毒分類施馬倫貝格病病毒屬于布尼亞病毒科、正布尼亞病毒屬的成員。病毒特性病毒具有包膜，其基因組為分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA。病毒主要通過節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)行傳播。施馬倫貝格病病毒診斷技術(shù)診斷方法包括病原學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷等方法。應(yīng)用各種診斷方法適用于不同感染階段和樣本類型，為準(zhǔn)確判定施馬倫貝格病提供有力支持。樣品類型包括血液、組織、腦脊液等。采集要求樣品采集需遵循無菌操作原則，避免交叉污染，同時(shí)確保樣品具有代表性。處理方法樣品經(jīng)過適當(dāng)處理后可提取病毒RNA或進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)，為后續(xù)檢測提供基礎(chǔ)。樣品采集與處理044縮略語

施馬倫貝格病相關(guān)縮略語SBV施馬倫貝格病毒（SchmallenbergVirus）的縮寫，代表引發(fā)施馬倫貝格病的病原體。RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）的縮寫，用于檢測病毒核酸的一種高靈敏度技術(shù)。ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）的縮寫，用于檢測病毒抗體或抗原的免疫學(xué)方法。DNA01脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）的縮寫，是病毒的遺傳物質(zhì)。RNA02核糖核酸（RibonucleicAcid）的縮寫，某些病毒（如施馬倫貝格病毒）以RNA作為遺傳物質(zhì)。PCR03聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction）的縮寫，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于擴(kuò)增特定的DNA片段。診斷技術(shù)相關(guān)縮略語標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)縮略語GB國家標(biāo)準(zhǔn)的縮寫，代表中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)的制定和發(fā)布機(jī)構(gòu)。T推薦性標(biāo)準(zhǔn)的縮寫，與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)，代表標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施的非強(qiáng)制性。WHO世界衛(wèi)生組織（WorldHealthOrganization）的縮寫，是聯(lián)合國系統(tǒng)內(nèi)負(fù)責(zé)公共衛(wèi)生的權(quán)威機(jī)構(gòu)。OIE世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WorldOrganisationforAnimalHealth）的縮寫，是負(fù)責(zé)動(dòng)物健康與福利的國際組織。其他常用縮略語055生物安全措施針對(duì)施馬倫貝格病的特點(diǎn)，構(gòu)建完善的疫情監(jiān)測體系，確保及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情。建立健全疫情監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)對(duì)重點(diǎn)地區(qū)、重點(diǎn)場所進(jìn)行定期疫情調(diào)查，掌握疫情動(dòng)態(tài)。定期開展疫情調(diào)查發(fā)現(xiàn)疫情后，應(yīng)按照規(guī)定的程序和時(shí)間及時(shí)上報(bào)，以便迅速采取應(yīng)對(duì)措施。疫情報(bào)告制度5.1疫情監(jiān)測與報(bào)告對(duì)引進(jìn)的動(dòng)物進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫，防止施馬倫貝格病病原體的傳入。嚴(yán)格實(shí)施檢疫措施在疫情發(fā)生時(shí)，對(duì)疫點(diǎn)、疫區(qū)進(jìn)行隔離封鎖，防止疫情擴(kuò)散。疫情發(fā)生時(shí)的隔離措施5.2檢疫與隔離對(duì)動(dòng)物飼養(yǎng)場所、屠宰加工場所等進(jìn)行定期消毒，殺滅環(huán)境中的病原體。定期開展消毒工作對(duì)病死動(dòng)物及其污染物進(jìn)行無害化處理，防止病原體的傳播和擴(kuò)散。無害化處理病死動(dòng)物及污染物5.3消毒與無害化處理5.4免疫預(yù)防與藥物防治根據(jù)疫情形勢和動(dòng)物免疫情況，制定合理的免疫程序，提高動(dòng)物抵抗力。免疫預(yù)防策略在疫情發(fā)生時(shí)，結(jié)合臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，選用有效的藥物進(jìn)行治療，降低發(fā)病率和死亡率。藥物防治066臨床診斷發(fā)熱施馬倫貝格病患者通常會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，體溫可升高至40℃以上，持續(xù)數(shù)天至數(shù)周不等。腹瀉與脫水患者可能出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉，導(dǎo)致脫水和電解質(zhì)紊亂。腹瀉可呈水樣或伴有粘液和血液。神經(jīng)系統(tǒng)癥狀部分患者可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如頭痛、肌肉疼痛、肢體無力等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)意識(shí)障礙。6.1臨床癥狀觀察血清學(xué)檢測通過采集患者血液樣本，檢測特異性抗體以輔助診斷。常用的血清學(xué)檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）。病原學(xué)檢測通過分子生物學(xué)技術(shù)，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測病毒核酸，以確定病原體存在。病毒分離與鑒定將患者樣本接種到敏感細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物上，進(jìn)行病毒分離與鑒定，為確診提供直接證據(jù)。0102036.2實(shí)驗(yàn)室檢測VS綜合患者的流行病學(xué)史、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果等信息，由專業(yè)醫(yī)生進(jìn)行綜合分析，作出診斷。鑒別診斷施馬倫貝格病需與其他類似癥狀的傳染病進(jìn)行鑒別診斷，如流感、登革熱等。通過詳細(xì)的病史詢問、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢測，以明確診斷。診斷依據(jù)6.3診斷依據(jù)與鑒別診斷根據(jù)患者病情輕重和臨床表現(xiàn)，可分為輕型、普通型、重型和危重型等不同的臨床分型，以便針對(duì)性地采取治療措施。施馬倫貝格病可分為急性期、恢復(fù)期和后遺癥期。不同分期患者的臨床表現(xiàn)和治療重點(diǎn)有所不同，需密切關(guān)注病情變化，及時(shí)調(diào)整治療方案。臨床分型臨床分期6.4臨床分型與分期077樣品采集與處理在病程早期，患者出現(xiàn)癥狀后的最短時(shí)間內(nèi)采集樣品，以提高檢測的準(zhǔn)確性。采集時(shí)間根據(jù)臨床表現(xiàn)和疑似感染部位，選擇合適的樣品類型，如血液、組織等。采集部位確保采集足夠的樣品量，以滿足后續(xù)檢測的需要。采集數(shù)量在采集過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免交叉污染。無菌操作樣品采集要求血液樣品處理將采集的血液樣品進(jìn)行離心分離，取上清液進(jìn)行后續(xù)檢測。組織樣品處理將采集的組織樣品進(jìn)行研磨或勻漿處理，釋放病毒粒子，方便后續(xù)檢測。保存與運(yùn)輸樣品在采集后應(yīng)妥善保存，并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，以確保樣品的穩(wěn)定性和可靠性。樣品處理方法樣品接收與登記實(shí)驗(yàn)室在收到樣品后應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)登記，包括樣品來源、采集時(shí)間等信息。核酸提取與純化采用合適的核酸提取方法，從樣品中提取病毒核酸，并進(jìn)行純化，以提高檢測的靈敏度。PCR擴(kuò)增與檢測利用特異性引物對(duì)提取的核酸進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過電泳或熒光定量等方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，以確定病毒的存在。實(shí)驗(yàn)室檢測流程結(jié)果解讀根據(jù)PCR擴(kuò)增和檢測結(jié)果，結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)史，對(duì)樣品進(jìn)行綜合解讀，確定是否感染施馬倫貝格病。0102報(bào)告出具實(shí)驗(yàn)室在檢測完成后應(yīng)及時(shí)出具檢測報(bào)告，明確標(biāo)注檢測結(jié)果和解讀意見，為臨床診斷和治療提供有力支持。檢測結(jié)果解讀與報(bào)告088實(shí)驗(yàn)室診斷病毒鑒定通過特異性抗體中和試驗(yàn)、電子顯微鏡觀察、基因測序等方法對(duì)分離到的病毒進(jìn)行鑒定。病原學(xué)檢測的意義病原學(xué)檢測是確診施馬倫貝格病的金標(biāo)準(zhǔn)，能夠直接檢測到病毒的存在，為后續(xù)防控工作提供有力支持。病毒分離采用細(xì)胞培養(yǎng)方法對(duì)施馬倫貝格病毒進(jìn)行分離，可使用易感細(xì)胞系如BHK-21、Vero等。8.1病原學(xué)檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）利用特異性抗原抗體反應(yīng)原理，檢測血清中施馬倫貝格病毒特異性抗體。血清中和試驗(yàn)（SNT）通過測定血清中中和抗體滴度，評(píng)估機(jī)體對(duì)施馬倫貝格病毒的抵抗力。血清學(xué)檢測的應(yīng)用血清學(xué)檢測可用于施馬倫貝格病的流行病學(xué)調(diào)查、疫苗免疫效果評(píng)價(jià)等方面。8.2血清學(xué)檢測0302018.3分子生物學(xué)檢測采用特異性引物對(duì)施馬倫貝格病毒核酸進(jìn)行擴(kuò)增，通過電泳等方法判斷結(jié)果。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）在PCR基礎(chǔ)上加入熒光探針，實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程，提高檢測靈敏度和特異性。分子生物學(xué)檢測的優(yōu)勢分子生物學(xué)檢測具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，適用于大量樣品的快速篩查和診斷。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）099綜合判定判定原則01綜合考慮流行病學(xué)、臨床癥狀、病理學(xué)變化和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果進(jìn)行判定。02區(qū)分自然感染與疫苗接種后的抗體反應(yīng)。排除其他類似疾病的干擾。0301020304收集病例資料包括病畜的基本信息、臨床表現(xiàn)、剖檢變化等。實(shí)驗(yàn)室檢測進(jìn)行病原學(xué)、血清學(xué)等檢測，獲取客觀數(shù)據(jù)。結(jié)果分析結(jié)合病例資料和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，進(jìn)行綜合分析。作出判定根據(jù)分析結(jié)果，判定是否為施馬倫貝格病。判定流程010203確保樣品的真實(shí)性和可靠性，避免誤判。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)于疑似病例，應(yīng)及時(shí)上報(bào)并采取措施防止疫情擴(kuò)散。判定注意事項(xiàng)10附錄A(規(guī)范性)病毒分離及血清中和試驗(yàn)相關(guān)溶液的配制病毒稀釋液采用適宜的緩沖液，如磷酸鹽緩沖液，用于病毒的稀釋與保存。病毒滅活液配制能夠滅活病毒的溶液，如含特定濃度甲醛或β-丙內(nèi)酯的溶液，以確保操作安全。細(xì)胞培養(yǎng)液根據(jù)特定細(xì)胞系的需求，配制適宜的培養(yǎng)液，通常包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、抗生素等成分。病毒分離相關(guān)溶液配制ABCD血清中和試驗(yàn)相關(guān)溶液配制血清稀釋液選擇適當(dāng)?shù)木彌_液，如生理鹽水或磷酸鹽緩沖液，用于稀釋待測血清。細(xì)胞維持液在血清中和試驗(yàn)過程中，用于維持細(xì)胞生長的溶液，通常包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基和必要的添加劑。病毒-血清混合液將已知濃度的病毒與稀釋后的血清按一定比例混合，用于后續(xù)的血清中和試驗(yàn)。染色液與洗滌液用于細(xì)胞染色與洗滌的溶液，以便觀察病毒中和效果及細(xì)胞狀態(tài)。11附錄B(資料性)熒光RT-PCR引物和探針序列信息特異性引物應(yīng)具有高特異性，以確保僅擴(kuò)增目標(biāo)病毒核酸序列，避免非特異性擴(kuò)增。敏感性引物設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧敏感性，能夠在低病毒載量樣本中有效擴(kuò)增目標(biāo)序列。長度與GC含量引物長度適中，通常為18-24個(gè)核苷酸，GC含量控制在40%-60%之間，以保證引物的穩(wěn)定性和擴(kuò)增效率。引物設(shè)計(jì)原則探針的5’端通常標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)，以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測。熒光標(biāo)記序列特異性長度與Tm值探針序列應(yīng)位于目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物內(nèi)部，且具有高度特異性，以避免與非目標(biāo)序列雜交。探針長度適中，通常為20-30個(gè)核苷酸，Tm值（解鏈溫度）應(yīng)高于引物的Tm值，以確保在擴(kuò)增過程中探針與目標(biāo)序列的穩(wěn)定結(jié)合。探針設(shè)計(jì)要點(diǎn)表中詳細(xì)列出了針對(duì)施馬倫貝格病病毒的熒光RT-PCR引物和探針的序列信息，包括引物/探針名稱、序列、長度、GC含量等關(guān)鍵參數(shù)。這些引物和探針經(jīng)過嚴(yán)格篩選和優(yōu)化，可用于施馬倫貝格病病毒的高效、特異和敏感檢測。使用者可根據(jù)實(shí)際需求，選擇合適的引物和探針組合進(jìn)行熒光RT-PCR檢測。引物與探針序列信息表12附錄C(規(guī)范性)DEPC處理水的配制DEPC滅活RNA酶DEPC（焦碳酸二乙酯）是一種強(qiáng)烈的RNA酶抑制劑，能夠有效滅活水中的RNA酶，保證RNA的完整性。穩(wěn)定性好DEPC處理水在配制后能夠保持較長時(shí)間的穩(wěn)定性，不易被污染，滿足實(shí)驗(yàn)需求。配制原理包括DEPC、去離子水、容量瓶、磁力攪拌器等。準(zhǔn)備試劑與耗材在通風(fēng)櫥中，將DEPC加入去離子水中，用磁力攪拌器攪拌至完全溶解，然后靜置過夜，使其充分作用。配制過程將DEPC處理水進(jìn)行高壓滅菌，以去除殘留的DEPC，同時(shí)保證水的無菌狀態(tài)。高壓滅菌010203配制步驟安全防護(hù)DEPC具有揮發(fā)性，對(duì)人體有一定的毒性，配制過程中需佩戴防護(hù)眼鏡和手套，確保安全。準(zhǔn)確配制按照規(guī)定的比例加入DEPC和去離子水，確保配制出符合要求的DEPC處理水。儲(chǔ)存條件將配制好的DEPC處理水儲(chǔ)存于密封容器中，放置陰涼干燥處，避免陽光直射。注意事項(xiàng)用于RNA的提取、純化、保存等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作，確保RNA的質(zhì)量和穩(wěn)定性。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)在醫(yī)學(xué)研究與診斷中，使用DEPC處理水可以避免RNA酶的干擾，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。醫(yī)學(xué)研究與診斷應(yīng)用范圍13附錄D(規(guī)范性)阻斷ELISA抗體檢測相關(guān)溶液的配制磷酸鹽緩沖液（PBS）用于稀釋抗原、抗體及洗滌酶標(biāo)板，確保反應(yīng)體系的穩(wěn)定性。配制方法取適量磷酸鹽，加入蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH值至7.2-7.4，定容后高壓滅菌。配制緩沖液包被液用于稀釋抗原并包被酶標(biāo)板，提供良好的抗原吸附環(huán)境。配制方法通常采用碳酸鹽緩沖液，取適量碳酸鹽加入蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH值至9.6左右。封閉液用于封閉酶標(biāo)板上未吸附抗原的位點(diǎn)，減少非特異性吸附。配制方法常用牛血清白蛋白（BSA）或脫脂奶粉溶于PBS中制成。包被液與封閉液抗體稀釋液用于稀釋待檢血清中的抗體，確保抗體與抗原的特異性結(jié)合。配制方法通常采用含有一定量BSA的PBS，以提供穩(wěn)定的抗體活性。酶標(biāo)抗體稀釋液用于稀釋酶標(biāo)記的抗體，使其與待檢血清中的抗體形成競爭結(jié)合。配制方法在抗體稀釋液的基礎(chǔ)上加入適量的酶標(biāo)記抗體，確保酶的活性與穩(wěn)定性?？贵w稀釋液與酶標(biāo)抗體稀釋液底物液用于與酶發(fā)生顯色反應(yīng)，生成可觀測的有色產(chǎn)物。終止液用于終止酶與底物的顯色反應(yīng)，固定反應(yīng)結(jié)果。配制方法根據(jù)具體酶標(biāo)抗體的類型選擇合適的底物，如TMB（四甲基聯(lián)苯胺）等，溶于有機(jī)溶劑后按比例加入底物緩沖液。配制方法通常采用硫酸或鹽酸等強(qiáng)酸，按一定比例加入蒸餾水制成。注意終止液加入時(shí)要迅速且均勻，以避免對(duì)反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生影響。底物液與終止液14附錄E(資料性)血清中和試驗(yàn)(噬斑減少中和試驗(yàn))測定示例試驗(yàn)原理血清中和試驗(yàn)是一種基于病毒與特異性抗體結(jié)合后失去感染性的原理，通過檢測血清中特異性抗體對(duì)病毒的中和能力來評(píng)估免疫效果或診斷病毒感染的方法。噬斑減少中和試驗(yàn)是血清中和試驗(yàn)的一種，它利用病毒在細(xì)胞培養(yǎng)物上形成的噬斑數(shù)量來定量測定血清中抗體的中和效價(jià)。病毒稀釋與接種將已知滴度的病毒液進(jìn)行系列稀釋，與待測血清混合，接種于細(xì)胞培養(yǎng)物上。計(jì)算中和效價(jià)通過比較不同稀釋度血清對(duì)病毒噬斑形成的抑制作用，計(jì)算出待測血清的中和效價(jià)。觀察噬斑形成在適當(dāng)條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察并記錄噬斑的數(shù)量。準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)物選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞系，如Vero細(xì)胞等，進(jìn)行培養(yǎng)。操作步驟實(shí)驗(yàn)室安全進(jìn)行病毒相關(guān)試驗(yàn)