微生物檢驗課件

12五月2024微生物檢驗細(xì)胞數(shù)量的測定方法----七種方法測定微生物生長的方法很多，各種方法均有其優(yōu)缺點，也不是在任何情況下都適用。在微生物學(xué)工作中一般常用的是平皿菌落計數(shù)法、計數(shù)器法和比濁法。至于哪種方法比較適合你，得根據(jù)你的具體條件而定。1、計數(shù)器測定法即用血細(xì)胞計數(shù)器進行計數(shù)。取一定體積的樣品細(xì)胞懸液置于血細(xì)胞計數(shù)器的計數(shù)室內(nèi)，用顯微鏡觀察計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據(jù)計數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)，可計算樣品中的含菌數(shù)。本法簡便易行，可立即得出結(jié)果。

本法不僅適于細(xì)菌計數(shù)，也適用于酵母菌及霉菌孢子計數(shù)2、電子計數(shù)器計數(shù)法電子計數(shù)器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細(xì)胞，當(dāng)一個細(xì)胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈沖，自動記錄在電子記錄裝置上。

該法測定結(jié)果較準(zhǔn)確，但它只識別顆粒大小，而不能區(qū)分是否為細(xì)菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。

3、活細(xì)胞計數(shù)法

常用的有平板菌落計數(shù)法，是根據(jù)每個活的細(xì)菌能長出一個菌落的原理設(shè)計的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然后將定量的稀釋液進行平板培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，可算出培養(yǎng)物中的活菌數(shù)。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數(shù)的方法，也是目前國際上許多國家所采用的方法。平板菌落計數(shù)法的步驟平板菌落計數(shù)法使用該法應(yīng)注意①一般選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進行計數(shù)，過多或過少均不準(zhǔn)確；②為了防止菌落蔓延，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。

廣泛應(yīng)用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細(xì)菌檢驗，是最常用的活菌計數(shù)法

4、比濁法

比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計測定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。

此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對的細(xì)菌數(shù)目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。

5、測定細(xì)胞重量法

此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進行稱重；干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后，以清水洗凈放人干燥器加熱烘干，使之失去水分然后稱重。

此法適于菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。6、測定細(xì)胞總氮量或總碳量

氮、碳是細(xì)胞的主要成分，含量較穩(wěn)定，測定氮、碳的含量可以推知細(xì)胞的質(zhì)量。此法適于細(xì)胞濃度較高的樣品。

7、顏色改變單位法（colourchangeunit,簡稱CCU）

這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無法計數(shù)的微生物，比如支原體等，因為支原體的液體培養(yǎng)物是完全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計數(shù)，因此需要用特殊的