微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀校準(zhǔn)規(guī)范

JJF1849—20201微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于配置96孔板的微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀的校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:YY/T1174—2010半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語3.1化學(xué)發(fā)光chemiluminescence在沒有光、電、磁、聲、熱源外來激發(fā)的情況下,由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的一種光輻射的現(xiàn)象,包含兩個基本過程:反應(yīng)體系中的分子吸收化學(xué)反應(yīng)釋放的化學(xué)能由基態(tài)躍遷至高能激發(fā)態(tài);隨后,處于高能態(tài)的受激分子,以一定的量子產(chǎn)率發(fā)射光子。3.2孔間干擾interferenceamongholes檢測器在測量96孔板中每個孔杯的發(fā)光強度時受到周圍鄰近孔的發(fā)光強度的影響程度。3.3通道差異differencesamongchannels檢測器對每個通道的檢測能力的差異。4概述微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀(以下簡稱分析儀)是一種基于化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象,采用光電檢測技術(shù),對微孔板中一系列待測物質(zhì)與發(fā)光試劑發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的發(fā)光強度進行檢測分析的儀器。分析儀由微孔板、檢測器和數(shù)據(jù)處理裝置三部分組成,分析儀組成圖及本規(guī)范涉及的微孔板(96孔板)的結(jié)構(gòu)見圖A.1和圖A.2。本規(guī)范的測量參數(shù)為發(fā)光強度。5計量特性5.1重復(fù)性5.2孔間干擾5.3通道差異5.4線性誤差6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件26.1.1溫度:(15~35)℃。6.1.2相對濕度:不大于85%。6.1.3電源電壓:單相正弦交流(220±22)V,(50±1)Hz。6.1.4校準(zhǔn)前,儀器應(yīng)預(yù)熱30min。6.2校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)器光源計量標(biāo)準(zhǔn)器:主要包括光源和光譜中性濾光片兩個部分,其中光源由氚光源和450nm干涉濾光片(峰值波長擴展不確定度≤1nm;光譜帶寬≤15nm)組成,光源可以放置于96孔板架任意孔位;光譜中性濾光片共4片,在450nm處吸光度標(biāo)稱值分光源應(yīng)在有效期內(nèi)使用。7校準(zhǔn)項目和校準(zhǔn)方法7.1重復(fù)性將光源放置在96孔板架D7孔(見圖A.2)上,直接使用分析儀測定此時的發(fā)光強度I0i,重復(fù)測定6次,記錄儀器示值,并計算平均值,按公式(1)計算相對實驗標(biāo)準(zhǔn)偏差,作為分析儀的重復(fù)性結(jié)果。式中:I0i———發(fā)光強度第i次測量值;I0———發(fā)光強度平均值;7.2孔間干擾將光源放置在96孔板D7孔(圖A.2)上,直接使用分析儀測量中心發(fā)光孔發(fā)光強度I0和周圍孔發(fā)光強度Iki,孔位分布如圖2所示,分別記錄儀器示值,計算周圍孔發(fā)光強度的平均值,按公式(2)計算周圍孔發(fā)光強度與中心發(fā)光孔發(fā)光強度之比的百分?jǐn)?shù),表示分析儀的孔間干擾。3圖2孔間干擾校準(zhǔn)中孔位分布圖(2)式中:c—孔間干擾;Iki———周圍第i孔的發(fā)光強度測量值;I0———中心孔的發(fā)光強度測量值。7.3通道差異將光源分別放置在96孔板B2、B7、B11、D2、D7、D11、G2、G7、G11孔(見圖A.2)上,直接使用分析儀分別測定每個位置的發(fā)光強度,分別記錄分析儀示值,按公式(3)計算相對實驗標(biāo)準(zhǔn)偏差,以實驗結(jié)果的相對實驗標(biāo)準(zhǔn)偏差表示分析儀的通道差異。式中:ICVi—第i孔位測量的發(fā)光強度測量值;ICV—9個孔位發(fā)光強度測量值的平均值;sc———分析儀通道差異檢測中,發(fā)光強度平均值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。7.4線性誤差首先,將光源放置在96孔板架D7孔(見圖A.2)上,直接使用分析儀測定此時的完全發(fā)光強度I0,然后分別采用不同吸光度的光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)覆蓋光源,再使用分析儀測定此時的發(fā)光強度Ii,吸光度A根據(jù)公式A=-lg計算。各吸光度值重復(fù)測定3次,計算3次測得值的平均值,用最小二乘法擬合光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸光度標(biāo)準(zhǔn)值和測得值的平均值,得到儀器的線性方程,見公式(4)。JJF1849—20204式中:A———光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸光度的儀器測量值式中:A———光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸光度的儀器測量值;a—截距,計算公式見附錄B;b—斜率,計算公式見附錄B;As———光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)吸光度標(biāo)準(zhǔn)值。按照公式(5)計算各光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儀器測得值的線性方程擬合值。按照公式(6)計算線性誤差,線性誤差最大絕對值作為校準(zhǔn)結(jié)果的線性誤差。(5)式中:ΔAi=(Ai-Asi)/Asi×100%(6)ΔAi———光譜中性濾光片第i點的線性誤差;Ai———光譜中性濾光片第i點線性方程擬合值; Ai———光譜中性濾光片第i點的3次測量吸光度值的平均值;Asi———光譜中性濾光片第i點吸光度標(biāo)準(zhǔn)值;8校準(zhǔn)結(jié)果表達校準(zhǔn)記錄應(yīng)盡可能詳盡地記載測量數(shù)據(jù)和計算結(jié)果,推薦的校準(zhǔn)記錄格式見附錄D。分析儀測量結(jié)果的測量不確定度應(yīng)按JJF1059.1的要求評定,不確定度評定示例見附錄C。經(jīng)校準(zhǔn)的分析儀應(yīng)出具校準(zhǔn)證書,校準(zhǔn)證書應(yīng)符合JJF1071—2010中5.12的要求。9復(fù)校時間間隔建議復(fù)校時間間隔不超過1年。然而,由于復(fù)校時間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等著多因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實際使用情況自主確定復(fù)校時間間隔。JJF1849—20205附錄A微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀的組成及96孔板示意圖微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀的組成見圖A.1。96孔板示意圖見圖A.2。圖A.1微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀的組成示意圖圖A.2微孔板(96孔板)示意圖JJF1849—20206附錄B線性擬合中斜率與截距的計算直線方程為:斜率:截距:其中: 式中 Ai=a+bAsiAi———光譜中性濾光片第i點的3次測量吸光度值的平均值;Asi———光譜中性濾光片第i點吸光度標(biāo)準(zhǔn)值;i———擬合直線的第i個標(biāo)準(zhǔn)點;JJF1849—20207附錄C線性誤差不確定度評定示例C.1測量模型C.1.1建立測量模型ΔAi=(Ai-Asi)/Asi×100%(C.1)ΔAi=×100%(C.2)式中:ΔAi———光譜中性濾光片第i點的線性誤差;Ai———光譜中性濾光片第i點線性方程擬合值;Asi———光譜中性濾光片第i點吸光度標(biāo)準(zhǔn)值; Ai———光譜中性濾光片第i點的3次測量吸光度值的平均值;a—截距;b—斜率。C.1.2合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度計算合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度可按下式計算:(C.3)(C.4)C.2輸入量的標(biāo)準(zhǔn)不確定評定C.2.1輸入量Ai的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Ai)的評定輸入量Ai的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Ai)主要來源于微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀校準(zhǔn)過程中人員操作、儀器穩(wěn)定性、環(huán)境條件波動等諸多因素。根據(jù)微孔板化學(xué)發(fā)光分析儀校準(zhǔn)中儀器的測光值重復(fù)性項目sr和線性誤差項目中每點重復(fù)測定3次,進行A類評定。重復(fù)性數(shù)據(jù)見表C.1。由此可以得出輸入量Ai的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.044%。表C.1重復(fù)性數(shù)據(jù)發(fā)光強度重復(fù)性2170002190002180002180002170002170000.38%C.2.2輸入量Asi的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Asi)的評定輸入量Asi的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Asi)主要來源于光譜中性濾光片標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定8度,可以根據(jù)光譜中性濾光片校準(zhǔn)證書提供的吸光度擴展不確定度UA和包含因子kA獲得=0.005。C.2.3輸入量a、b的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(b)和u(a)的評定輸出量a、b的不確定度u(a)和u(b)的評定見公式(C.5)、公式(C.6)。(C.5)(C.6)式中:xi———擬合線性方程中光譜中性濾光片第i點吸光度標(biāo)準(zhǔn)值;x———擬合線性方程中四種光譜中性濾光片吸光度標(biāo)準(zhǔn)值的平均值;yi———擬合線性方程中光譜中性濾光片第i點吸光度檢測值;yi'———擬合線性方程中光譜中性濾光片第i點線性方程擬合值;計算得到斜率和截距評定結(jié)果:u(a)=0.0033,表()性.準(zhǔn)數(shù)據(jù)吸光度標(biāo)準(zhǔn)值0.2000.4790.7761.879吸光度測量值平均值0.1870.4550.7301.721擬合結(jié)果a=0.015b=0.910吸光度計算值0.1890.4840.7861.875單點線性誤差-5.5%0.9%1.3%-0.2%C.2.4標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量一覽表輸入量標(biāo)準(zhǔn)不確定度靈敏系數(shù)Aiu(Ai)=0.044%=5.495Asiu(Asi)=0.005=-4.780au(a)=0.0033=-5.495bu(b)=0.00369C.3合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度按照公式(C.4)計算,結(jié)果見表C.4。C.4擴展不確定度線性誤差/%合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(ΔAi)/%擴展不確定度U/%包含因子k-5.53.16.2210附錄D校準(zhǔn)原始記錄參考格式送校單位校準(zhǔn)地址儀器型號儀器編號制造廠商檢測日期環(huán)境溫度相對濕度%校準(zhǔn)人核驗人技術(shù)依據(jù)主要測量設(shè)備名稱/型號測量范圍不確定度/準(zhǔn)確度等級/最大允許誤差檢定/校準(zhǔn)證書編號/有效期D.1重復(fù)性發(fā)光強度重復(fù)性/%D.2孔間干擾中心孔發(fā)光強度周圍孔發(fā)光強度周圍孔發(fā)光強度平均值孔間干擾/%D.3通道差異光源位置B2B7B11D2D7D11G2G7G11發(fā)光強度通道差異/%11D.4線性誤差吸光度標(biāo)準(zhǔn)值完全發(fā)光強度發(fā)光強度吸光度測量值吸光度測量值平均值線性方程吸光度計算值單點線性誤差/%線性誤差/%線性誤差