項(xiàng)目6 人工授精技術(shù)

項(xiàng)目六人工授精技術(shù)種公豬在后裔遺傳中占有50%的影響力，優(yōu)良公豬的充分利用，將帶來可觀的經(jīng)濟(jì)效益，人工授精可大大提高公豬的利用率，減少公豬飼養(yǎng)量。此外，人工授精技術(shù)還在于減少疾病傳播、優(yōu)良基因的迅速擴(kuò)散、提高母豬受胎率等方面存在積極意義。豬人工授精即利用人工方法采集公豬的精液，對(duì)其進(jìn)行品質(zhì)檢查、稀釋保存等處理，再用器械將精液輸送到發(fā)情母豬生殖器官內(nèi)，使其受孕。目前，世界上每年大約有2500萬頭次豬進(jìn)行人工授精。其中，超過99％的人工授精使用的是儲(chǔ)存在15℃～20℃下，最多保存3天的液態(tài)冷藏精液。日常工作計(jì)劃08:00-08:30記錄保溫箱溫度，對(duì)前天保存精液進(jìn)行檢查；08:30-09:30準(zhǔn)備上午用精液及授精器材；09:30-10:30準(zhǔn)備好采精器材，配合采精員采精后做好精液的檢查、稀釋、分裝、保存及報(bào)表記錄；10:30-11:30人工授精器具的清洗、消毒、保存?zhèn)溆茫?1:30-12:00清潔衛(wèi)生、各種設(shè)備的檢查；12：00-13:30午餐、午休；13：30-14:00記錄保溫箱溫度，準(zhǔn)備好采精器材；14:00-15:00配合采精員采精后做好精液的檢查、稀釋、分裝、保存及報(bào)表記錄；15:00-16:00準(zhǔn)備下午用器具的清洗、消毒、保存?zhèn)溆茫?7：00-17:30清潔衛(wèi)生、各種設(shè)備的檢查。技術(shù)要求

一、人工授精所需器具1、人工授精的用具和物品仿真物；顯微鏡；酒精燈；鏡片保溫器；恒溫水浴箱；分光儀；恒溫箱；接種環(huán)；溫度計(jì)；計(jì)時(shí)器：精密電子天平；化學(xué)試劑稱量紙；化驗(yàn)用封膠；鋁箔；500mL塑料瓶（裝鹽水）；輸精管；棉紗、棉球；試管架；計(jì)數(shù)器；鏡頭擦紙；熟料瓶；；放精液保溫箱；煤氣爐和消毒蒸鍋。2、必備的玻璃制品500mL、800mL燒杯；500mL、1000mL、2000mL精液儲(chǔ)瓶；容量瓶；凹玻片；載玻片；口徑1.5cm長(zhǎng)5cm的試管；蓋玻片；玻璃棒；染色杯；玻璃吸管；玻璃漏斗。恒溫水浴鍋精液儲(chǔ)瓶及精液3、用于稀釋的化學(xué)試劑及稀釋劑葡萄糖；碳酸氫鈉；乙二氨四乙酸二鈉鹽；檸檬酸三鈉；三羥基甲基氨基甲烷二、精液的生產(chǎn)1、配制0.9%鹽水稱9克氯化鈉放入鹽水瓶，加蒸餾水達(dá)1000mL，緊塞瓶口后，放進(jìn)蒸鍋消毒，開水蒸煮30分鐘，冷卻后即可使用。0.9%等滲生理鹽水是用來清洗各類與精液直接接觸的器皿。此鹽水的濃度與精液滲透壓相近，不會(huì)引起精蟲的死亡，如用蒸餾水，將使精蟲致死。2、玫瑰紅染色液配制稱3克玫瑰紅，加入99mL蒸餾水，用玻璃棒攪勻后，再加1mI40%福爾馬林。此稀釋劑用于對(duì)精蟲進(jìn)行染色，以便于檢查異常的精子。3、稀釋液配制精液稀釋液是與新鮮精液滲透壓接近，用于擴(kuò)大精液容量，給精子提供營(yíng)養(yǎng)、中和精子代謝產(chǎn)物、保持精液PH值的生理溶液。稀釋液配制的要求是：1、嚴(yán)格按照配方進(jìn)行配制，并保證與蒸餾水混合徹底溶解；2、稀釋前稀釋液溫度應(yīng)與新鮮精液盡可能一致；3、稀釋液一旦配制，必須在24小時(shí)內(nèi)用完。稀釋液溫度設(shè)定的原則是盡可能與采集到的精液溫度一致，誤差不超過2℃。稀釋液溫度的控制，通常采用的方法是將水浴鍋溫度設(shè)定為與精液一致的溫度上，然后將配制的稀釋液放入水浴鍋中維持一段時(shí)間，夏季為37～38℃，冬季為35～36℃，春秋季節(jié)為37℃。4、恒溫加熱板的預(yù)溫

活力是精子的一個(gè)重要質(zhì)量指標(biāo)。精液在接近動(dòng)物體溫的情況下，在顯微鏡下能準(zhǔn)確觀察到精子的活力。因此采精前應(yīng)先對(duì)加熱板和載玻片預(yù)溫，調(diào)定到顯示37℃或38℃。5、精液品質(zhì)檢查

（1）精液直觀項(xiàng)目檢查色澤：正常的豬精液從淺灰白色到乳白色。氣味：正常豬精液只有很淡的腥味。凝集度：質(zhì)地均勻。射精量：是與收集精液的總精予數(shù)有關(guān)的重要指標(biāo)。原精液涂片鏡檢圖像A、制作活力檢查的精液壓片B、精子活力評(píng)分①精子活力應(yīng)在37-39℃的溫度下檢查，先用100倍檢查，即用10倍的目鏡和10倍的物鏡進(jìn)行整體觀察，然后再把物鏡調(diào)成40倍（即放大倍數(shù)為400倍）進(jìn)行觀察。按十級(jí)評(píng)分制：90%的精子呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精液活力為0.9，80%的精子呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)則為0.8，依此類推。按1級(jí)制評(píng)分，合格精液精子活力應(yīng)不低于0.7。②新鮮精液在100倍下觀察，并不容易看到單個(gè)的精子活動(dòng)，因此要進(jìn)行整體觀察。按照五級(jí)評(píng)分制評(píng)分：合格精液的精子活力應(yīng)不低于3分。在400倍下觀察，應(yīng)進(jìn)行分區(qū)判斷，以便確定呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子占總精子數(shù)的百分比。（2）精子活力測(cè)定（3）精子密度測(cè)定

指每毫升精液中所含的精子數(shù)，是確定稀釋倍數(shù)的重要指標(biāo)，要求用精液密度儀測(cè)定。（4）精子畸形率測(cè)定

精子畸形率是指精液中畸形（形態(tài)異常）的精子占總精子數(shù)的百分率，畸形率越高，精液的質(zhì)量越差。后備公豬開始使用時(shí)以及正常使用的公豬每月都要進(jìn)行一次畸形率測(cè)定?；温实臏y(cè)定步驟：取樣抹片，精子染色，沖洗抹片，精子畸形率觀察與計(jì)算。公豬精子的畸形率應(yīng)不高于20%，如果畸形率較高，首先應(yīng)檢查操作過程，必要時(shí)要進(jìn)行第二次測(cè)定，如果仍然不合格，那么公豬的精液不可用于輸精。同時(shí)要查找原因，調(diào)整飼養(yǎng)管理，直到精子畸形率低于20%。如果小公豬畸形率超標(biāo)，經(jīng)改善飼養(yǎng)管理，3個(gè)月后仍沒有改善，應(yīng)將公豬淘汰。6、采精量測(cè)定按照規(guī)范的采精操作，公豬的采精量一般在100-500Ml，平均220mL。每頭公豬的采精量應(yīng)相對(duì)比較穩(wěn)定。如果公豬的采精量超出正常范圍，或與以往采精量明顯不同，應(yīng)注意查找原因。公豬精液的比重約為1.027克/mL，接近于1，因此，適合用稱重的方法來測(cè)量采精量。每克重量精液的體積約為1mL。

7、精液稀釋與保存

(1)精液稀釋后最終體積的計(jì)算總精子數(shù)=原精液體積（或重量）×原精液精子密度；可分裝份數(shù)=總精子數(shù)÷每份精液的精子數(shù)；精液稀釋后總體積（或重量）=可分裝份數(shù)×每份精液的體積（或重量）。對(duì)每1份可用于輸精的精液，基本要求包括：活力≥0.6，鮮精活力≥0.7，每份精液體積80—100mL（或克），每份精子數(shù)，豬場(chǎng)：30億，配種站：20億。(2)精液的稀釋精液稀釋時(shí)，一定要強(qiáng)調(diào)原精液與稀釋液的溫度要盡量一致，溫度相差在2℃以內(nèi)。根據(jù)計(jì)算所得的稀釋后總精液體積，緩緩加入稀釋液，稀釋液加入應(yīng)沿著杯壁倒入，禁止將稀釋液從高處倒入，形成沖擊力。稀釋液的最終加入量應(yīng)使精液和稀釋液的總體積達(dá)到所計(jì)算的稀釋后體積（或重量）。加入稀釋液過程中，應(yīng)一邊加入稀釋液，一邊輕輕搖動(dòng)燒杯或用潔凈的玻璃棒攪拌。精液稀釋

稀釋后鏡檢(3)精液的分裝精液稀釋5分鐘后，應(yīng)再一次檢查精子活力，如果活力沒有下降，方可進(jìn)行分裝。調(diào)好精液分裝機(jī)，以每80~100mL為單位，將精液分裝至精液瓶或袋。實(shí)驗(yàn)室室溫最好控制在20-25℃，以免在精液稀釋分裝處理過程中，精液受到環(huán)境溫度的影響。空氣中的氧氣不利于精子的保存，因此，精液封裝時(shí)應(yīng)盡可能將其中存留的空氣排出。精液瓶在擰上蓋子時(shí)，先將瓶蓋旋大半圈左右，然后擠壓瓶體使精液液面上升至瓶口，再旋緊，以排出瓶中空氣。袋裝精液在封口時(shí)，也應(yīng)先將其中的空氣擠出，使精液面上升到接近封口處的高度，再用熱封口機(jī)熱封。

(4)精液的標(biāo)記精液的標(biāo)記非常重要，便于確認(rèn)精液的來源、是否在保質(zhì)期內(nèi)，也便于進(jìn)行與配母豬的相關(guān)配種資料登記。每個(gè)品種的精液用不同顏色的精液瓶（袋）區(qū)分，井貼上標(biāo)簽，標(biāo)明品種、公豬號(hào)、采精日期、有效期、總精子數(shù)和活力等。

(5)精液降溫分裝后的精液先放在一個(gè)保溫箱內(nèi)，使精液緩慢降溫，待精液溫度下降到接近室溫時(shí)，再放入恒溫冰箱中。(6)精液的保存

A、保存溫度：稀釋好的精液應(yīng)保存在有報(bào)警裝置的電子恒溫箱中，恒溫箱內(nèi)溫度保持在16-18℃；B、每隔12個(gè)小時(shí)輕輕翻動(dòng)一次，防止精子沉淀而引起死亡；C、稀釋的精液可在保溫箱內(nèi)保存約3天。超過3天的精液，質(zhì)量將開始下降，不能用于人工授精；D、輸精前精液檢查：向試管倒入l-2mL精液，把試管放在37-38℃的恒溫水浴箱中加溫5分鐘，取出精液輕輕搖勻，用已滅菌的滴管取1滴放于預(yù)熱的載玻片，置于37

℃的恒溫板上片刻，用顯微鏡檢查活力，精液活力≥0.7，方可使用。8、精液的運(yùn)輸

精液運(yùn)輸應(yīng)置于保溫箱內(nèi)，保持在16-18℃，運(yùn)輸過程中避免強(qiáng)烈震動(dòng)。三、豬精液等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)等

級(jí)標(biāo)

準(zhǔn)優(yōu)

秀采精量250ml以上，精子活力0.8以上，精子密度3.0億/ml以上，精子畸型率5%以下，顏色、氣味正常。良

好采精量150ml以上，精子活力0.7以上