動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

受精作用1動(dòng)物細(xì)胞融合的概念一、動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指

動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成

細(xì)胞的過程。融合后形成的具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的

，稱為雜交細(xì)胞。兩個(gè)或多個(gè)一個(gè)單核細(xì)胞融合完成標(biāo)志：細(xì)胞核融合成一個(gè)核原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性誘導(dǎo)的方法：物理法：化學(xué)法：生物法：電激、振動(dòng)、離心聚乙二醇（PEG）滅活的病毒2動(dòng)物細(xì)胞融合過程為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？不能，因?yàn)椴粶缁畹牟《緯?huì)感染細(xì)胞。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。3動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用意義：突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。最重要的用途是制備單克隆抗體4植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理誘導(dǎo)方法用途獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性植物細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理法（離心、振動(dòng)、電激）化學(xué)法（聚乙二醇）物理法、化學(xué)法（同左）滅活的病毒獲得雜種細(xì)胞，重要用途制備單克隆抗體強(qiáng)調(diào)：漿細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生_____結(jié)合的__________。主要分布在

。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是___________________溫故知新二、單克隆抗體B細(xì)胞漿細(xì)胞記憶B細(xì)胞分化免疫球蛋白漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）特異性血清自主閱讀P52：用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的缺陷：

產(chǎn)量

、

，且抗體的

。多種B淋巴細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原反復(fù)注射如何解決這個(gè)問題呢？單克隆抗體！低純度低特異性差讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念人們發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。1單克隆抗體的概念單克隆抗體：單個(gè)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖形成的細(xì)胞群，產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體。提示1：對(duì)B淋巴細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。2單克隆抗體的制備

提示3：有什么方法能使B淋巴細(xì)胞也具有這樣的能力呢？一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)①為什么給小鼠注射羊的紅細(xì)胞？②細(xì)胞兩兩融合后，產(chǎn)生幾種融合細(xì)胞？③雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？有何特點(diǎn)？④如何得到大量雜交瘤細(xì)胞？⑤是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生所需專一性抗體？⑥利用雜交瘤細(xì)胞得到大量單克隆抗體的兩條途徑？閱讀課本p53-54已經(jīng)免疫幾種類型？（一選）即要在選擇性培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細(xì)胞淘汰克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)專一抗體檢驗(yàn)陽性專一抗體檢驗(yàn)陽性在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠注射特定的抗原蛋白培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體體外培養(yǎng)使其數(shù)量增殖：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)◆涉及技術(shù)：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合方法：用專一抗原與這些細(xì)胞產(chǎn)生的抗體結(jié)合注意：兩種篩選的方法和目的不同單克隆抗體的制備獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞BB

、B瘤、瘤瘤（融合的細(xì)胞有3種）√細(xì)胞培養(yǎng)液小鼠腹水(二選)篩選出能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞3單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。單克隆抗體的應(yīng)用：準(zhǔn)確、高效、簡易、快速（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可定位診斷腫瘤、心血管畸形等）小知識(shí)：單克隆抗體的應(yīng)用“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物

（2）治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。利用抗原和抗體的特異性結(jié)合單克隆抗體導(dǎo)向，藥物為彈藥本節(jié)小結(jié)一、動(dòng)物細(xì)胞融合二、單克隆抗體概念：原理：應(yīng)用：概念：單克隆抗體是由單一

細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度

的抗體。制備：應(yīng)用：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。細(xì)胞膜的流動(dòng)性。最重要的用途制備單克隆抗體雜交瘤專一單克隆抗體的制備抗原小鼠B淋巴細(xì)胞（能產(chǎn)生抗體）骨髓瘤細(xì)胞（能無限增殖）融合選擇性培養(yǎng)基（第一次篩選）雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)（第二次篩選）特異性雜交瘤細(xì)胞小鼠體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體俺很可憐！本節(jié)小結(jié)一、動(dòng)物細(xì)胞融合二、單克隆抗體概念：原理：應(yīng)用：概念：單克隆抗體是由單一

細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度

的抗體。制備：應(yīng)用：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。細(xì)胞膜的流動(dòng)性。最重要的用途制備單克隆抗體雜交瘤專一兩次篩選作為診斷試劑；用于治療疾病和運(yùn)載藥物1.（2013重慶卷第2題）下圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是（）A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成C．③同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群D反饋練習(xí)2.在制備X單克隆抗體的過程中，如果用a表示骨髓瘤細(xì)胞，b表示產(chǎn)生X抗體的漿細(xì)胞，c為產(chǎn)生Y抗體的漿細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞兩兩融合后，對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行了兩次篩選，其目的分別為（）A．從aa、bb、cc、ab、ac、bc中選出ab、bc；從ab、be中選出abB．從aa、bb、cc、ab、ac、bc中選出ab、bb;從ab、bb中選出bbC．從aa、bb、cc、ab、ac、bc中選出ab、ac；從ab、ac中選出abD．從aa、bb、cc、ab、ac、bc中選出ab、bc;從ab、bc中選出abC反饋練習(xí)3.由單克隆抗體研制而成的“生物導(dǎo)彈”由兩部分組成，一是“瞄準(zhǔn)裝置”，二是殺傷性“彈頭”，下列對(duì)此描述不正確的是()A.“瞄準(zhǔn)裝置”是由識(shí)別腫瘤的單克隆抗體構(gòu)成B.“彈頭”是由放射性同位素、化學(xué)藥物和毒素等物質(zhì)構(gòu)成C.“彈頭”中的藥物有選擇殺傷腫瘤細(xì)胞的功能D.“生物導(dǎo)彈”是利用細(xì)胞工程制出來的C反饋練習(xí)4.正常細(xì)胞合成DNA有兩條途徑：a通路(主通路)和b通路(旁路)。用于進(jìn)行單克隆抗體制備的骨髓瘤細(xì)胞是DNA合成的b通路缺陷型細(xì)胞，讓B淋巴細(xì)胞與這種缺陷型細(xì)胞融合，再在加入DNA合成的a通路阻斷劑(氨基嘌呤)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，這種培養(yǎng)會(huì)產(chǎn)生哪些效果(

)①促進(jìn)細(xì)胞融合②淘汰B淋巴細(xì)胞③淘汰骨髓瘤細(xì)胞④選擇雜交瘤細(xì)胞⑤淘汰骨髓瘤細(xì)胞相互融合的細(xì)胞⑥淘汰B淋巴細(xì)胞相互融合的細(xì)胞A．①②⑤B．②③④⑤⑥C．②③④ D．④⑤⑥B練習(xí)5.(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個(gè)___________的過程，該過程的進(jìn)行常用_____________或_____________誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點(diǎn)是_________________________________________。B淋巴

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇滅活病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞(