生態(tài)環(huán)境檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株管理規(guī)范

1生態(tài)環(huán)境檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株管理規(guī)范本文件規(guī)定了生態(tài)環(huán)境檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株管理的一般要求和流程。本文件適用于生態(tài)環(huán)境檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB/T27405-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測(cè)GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范SN/T2660食品微生物實(shí)驗(yàn)室菌種保藏方法3術(shù)語和定義GB/T27405-2008界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1標(biāo)準(zhǔn)菌株referencestrain至少定義到屬或種水平的菌株。按其特性進(jìn)行分類和描述，有明確的來源。[來源：GB/T27405-2008，3.10]3.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株referencestocks標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過一代轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。[來源：GB/T27405-2008，3.11]3.3儲(chǔ)備菌株stockculture標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株經(jīng)過轉(zhuǎn)接后獲得的同種菌株。3.4工作菌株workingcultures由標(biāo)準(zhǔn)菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、儲(chǔ)備菌株或4代以內(nèi)經(jīng)過轉(zhuǎn)接獲得的同種菌株，直接用于培養(yǎng)基檢驗(yàn)、人員比對(duì)、陰性及陽性對(duì)照等實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。3.5代generation將微生物接種至新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)生長一次即為一代。注：按照菌株的傳代過程，對(duì)各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼24一般要求4.1人員4.1.1技術(shù)人員應(yīng)覆蓋標(biāo)準(zhǔn)菌株管理工作流程的全部環(huán)節(jié)。4.1.2技術(shù)人員應(yīng)經(jīng)專業(yè)技能培訓(xùn)，經(jīng)能力確認(rèn)合格后方可上崗。4.1.3涉及色彩辨識(shí)的實(shí)驗(yàn)，不應(yīng)選用有顏色視覺障礙的人員。4.2場(chǎng)所與設(shè)備4.2.1應(yīng)按照檢測(cè)活動(dòng)內(nèi)容配置符合相應(yīng)生物安全等級(jí)要求的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合GB19489和GB50346的相關(guān)規(guī)定。4.2.2應(yīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)菌株的性質(zhì)配備保藏、制備、銷毀等設(shè)備。4.3安全防護(hù)4.3.1應(yīng)按照檢測(cè)活動(dòng)內(nèi)容配置符合微生物危害等級(jí)要求的生物安全防護(hù)用品，并設(shè)置安全標(biāo)識(shí)。4.3.2標(biāo)準(zhǔn)菌株的保藏和領(lǐng)用，應(yīng)實(shí)行雙人雙鎖負(fù)責(zé)制管理。4.4記錄應(yīng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理進(jìn)行記錄并歸檔留存，檔案留存期限不少于6年。5管理流程5.1流程概述管理流程包括采購、驗(yàn)收、保藏、期間核查、制備、銷毀。標(biāo)準(zhǔn)菌株管理流程按附錄B執(zhí)行。5.2采購應(yīng)從有銷售資質(zhì)的機(jī)構(gòu)獲取有明確來源的標(biāo)準(zhǔn)菌株。采購申請(qǐng)記錄應(yīng)包括菌株名稱、來源、代數(shù)、數(shù)量等內(nèi)容。5.3驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)菌株驗(yàn)收檢查內(nèi)容包括名稱、規(guī)格、數(shù)量、包裝、有效期、說明書、證書等。如需對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行存活性和純度確認(rèn)，按5.6.2.1-5.6.2.3執(zhí)行。驗(yàn)收記錄表參見附錄C中的表C.1。5.4保藏5.4.1標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)按照供應(yīng)商提供的使用說明書要求進(jìn)行保藏。5.4.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、儲(chǔ)備菌株、工作菌株的保藏方法按照SN/T2660執(zhí)行。5.4.3工作菌株保藏宜采用斜面培養(yǎng)法。5.4.4保藏和領(lǐng)用記錄表參見附錄C中的表C.2。5.5期間核查應(yīng)根據(jù)菌株類型、數(shù)量、保藏期限等，制定菌株保藏期間核查計(jì)劃，計(jì)劃應(yīng)對(duì)具體菌株、核查方法、頻次、文件記錄、結(jié)果判定等內(nèi)容進(jìn)行規(guī)定。期間核查方法包括文件核查、存活性核查、關(guān)鍵生化特性核查。期間核查記錄表參見附錄C中的表C.3。35.6制備5.6.1制備要求5.6.1.1制備過程應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行。5.6.1.2培養(yǎng)條件應(yīng)按照供應(yīng)商提供的使用說明書要求進(jìn)行。5.6.1.3培養(yǎng)物應(yīng)進(jìn)行標(biāo)識(shí)，標(biāo)識(shí)內(nèi)容應(yīng)包括名稱、菌種號(hào)、傳代日期和代數(shù)及使用類型等信息。5.6.1.4應(yīng)記錄制備信息，制備記錄表參見附錄C中的表C.4。5.6.2制備過程5.6.2.1復(fù)蘇拆開標(biāo)準(zhǔn)菌株的包裝，按照供應(yīng)商提供的使用說明書要求對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行復(fù)蘇。5.6.2.2平板分離采用非選擇性平板對(duì)復(fù)蘇后的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行分離、純化。5.6.2.3確認(rèn)對(duì)平板分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)。確認(rèn)合格后，方可進(jìn)行制備。如確認(rèn)不合格，應(yīng)及時(shí)滅菌銷毀。5.6.2.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備挑取純菌落進(jìn)行分裝保藏，即得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第2代）。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備流程按照附錄D執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株不應(yīng)作為標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。5.6.2.5儲(chǔ)備菌株制備取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗(yàn)證合格，挑取純菌落進(jìn)行分裝保藏，即得到儲(chǔ)備菌株（第3代）。儲(chǔ)備菌株制備流程按照附錄E執(zhí)行。儲(chǔ)備菌株不應(yīng)作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株或標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。5.6.2.6工作菌株制備5.6.2.6.1由標(biāo)準(zhǔn)菌株制備工作菌株（第3代）取標(biāo)準(zhǔn)菌株，在復(fù)蘇、分離確認(rèn)合格后，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進(jìn)行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第3代）。制備流程按照附錄F圖F.1執(zhí)行。工作菌株不應(yīng)作為儲(chǔ)備菌株、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株或標(biāo)準(zhǔn)菌株使用。5.6.2.6.2由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備工作菌株(第4代)取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗(yàn)證合格，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進(jìn)行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.2執(zhí)行。5.6.2.6.3由儲(chǔ)備菌株制備工作菌株(第5代)取儲(chǔ)備菌株，在非選擇性平板上轉(zhuǎn)種培養(yǎng)并驗(yàn)證合格，挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進(jìn)行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.3執(zhí)行。5.6.2.6.4由工作菌株(第3代)制備工作菌株（第4代）4取工作菌株（第3代），挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進(jìn)行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第4代）。制備流程按照附錄F圖F.4執(zhí)行。5.6.2.6.5由工作菌株(第4代)制備工作菌株（第5代）取工作菌株（第4代），挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面進(jìn)行培養(yǎng)，即得到工作菌株（第5代）。制備流程按照附錄F圖F.5執(zhí)行。5.7銷毀5.7.1銷毀工作應(yīng)由兩人共同操作，并對(duì)銷毀過程進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)督。5.7.2將需要銷毀的菌株和使用過的帶菌耗材經(jīng)121℃高壓滅菌至少30min，再放入實(shí)驗(yàn)室生物廢棄物處理桶。需要銷毀的菌株包括但不限于：a)解凍使用后的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、儲(chǔ)備菌株；b)經(jīng)確認(rèn)或驗(yàn)證不合格的菌株；c)超過保存期限的菌株；d)其他應(yīng)廢棄的菌株。5.7.3廢棄物應(yīng)按GB19489中廢物處置規(guī)定進(jìn)行處理。5.7.4銷毀記錄表參見附錄C中的表C.5。（資料性）菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系見表A.1。表A.1各代菌株的代數(shù)、使用類型、繼承關(guān)系 注：從標(biāo)準(zhǔn)菌株到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株、儲(chǔ)備菌株和工作菌株傳代培養(yǎng)次數(shù)不超過5次。采購申請(qǐng)記錄合同驗(yàn)收記錄保藏、領(lǐng)用記錄期間核查記錄制備記錄銷毀記錄采購申請(qǐng)記錄合同驗(yàn)收記錄保藏、領(lǐng)用記錄期間核查記錄制備記錄銷毀記錄（規(guī)范性）標(biāo)準(zhǔn)菌株管理流程標(biāo)準(zhǔn)菌株管理流程見圖B.1。啟動(dòng)工作計(jì)劃啟動(dòng)工作計(jì)劃采購驗(yàn)收保藏、期間核查制備銷毀工作結(jié)束工作結(jié)束圖B.1標(biāo)準(zhǔn)菌株管理流程圖7（資料性）記錄表C.1驗(yàn)收記錄表見表C.1。表C.1驗(yàn)收記錄表序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱標(biāo)準(zhǔn)菌株來源菌株編號(hào)批號(hào)采購日期驗(yàn)收日期驗(yàn)收評(píng)價(jià)驗(yàn)收人備注規(guī)格數(shù)量有效期包裝標(biāo)識(shí)說明書證書存活性純度8C.2保藏與領(lǐng)用記錄表見表C.2。表C.2保藏與領(lǐng)用記錄表9C.3期間核查記錄表見表C.3。表C.3期間核查記錄表序號(hào)菌株名稱菌株來源菌株編號(hào)批號(hào)代數(shù)及使用類型保藏日期核查日期核查結(jié)果核查人備注外觀保藏條件有效期文件資料存活性純度關(guān)鍵生化特性C.4制備記錄表見表C.4。表C.4制備記錄表C.5銷毀記錄表見表C.5。表C.5銷毀記錄表注：廢棄菌株應(yīng)標(biāo)明編號(hào)、數(shù)量。否銷毀否銷毀（規(guī)范性）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備流程標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備流程見圖D.1。標(biāo)準(zhǔn)菌株（第標(biāo)準(zhǔn)菌株（第0代）按說明書要求復(fù)蘇（第1代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對(duì)分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)符合符合是挑取純菌落，用合適的保存介質(zhì)進(jìn)行分裝保藏標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第2代）圖D.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備流程圖否符合否符合（規(guī)范性）儲(chǔ)備菌株制備流程儲(chǔ)備菌株制備流程見圖E.1。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第2代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對(duì)分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)銷毀銷毀是挑取純菌落，用合適的保存介質(zhì)進(jìn)行分裝保藏儲(chǔ)備菌株（第儲(chǔ)備菌株（第3代）圖E.1儲(chǔ)備菌株制備流程圖銷毀銷毀（規(guī)范性）工作菌株制備流程F.1標(biāo)準(zhǔn)菌株制備工作菌株流程見圖F.1。標(biāo)準(zhǔn)菌株（第標(biāo)準(zhǔn)菌株（第0代）按說明書要求復(fù)蘇（第1代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第2代）對(duì)分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)否符合是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第3代）圖F.1標(biāo)準(zhǔn)菌株制備工作菌株流程圖銷毀否銷毀否F.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備工作菌株流程見圖F.2。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株（第2代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第3代）對(duì)分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)符合符合是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第4代）圖F.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株制備工作菌株流程圖否銷毀否銷毀F.3儲(chǔ)備菌株制備工作菌株流程見圖F.3。儲(chǔ)備菌株（第儲(chǔ)備菌株（第3代）按說明書要求的培養(yǎng)條件，在非選擇性平板上分離（第4代）對(duì)分離出的菌落進(jìn)行存活性、純度確認(rèn)符合符合是挑取純菌落轉(zhuǎn)接于斜面培養(yǎng)生長工作菌株（第工作菌株（第5代）圖F.3