HPLC法測(cè)定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量

摘

要：目的：建立高效液相色譜法，用于鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量測(cè)定。方法：色譜柱為菲羅門Gemini-NXC18（4.6mm×250mm，5μm），以1%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）:甲醇=70:30為流動(dòng)相；280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)；流速1.0mL/min；柱溫40℃。結(jié)果：脫羧莫西沙星的進(jìn)樣濃度在0.2175～1.0875μg/mL（r=0.9985）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD均小于2.0%；平均回收率為102.79%，RSD為1.62%（n=9）。結(jié)論：該高效液相色譜法的準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可以用來(lái)測(cè)定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量。關(guān)鍵詞：鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液；高效液相色譜法；脫羧莫西沙星0

引言鹽酸莫西沙星化學(xué)名為1-環(huán)丙基-7-{（S,S）-2,8-重氮-二環(huán)[4.3.0]壬-8-基}-6-氟-8-甲氧-1,4-二氫-4-氧-3-喹啉羧酸鹽酸鹽，是由德國(guó)公司研制的第4代氟喹諾酮類超廣譜抗生素，它保留了第3代抗革蘭陰性菌的活性，其8-甲氧基部分還提高了抗革蘭陽(yáng)性菌的活性，特別是增加了對(duì)厭氧菌的抗菌活性，是具有抗菌活性的廣譜抗菌藥。莫西沙星的耐藥性使得對(duì)糖肽類、頭孢菌素類、青霉素類、四環(huán)素類和大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的機(jī)制不會(huì)影響莫西沙星的抗菌活性，莫西沙星與這些抗菌藥無(wú)交叉耐藥性，且至今未發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性出現(xiàn)?，F(xiàn)行版《美國(guó)藥典》中鹽酸莫西沙星的有關(guān)物質(zhì)檢查采用ODS柱，用甲醇-磷酸鹽系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，僅對(duì)雜質(zhì)A、B、C、D、E等5個(gè)已知雜質(zhì)進(jìn)行了控制；《歐洲藥典》9.0版鹽酸莫西沙星的有關(guān)物質(zhì)檢查采用的色譜柱為苯基柱，以甲醇-四丁基硫酸氫銨磷酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，同樣僅對(duì)上述5個(gè)已知雜質(zhì)進(jìn)行了控制；鹽酸莫西沙星國(guó)內(nèi)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)（YBH01912013）中的有關(guān)物質(zhì)檢查也采用了《歐洲藥典》9.0版鹽酸莫西沙星有關(guān)物質(zhì)檢查的方法，對(duì)上述5個(gè)雜質(zhì)以及雜質(zhì)F進(jìn)行了控制?，F(xiàn)根據(jù)鹽酸莫西沙星的合成工藝，對(duì)雜質(zhì)譜進(jìn)行解析，除了對(duì)可能存在的上述6個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行研究外，新增了對(duì)降解雜質(zhì)脫羧莫西沙星的研究，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示，提高了鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用上述鹽酸莫西沙星有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法及多篇文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)試，均不能有效測(cè)定脫羧莫西沙星含量。最終，通過(guò)參考鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)（JX20030036），對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中的有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行了優(yōu)化，從而建立了鹽酸莫西沙星中脫羧莫西沙星的含量測(cè)定方法，并經(jīng)過(guò)詳細(xì)的方法學(xué)驗(yàn)證，證明了所建立的方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可以用來(lái)測(cè)定鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液中脫羧莫西沙星的含量。

圖1

鹽酸莫西沙星及脫羧莫西沙星化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1

儀器與試藥1.1

儀器LC-20A型高效液相色譜儀；CPA225D型電子天平；FE20型pH計(jì)。1.2

試藥雜質(zhì)A對(duì)照品（批號(hào)：XM56-1023，純度99.90%）、雜質(zhì)C對(duì)照品（批號(hào)：XM56-6738，純度99.13%）、雜質(zhì)F對(duì)照品（批號(hào)：XM56-5520，純度99.88%），均來(lái)自HI-CHEMICAL；雜質(zhì)B對(duì)照品（批號(hào)：17-M00022-05，純度99.2%）、雜質(zhì)D對(duì)照品（批號(hào)：16-M00024-02，純度99.3%）、雜質(zhì)E對(duì)照品（批號(hào)：15-M00025-12，純度97.5%），均來(lái)自RXA；脫羧莫西沙星對(duì)照品（批號(hào)：1672226M-HB-08，純度99.1%）；鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（批號(hào)：17092901、17092902、17092903）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2

方法與結(jié)果2.1

色譜條件與系統(tǒng)適用性色譜柱：菲羅門Gemini-NXC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：1%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.5）:甲醇=70:30；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)以脫羧莫西沙星峰計(jì)應(yīng)不低于2000。2.2

溶液的制備（1）溶劑：取無(wú)水亞硫酸鈉約0.050g，加水約500mL使其溶解，加入磷酸1mL，用水稀釋至1000

mL。（2）空白輔料溶液：按鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液處方配制不含鹽酸莫西沙星的溶液，滅菌，作為空白輔料；再用溶劑稀釋兩倍，作為空白輔料溶液。（3）對(duì)照品溶液：分別取雜質(zhì)A、B、C、D、E、F與脫羧莫西沙星對(duì)照品適量，精密稱定，用溶劑制成每1mL中含各雜質(zhì)16μg的溶液，作為對(duì)照品貯備液；從中精密量取1mL，置于20mL容量瓶中，用溶劑定容至刻度，搖勻，即得。（4）系統(tǒng)適用性溶液：精密量取本品10mL與對(duì)照品貯備液1mL，置于20mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。（5）供試品溶液：精密量取本品10mL，置于20mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。2.3

專屬性考察分別精密量取空白輔料溶液、對(duì)照品溶液、系統(tǒng)適用性溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖2所示。空白輔料不干擾脫羧莫西沙星的含量測(cè)定，脫羧莫西沙星峰與相鄰峰分離度良好。結(jié)果表明：所建立的高效液相色譜法的專屬性良好。圖2

專屬性試驗(yàn)液相色譜圖1—脫羧莫西沙星

2—雜質(zhì)F

3—鹽酸莫西沙星

4—雜質(zhì)A

5—雜質(zhì)B

6—雜質(zhì)C

7—雜質(zhì)D

8—雜質(zhì)E2.4

強(qiáng)制降解試驗(yàn)取鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液（批號(hào)：17092901）適量，分別考察在酸、堿、氧化、高溫、光照條件下樣品的質(zhì)量穩(wěn)定情況，具體條件如表1所示。表1

強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件試驗(yàn)結(jié)果表明：空白溶液不干擾脫羧莫西沙星含量的測(cè)定。鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液在酸、堿、高溫條件下，脫羧莫西沙星含量均有所升高；在氧化條件下，脫羧莫西沙星含量有所下降；在光照條件下，脫羧莫西沙星含量幾乎不變。2.5

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取系統(tǒng)適用性溶液，進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。從色譜圖中可以看出，脫羧莫西沙星峰與相鄰峰之間的分離度及其理論板數(shù)、拖尾因子均符合要求。計(jì)算得到脫羧莫西沙星的峰面積RSD為0.68%。結(jié)果表明：所建立的方法系統(tǒng)適用性良好。2.6

檢測(cè)限和定量限精密稱取脫羧莫西沙星對(duì)照品適量，用溶劑溶解并依次稀釋，分別取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。檢測(cè)限信噪比S/N=3，定量限信噪比S/N=10。脫羧莫西沙星的檢測(cè)限為0.0652μg/mL，定量限為0.2175μg/mL。2.7

線性關(guān)系考察精密稱取脫羧莫西沙星對(duì)照品適量，用溶劑溶解并分別制成定量限濃度不低于150%限度范圍內(nèi)的系列線性溶液。分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程Y=42913X-1518.3（r=0.9985）。結(jié)果表明：脫羧莫西沙星在0.2175～1.0875μg/mL進(jìn)樣濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。2.8

重復(fù)性試驗(yàn)按擬定的方法配制對(duì)照品溶液，再平行配制6份系統(tǒng)適用性溶液（作為重復(fù)性試驗(yàn)供試品溶液1～6）。分別取上述溶液10μL，依法進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算脫羧莫西沙星的含量。6次測(cè)量結(jié)果顯示：脫羧莫西沙星的含量平均值為0.11%，6次結(jié)果的RSD為0.01%。結(jié)果表明：所建立的方法重復(fù)性良好。2.9

加樣回收率試驗(yàn)取“重復(fù)性試驗(yàn)”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，再配制含脫羧莫西沙星限度的80%、100%、120%3個(gè)不同濃度的供試品溶液各3份。分別取上述溶液10μL，依法進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算脫羧莫西沙星的回收率結(jié)果，如表2所示。表2

加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表明：平均回收率為102.79%，RSD為1.62%。2.10

耐用性考察2.10.1

溶液穩(wěn)定性按擬定的方法配制對(duì)照品溶液及系統(tǒng)適用性溶液（作為溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)的供試品溶液），在室溫下放置24h，分別于0h、3h、6h、9h、12h、18h、24h精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明：對(duì)照品溶液與供試品溶液在室溫條件下放置24h，脫羧莫西沙星峰面積的RSD分別為1.42%、0.79%，表明溶液穩(wěn)定性良好。2.10.2

色譜條件參數(shù)變化將色譜條件參數(shù)柱溫（±3℃）、流速（±0.1mL/min）、流動(dòng)相比例（±2%）、流動(dòng)相pH（±0.2）、色譜柱（不同批次）等進(jìn)行微小的變動(dòng)，以此評(píng)估其對(duì)脫羧莫西沙星含量測(cè)定結(jié)果的影響程度。結(jié)果表明：當(dāng)參數(shù)發(fā)生微小變動(dòng)時(shí)，脫羧莫西沙星的含量測(cè)定結(jié)果幾乎不受影響，表明所建立的方法耐用性較好。2.11

樣品測(cè)定取中試規(guī)模的鹽酸莫西沙星氯化鈉注射液樣品3批（批號(hào)：17092901、17092902、17092903），依法測(cè)定脫羧莫西沙星含量，結(jié)果如表3所示。表3

樣品測(cè)定脫羧莫西沙星含量結(jié)果

3

結(jié)