實驗一上 普通光學(xué)顯微鏡下的細(xì)胞和細(xì)胞器

實驗一普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡下的細(xì)胞和細(xì)胞器一實驗?zāi)康?熟悉普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的主要結(jié)構(gòu)和基本性能。2觀察各種細(xì)胞和細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)特點。

二實驗原理普通光學(xué)顯微鏡從構(gòu)造上可分為光學(xué)、機械和電子三大系統(tǒng)。由物鏡、目鏡、聚光鏡、光源、載物臺和支架等組成。利用光線照明，標(biāo)本中各點依其光吸收的不同而在明亮的背景中成像。顯微鏡的能力是質(zhì)量和性能的標(biāo)志。能力包括分辨率、放大率、焦點深度和視場寬度等，其中最重要的是分辨率。普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)分辨率是指區(qū)分開兩個質(zhì)點間的最小距離。數(shù)值孔徑（NA，鏡口率）：光線投射到物鏡上的最大開口角度一半的正弦乘上標(biāo)本與物鏡間介質(zhì)的折射率的乘積。

NA=n?sinα/2n為介質(zhì)的折射率，α為鏡口角。分辨率：能分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力。D=0.61λ/NA

λ為波長。數(shù)值孔徑越高，分辨率越高。放大率：最終成像大小與原物體大小的比值。總放大倍數(shù)＝物鏡的放大倍數(shù)×目鏡的放大倍數(shù)物鏡的鏡口角=AOB光學(xué)顯微鏡成像原理機械部分光學(xué)部分普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)機械部分主要結(jié)構(gòu)鏡座、鏡柱粗調(diào)節(jié)螺旋和細(xì)調(diào)節(jié)螺旋載物臺、推進(jìn)器和玻片夾物鏡轉(zhuǎn)換器光學(xué)部分主要構(gòu)件光學(xué)部分包括照明系統(tǒng)和成像系統(tǒng)光學(xué)部分主要構(gòu)件物鏡低倍鏡（1×~6×，常用的4×、10×）高倍鏡（25×~63×，常用的40×）油鏡（90×、95×、100×

）目鏡（5×、6×、8×、10×

、12×、15×）物鏡側(cè)面符號的含義10/0.30表示放大10倍，數(shù)值口徑為0.3040/0.65表示放大40倍，數(shù)值口徑為0.65100/1.25oil表示放大100倍，數(shù)值口徑為1.25，為油鏡160/0.17表示鏡筒長度和所需蓋玻片的厚度（mm）WD表示工作距離不同物鏡的數(shù)值孔徑與工作距離（10倍目鏡）物鏡放大倍數(shù)（×）總放大倍數(shù)（×）數(shù)值口徑工作距離（mm）4400.1025101000.255.6404000.650.610010001.250.14光學(xué)顯微鏡成像原理

光學(xué)顯微鏡是利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像的。A″B″和眼睛的距離為顯微鏡的明視距離，標(biāo)本AB的向經(jīng)過物鏡（L1）后到A′B′處稱謂一個放大倒立的實像，F(xiàn)1為L1的后焦點，當(dāng)光線傳到目鏡（L2）時，在A″B″處A′B′被放大成一個直立的虛像，然后傳遞到視網(wǎng)膜上，標(biāo)本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虛像，其與原樣品的方向相反。觀察的物體AB觀察點目鏡L2中間所成的實像A′B′物鏡L1放大的虛像A″B″光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程一、實驗時要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應(yīng)距桌沿5cm左右。二、打開光源開關(guān)，調(diào)節(jié)光強到合適大小。三、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭正對載物臺上的通光孔。先把鏡頭調(diào)節(jié)至距載物臺1～2cm左右處，然后用左眼注視目鏡內(nèi)，接著調(diào)節(jié)聚光器的高度，把孔徑光闌調(diào)至最大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內(nèi)，這時視野內(nèi)呈明亮的狀態(tài)。四、將所要觀察的玻片放在載物臺上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標(biāo)本夾夾好載玻片。光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程五、先用低倍鏡觀察（物鏡4X、10X、目鏡10x）。觀察之前，先轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內(nèi)，同時右眼不要閉合（要養(yǎng)成睜開雙眼用顯微鏡進(jìn)行觀察的習(xí)慣，以便在觀察的同時能用右眼看著繪圖），并轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在視野內(nèi)看到的物像不符合實驗要求（物像偏離視野），可慢慢調(diào)節(jié)載物臺移動手柄。調(diào)節(jié)時應(yīng)注意玻片移動的方向與視野中看到的物像移動的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以調(diào)節(jié)微動調(diào)焦手輪，直至物像清晰為止。光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程七、如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時，視野中的物像范圍縮小了很多）。八、在轉(zhuǎn)換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時，視野要稍變暗一些，所以需要調(diào)節(jié)光線強弱）。九、觀察完畢，應(yīng)先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調(diào)至最大，再將載物臺緩緩落下，并檢查零件有無損傷（特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈），檢查處理完畢后即可裝箱。油鏡的使用

100×物鏡是油浸物鏡。使用前必需在鏡頭與蓋玻片間加浸油。

油鏡的透鏡很小，光線通過玻片與油鏡頭之間的空氣時，因介質(zhì)密度不同，發(fā)生折射或全反射，使射入透鏡的光線減少，物象顯現(xiàn)不清。若在油鏡與載玻片之間加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），則可減少光線折射，使進(jìn)入透鏡的光線增多，視野亮度增強，提高分辨率，使物象明亮清晰。

在油鏡觀察結(jié)束后，切記將鏡頭和其他沾有油污的部件清擦凈。光學(xué)顯微鏡的維護(hù)一、必須熟練掌握并嚴(yán)格執(zhí)行使用規(guī)程。二、取送顯微鏡時一定要一手握住彎臂，另一手托住底座。顯微鏡不能傾斜，以免目鏡從鏡筒上端滑出。取送顯微鏡時要輕拿輕放。三、觀察時，不能隨便移動顯微鏡的位置。四、凡是顯微鏡的光學(xué)部分，只能用特殊的擦鏡頭紙擦拭，不能亂用他物擦拭，更不能用手指觸摸透鏡，以免汗液玷污透鏡。五、保持顯微鏡的干燥、清潔，避免灰塵、水及化學(xué)試劑的玷污。六、轉(zhuǎn)換物鏡鏡頭時，不要搬動物鏡鏡頭，只能轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器。光學(xué)顯微鏡的維護(hù)七、切勿隨意轉(zhuǎn)動調(diào)焦手輪。使用微動調(diào)焦旋鈕時，用力要輕，轉(zhuǎn)動要慢，轉(zhuǎn)不動時不要硬轉(zhuǎn)。八、不得任意拆卸顯微鏡上的零件，嚴(yán)禁隨意拆卸物鏡鏡頭，以免損傷轉(zhuǎn)換器螺口，或螺口松動后使低高倍物鏡轉(zhuǎn)換時不齊焦。九、使用高倍物鏡時，勿用粗動調(diào)焦手輪調(diào)節(jié)焦距，以免移動距離過大，損傷物鏡和玻片。十、用畢送還前，必須檢查物鏡鏡頭上是否沾有水或試劑，如有則要擦拭干凈，并且要把載物臺擦拭干凈。三實驗儀器、材料和試劑1儀器、用具：普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡等2材料：各種組織、細(xì)胞和細(xì)胞器的裝片四實驗內(nèi)容與方法1普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造2普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的性能和質(zhì)量3普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡的使用方法4各種組織、細(xì)胞和細(xì)胞器的觀察和比較動物細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察雞血細(xì)胞動物神經(jīng)細(xì)胞動物平滑肌細(xì)胞雞血細(xì)胞

重點在高倍鏡下和油鏡下觀察紅細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和血栓細(xì)胞（血小板）的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點。

紅細(xì)胞——為卵圓形細(xì)胞，有胞核，呈橢圓形，內(nèi)有染色質(zhì)塊，胞質(zhì)染成淡紅色。

嗜中性白細(xì)胞——由于顆粒具有多種嗜色性，故又稱為異嗜性粒細(xì)胞，細(xì)胞較大，胞質(zhì)內(nèi)含棒狀或紡錘形的紅色顆粒。胞質(zhì)色淡，胞核分葉情況因成熟程度而有不同，有的不分葉，有的分葉，染成淡紫色。

血栓細(xì)胞——是雞血液內(nèi)最小的細(xì)胞，成紡錘形。兩端鈍圓，常集聚成群，胞質(zhì)染成淺藍(lán)色，核呈卵圓形。注意血栓細(xì)胞與紅細(xì)胞的區(qū)別，主要是體積較小，核較大，染成玫瑰紫色。雞血細(xì)胞雞血細(xì)胞低倍鏡下觀察雞血細(xì)胞高倍鏡下觀察雞血細(xì)胞油鏡下觀察血細(xì)胞涂片(示核形態(tài)差異)

正常血象1.淋巴細(xì)胞2.中性桿狀核粒細(xì)胞3.中性分葉核粒細(xì)胞動物神經(jīng)細(xì)胞脊髓涂片

先用低倍鏡觀察,再用高倍鏡和油鏡觀察脊髓涂片中的神經(jīng)元（即神經(jīng)細(xì)胞），可找到染色深且具有多個突起的脊髓前角運動神經(jīng)元。在其胞體內(nèi)有染色較淺的圓形的細(xì)胞核，核的中央有一個染成深色的核仁。神經(jīng)細(xì)胞動物平滑肌細(xì)胞分離片

先用低倍鏡再用高倍鏡和油鏡下觀察平滑肌分離片，可見染成紫紅色呈紡錘形的肌細(xì)胞，細(xì)胞核為橢圓形，位于細(xì)胞的中央，著色很深，在細(xì)胞質(zhì)中有淡紅的肌原纖維。略旋動細(xì)調(diào)焦螺旋，仔細(xì)觀察。平滑肌與組織塊橫紋肌細(xì)胞（示多核現(xiàn)象）細(xì)胞器觀察1.線粒體的觀察線粒體有雙層膜結(jié)構(gòu)，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等陰離子基團(tuán)，含陽離子的鐵蘇木精易與其結(jié)合，使線粒體顯示蘭色反應(yīng)。觀察方法1）低倍鏡觀察：可見許多被染成深蘭色的細(xì)胞，選擇顏色清晰，密集程度較低的區(qū)域；2）轉(zhuǎn)換高倍鏡：細(xì)胞核為1～2圓形的不著色的區(qū)域（有深蘭色的核仁），核周圍分布有許多深蘭色顆粒或桿狀小體，即線粒體。

（示線粒體）線粒體油鏡下觀察到的線粒體（深藍(lán)色顆粒狀或桿狀）線粒體（紅色）2.高爾基復(fù)合體的觀察

高爾基復(fù)合體具有還原能力，與硝酸銀作用后，使硝酸銀還原，并呈現(xiàn)棕黑色沉淀反應(yīng)。因而可顯示高爾基復(fù)合體的形態(tài)和位置。觀察方法1）低倍鏡觀察：尋找圓形或橢圓形的被染成黃色或淡黃色的細(xì)胞；2）轉(zhuǎn)換高倍鏡：中央透亮區(qū)為核所在位置，核周圍棕褐色扭曲呈線狀、顆粒狀結(jié)構(gòu)即為高爾基復(fù)合體。棕褐色或黑褐色、扭曲線狀或顆粒狀（低倍鏡）高爾基體棕褐色或黑褐色、扭曲線狀或顆粒狀（高倍鏡）高爾基體（綠色）肝細(xì)胞石蠟切片（示多核和多核仁）蛙卵巢細(xì)胞馬蛔蟲卵巢石蠟切片（示中心體）五作業(yè)

繪出動、