QBT 2525-2001 食品添加劑 α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶

分類號X41備案號9489-2001中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中國輕工業(yè)聯(lián)合會發(fā)布1本標(biāo)準(zhǔn)適用于由黑曲霉(Aspergillusniger)發(fā)酵GB/T8449-1987食品添加劑GB/T8450-1987食品添加劑GB/T8451-1987食品添加劑中重GB4789.3-1994食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定GB4789.4-1994食品衛(wèi)生微生物學(xué)GB4789.6-1994食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗3.2理化指標(biāo)微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。中國輕工業(yè)聯(lián)合會2001-11-15批準(zhǔn)2002-05-01實施 2項目≥≤≤3≤5≤項目≤≤不得檢出不得檢出本試驗所用的試劑和水，在沒有其他特殊要求時，均使用分析純試劑和蒸餾水或相當(dāng)用α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶作用底物a-甲基-D-葡萄糖氧化酶、過氧化酶的4-氨基安替比林(4-Aminoantipyrin)和酚試劑進(jìn)行顯色反應(yīng)來H?O?+4-氨基安替比林+酚一過氧化物酶→苯醌a)0.1mo/L乙酸溶液：將乙酸(CH?COOH)6.0g溶于水，稀釋至1000mL:b)0.1molL乙酸鈉溶液：將乙酸鈉(CH?COONa)8.20g溶于水，稀釋至1000mL;c)0.02moVL乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0)——將0.1moVL乙酸溶液20mL溶于水，稀釋至100mL(試劑A);——將0.1molL乙酸鈉溶液20mL溶于水，稀釋至100—將A和B混合，調(diào)pH至5.0。d)Tris-磷酸緩沖液(pH7.2):將Tris(羥甲基)氨基甲烷(H?NC(CH?OH),]36.3g 3和二水磷酸二氫鈉(NaH?PO?·2H?O)50.0g溶于900mL水，用2molL鹽酸溶液調(diào)pH至7.2,用水稀釋至1000mL;e)0.4%4-氨基安替比林溶液：將4-氨基安替比林(C?HlgON?)200mg溶于水，稀f)5%苯酚溶液：將苯酚(C?H?OH)5g于60℃溶于50mL水，將溶液冷卻至室溫，用水稀釋至100mL;糖氧化酶(5mg葡萄糖氧化酶“Amano”2)550單位和過氧化物酶(0.76mg,165U/mg的過氧化物酶“Amano”2)125單位，再加入0.4%4-氨基安替比林溶液1mL和5%苯酚溶液1.4mL,用Tris-磷酸緩沖液(pH7.2)稀釋至50mL(隨配隨用);h)底物溶液：將α-甲基葡萄糖(CHO?)2.0g溶解于水50(5℃~15℃可穩(wěn)定二星期)。用酶制劑配制酶溶液使其0.5mL的Aw-A?介于0.15和0.32之間：吸取酶制劑1mL,示例：α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶L“Amano”:[n=300]稀釋1mL—→300mL。吸取底物溶液(4.1.2h)1mL和0.02molL乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0加入試管(15mm×150mm)內(nèi)，在(40±0.5)℃的恒溫水浴箱中保溫10min。加入樣品稀釋酶液(4.1.3.1)0.5mL,混勻，于(40±0.5)℃的恒溫水浴箱中準(zhǔn)確保溫60min后，將試管轉(zhuǎn)移至沸水浴中加熱5min,然后用流水快速冷卻。冷卻后，吸此溶液0.1mL到試的恒溫水浴中，保溫20min,測定500mm處的吸光度Ao?？瞻讓φ眨何?.02molL乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0)(4.1.2c)1mL和樣品稀釋酶然后用流水快速冷卻。冷卻后，加入底物溶液(4.1.2h)空試管(15mm×150mm)內(nèi)，加入4-氨基安替比林-苯酚顯色劑(4.1.2g)3mL,混勻。將此試管放入(40±0.5)℃的恒溫水浴中，保溫20min,測定500mm處的吸光度A。精確稱取105℃下干燥6h的葡萄糖(C?H?O?)1,000g,溶于100mL水中，分別取1mL,2mL,3mL,4mL,5mL,用水定容至100mL(每1mL該溶液分別含有100μg,200μg,分別吸取以上葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.1mL和4-氨基安替比林-苯酚顯色劑(4.1.2g)3mL,加入試管(15mm×150mm)內(nèi)，混勻。將這些試管放入(40±0.5)℃的恒溫水浴箱中，保溫20min,測定波長500mm處的吸光度Asuo,Agan,Asw,Asa,Aso。在此試驗條件下，在反應(yīng)混合物2.5mL中，60min產(chǎn)生1μg葡萄糖所需的酶量定義為4 (2)5 6從發(fā)酵罐中取樣，取樣前啟動攪拌裝置，攪拌液體酶至少12h,用溫水清洗取樣罐中放出酶液100mL以沖洗取樣閥，再放出酶液80mL于玻璃瓶中，放入冰箱以備作理化后用碘液清洗取樣閥，從罐中放出酶液100mL以沖洗掉取樣閥的碘液，再放出酶液80mL5.4產(chǎn)品α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶活力、糖化酶活力、pH、微生物指標(biāo)為必檢項目。砷、鉛和重5.5當(dāng)供需雙方對產(chǎn)品質(zhì)量發(fā)生異議需要仲裁時，仲裁機(jī)構(gòu)由雙方協(xié)商選批號、生產(chǎn)日期、保