單克隆抗體(用)

專題2細(xì)胞工程動物細(xì)胞融合與單克隆抗體學(xué)習(xí)目標(biāo)1.通過閱讀課文、圖片，能說出動物細(xì)胞融合的原理、方法、過程、意義2.通過回憶抗體的產(chǎn)生過程，能理解單克隆抗體的概念3.通過小組合作學(xué)習(xí)，教師提供的資料分析自主構(gòu)建單克隆抗體的制備過程4.通過閱讀課本和資料，能說出單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用一、動物細(xì)胞融合活動一：閱讀課本P52思考與討論：1.誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法？2.動物細(xì)胞融合體現(xiàn)了細(xì)胞膜的什么特性？3.為什么滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑？（參考生物技術(shù)資料卡）4.不滅活的病毒能作為誘導(dǎo)劑嗎？5.動物細(xì)胞融合的結(jié)果是什么？6.融合后一定是雜交細(xì)胞嗎？7.雜交細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？8.動物細(xì)胞融合的意義？最大的應(yīng)用？細(xì)胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞1.誘導(dǎo)的方法？6.融合后細(xì)胞的類型？7.AB雜交細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.1動物細(xì)胞融合過程2.原理？ABA細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1.2動物細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞動物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個或多個細(xì)胞融合形成一個單核細(xì)胞的過程。主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株主要用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合

細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物體細(xì)胞雜交與動物細(xì)胞融合的比較1.3動物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能最主要用途：制造單克隆抗體強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)B細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。溫故知新1.抗體是什么？2.抗體如何產(chǎn)生？3.抗體主要分布在哪里？能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。4.如果一個農(nóng)夫被毒蛇咬了，如何獲得相應(yīng)的抗體來治療？抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復(fù)注射從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！2.1單克隆抗體的定義：克隆單個B淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

單：一個B淋巴細(xì)胞克?。涸摷?xì)胞大量增殖為相同的細(xì)胞群抗體：該細(xì)胞群產(chǎn)生的特異性抗體。二、單克隆抗體一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能的產(chǎn)生專一抗體1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實驗活動二：閱讀課本P53-54思考與討論:1.為什么要對小鼠進(jìn)行注射特定的抗原？2.選擇了哪兩種細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合？3.為什么選這兩種細(xì)胞？4.細(xì)胞融合后獲得幾種類型的融合細(xì)胞？5.有幾種雜交瘤細(xì)胞？6.兩次篩選的目的？7.如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.2單克隆抗體的制備過程用抗原免疫小鼠骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種細(xì)胞獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞產(chǎn)生專一抗體無限增殖BB

、B瘤、瘤瘤

（B、瘤）由于培養(yǎng)基中缺乏相應(yīng)的營養(yǎng)物，骨髓瘤細(xì)胞死亡B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)幾天后死亡雜交瘤細(xì)胞置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。多孔細(xì)胞培養(yǎng)板陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng)用培養(yǎng)液稀釋（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)由單個雜交瘤細(xì)胞通過克隆，所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。單克隆抗體活動三、用以下文字和箭頭來構(gòu)建單克隆抗體的制備過程已免疫的B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、BB細(xì)胞，B瘤細(xì)胞，瘤瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞、體外培養(yǎng)、體內(nèi)培養(yǎng)、單克隆抗體、融合、篩選你學(xué)會了嗎？過程：B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合B-B細(xì)胞B-瘤細(xì)胞瘤-瘤細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞（B-瘤細(xì)胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體2.3單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90％以上?！吧飳?dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物

單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法

－－滅活的病毒一個新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備本節(jié)小結(jié)重點(diǎn)特點(diǎn)：既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體1.動物細(xì)胞融合最常用的誘導(dǎo)方法是（）A.離心

B.滅活的病毒C.電刺激

D.振動2.動物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種

D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞BB課堂評價評價方向：學(xué)習(xí)目標(biāo)1動物細(xì)胞融合的方法、意義3.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的（）B淋巴細(xì)胞

B．T淋巴細(xì)胞C．骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞課堂評價D評價方向：學(xué)習(xí)目標(biāo)2單克隆抗體的概念4.科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞A課堂評價評價方向：學(xué)習(xí)目標(biāo)3單克隆抗體制備的過程課堂評價5．下列關(guān)于單克隆抗體的敘述，錯誤的是A.特異性強(qiáng)、靈敏度高

B.單克隆抗體就是“生物導(dǎo)彈”C.單克隆抗體可用于疾病診斷和治療

D.生產(chǎn)單克隆抗體需要利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

B評價方向：學(xué)習(xí)目標(biāo)4單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與應(yīng)用謝謝因為每一種B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生一種抗體，人體有幾百萬個B淋巴細(xì)胞，也就是可以產(chǎn)生幾百萬中抗體。雖然你注射了某種抗原，但是產(chǎn)生對應(yīng)的抗體也只有其中的一個B淋巴細(xì)胞。所以我們用傳統(tǒng)方法從動物血清里面提取的抗體往往特異性差，純度低。6、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少1個淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細(xì)胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在_________________的誘導(dǎo)下融合。③將誘導(dǎo)后產(chǎn)生的多種細(xì)胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞_____________的能力，又具有________________的本領(lǐng)。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細(xì)胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。⑥將陽性細(xì)胞進(jìn)行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體?；瘜W(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細(xì)胞制備的，其化學(xué)本質(zhì)是___________，應(yīng)用于人體，會作為

產(chǎn)生

，解決這個問題的方法是_____________________________。大量生產(chǎn)選①，小規(guī)模生產(chǎn)選②效應(yīng)B蛋白質(zhì)異物免疫反應(yīng)采用人的效應(yīng)B細(xì)胞制備15、右圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌抗體的實驗方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？

。原因是

______________________________________________。

（2）圖中②為

過程，常用

作為誘導(dǎo)劑。該