GB 29695-2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測(cè)定 高效液相色譜法

G中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB

—2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測(cè)定高效液相色譜法

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2013-09-16

發(fā)布 2014-01-01

實(shí)施中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部

發(fā)布中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)目 次目 次

.........................................................................

I前 言

........................................................................

II水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測(cè)定

高效液相色譜法

.........................

１1 范圍.......................................................................

１2 規(guī)范性引用文件.............................................................

１3

.......................................................................

１4 試劑與材料

.................................................................

１5

.......................................................................

２6 試料的制備與保存

...........................................................

２6.1

試料的制備.................................................................

２6.2

試料的保存.................................................................

３7 測(cè)定步驟...................................................................

３7.1

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

.............................................................

３7.2

.......................................................................

３7.2

.......................................................................

３7.3 衍生化

...................................................................

３7.4 測(cè)定

.....................................................................

３7.5 空白實(shí)驗(yàn)

.................................................................

４8 結(jié)果計(jì)算...................................................................

４9 方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度

...............................................

５9.1

靈敏度.....................................................................

５9.2

準(zhǔn)確度.....................................................................

５9.3 精密度

...................................................................

５附錄

A

........................................................................

６前 言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄

A

為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)系國(guó)內(nèi)首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。II水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素多殘留的測(cè)定高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中阿維菌素和伊維菌素殘留量的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于魚(yú)的可食性組織中阿維菌素和伊維菌素殘留量的檢測(cè)。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T

1.1-2000

標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則GB/T

6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理N-甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化，高效液相色譜-熒光法測(cè)定，外標(biāo)法定量。4 試劑與材料以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純?cè)噭?；水為符合GB/T

6682規(guī)定的一級(jí)水。4.1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：B含量≥94伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：B含量≥92％。4.2 乙腈：色譜純。4.3 甲醇：色譜純。4.4 正己烷4.5 三氟乙酸酐4.6 N-甲基咪唑4.7 冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。4.8 無(wú)水硫酸鈉：4

h，干燥器中冷卻備用。4.9 堿性氧化鋁固相萃取柱：1

g/3

mL，或相當(dāng)者。4.10

衍生化試劑A：取N-甲基咪唑1

、乙腈1

mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。4.11

衍生化試劑B：取三氟乙酸酐1

、乙腈2

mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。4.12 0.4%乙酸溶液：取冰乙酸0.4

，用水溶解并稀釋至

mL。4.13

100

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取阿維菌素和伊維菌素標(biāo)準(zhǔn)品各10

，于100

mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為

μg/mL的阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。℃以下保存，有效期6個(gè)月。4.14

10

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：精密量取

μg/mL阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液10

，于100

mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10

μ阿維菌素和伊維菌素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。2～8℃保存，有效期3個(gè)月。5 儀器5.1 高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。5.2分析天平：

01

g。5.3 天平：0.01

g。5.4 旋渦混合器5.5 超聲波清洗器5.6 離心機(jī)5.7氮吹儀5.8 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀5.9 固相萃取裝置5.10

具塞玻璃離心管：5

mL。5.11

無(wú)水硫酸鈉柱：玻璃層析柱（

mm，2號(hào)砂芯）中裝填5

g無(wú)水硫酸鈉。5.12

茄形瓶：

mL。5.13

具塞聚丙烯離心管：50

mL。5.14

濾膜：0.45

μm。6 試料的制備與保存6.1

試料的制備取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)?！【|(zhì)后的供試樣品，作為供試試料?！【|(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。——取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，作為空白添加試料。6.2

試料的保存

℃以下保存。7 測(cè)定步驟7.1

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取

1

μg/mL

0.1、0.2、0.5、1

和

2

μg/mL

的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取

0.1

于

5

離心管中，于

45～55

℃水浴氮?dú)獯蹈桑囱苌襟E處理。供高效液相色譜測(cè)定。以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。7.2

5±0.05）g

50

mL

15

1

30

，4

000

離心

5

mL

mL次，合并兩次提取液。在提取液中加正己烷

，充分渦旋混合

1

，4

000

離心

5

，棄上層正己烷層。提取液中再加正己烷

10

，重復(fù)提取一次，棄正己烷層，備用。7.2

10

mL

10

液于茄形瓶中，于

～℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。用乙腈

3

mL

分

2

次溶解殘余物，并轉(zhuǎn)至

5

具塞玻璃離心管中，45～55℃水浴氮?dú)獯蹈伞?.3

衍生化于上述

5

離心管中加衍生化試劑

A100

μL

30

s

B

μL

30

s

15

μL

30

s供高效液相色譜測(cè)定。7.4

測(cè)定7.4.1

色譜條件色譜柱：C（

mm×4.6

mm，粒徑

5

μm），或相當(dāng)者；時(shí)間甲醇%乙腈%0.4%%039556133955615455502539556流速：1.5

；進(jìn)樣量：20

μL；柱溫：35

℃；檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)

nm，發(fā)射波長(zhǎng)475

nm。洗脫梯度見(jiàn)表1：表1

洗脫梯度表表1

洗脫梯度表取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中阿維菌素和伊維菌素響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。在上述色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白添加試樣溶液的高效液相色譜圖見(jiàn)附錄A。7.5

空白實(shí)驗(yàn)除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。8 結(jié)果計(jì)算試料中阿維菌素或伊維菌素的殘留量（μg/kgX

CVm式中：X

――

供試試料中相應(yīng)的阿維菌素或伊維菌素殘留量，μg/kg；C

――

試樣溶液中相應(yīng)的阿維菌素或伊維菌素的濃度，；V

——試樣溶液總體積，mL；m—