GBT 42629.3-2023 國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程 第3部分：海洋生物調(diào)查（正式版）

國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程第3部分：海洋生物調(diào)查IGB/T42629.3—2023 V l2規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14一般規(guī)定 24.1技術(shù)設(shè)計(jì) 24.2調(diào)查要求 24.3調(diào)查與分析儀器設(shè)備 34.4樣品采集 44.5樣品分析 44.6資料整理及報(bào)告編寫 4 45.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 45.2水體葉綠素a萃取熒光法測(cè)定 55.3水體葉綠素a粒度分級(jí)測(cè)定 65.4沉積物葉綠素a測(cè)定 66初級(jí)生產(chǎn)力 86.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 86.2測(cè)定方法 86.3初級(jí)生產(chǎn)力粒度分級(jí)測(cè)定 7微生物 7.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 7.2樣品采集 7.3樣品分析 7.4資料整理 8微微型光合浮游生物 8.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 8.2樣品采集 8.3樣品分析 8.4資料整理 9.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 Ⅱ9.2樣品采集 9.3樣品分析 9.4資料整理 10.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 10.2樣品采集 10.3樣品分析 10.4資料整理 11魚類浮游生物 11.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 11.2樣品采集 11.3樣品分析 11.4資料整理 12巨型底棲動(dòng)物 12.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 12.2樣品(資料)采集 12.3樣品(資料)分析 12.4資料整理 13大型底棲動(dòng)物 13.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 13.2樣品采集 13.3樣品分析 13.4資料整理 14小型底棲后生動(dòng)物 14.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 14.2樣品采集 14.3樣品分析 14.4資料整理 15有孔蟲 15.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 15.2樣品采集與保存 15.3樣品分析 15.4資料整理 16結(jié)核動(dòng)物 16.1技術(shù)要求和調(diào)查要素 16.2樣品采集 16.3樣品分析 Ⅲ16.4資料整理 17底棲魚類與食腐動(dòng)物 17.1調(diào)查要素與技術(shù)要求 17.2樣品和資料采集 17.3樣品分析 17.4影像資料分析 17.5資料整理 18游泳動(dòng)物 18.1技術(shù)要求與調(diào)查要素 18.2樣品采集 18.3樣品分析 18.4資料整理 19海洋哺乳動(dòng)物和海鳥 19.1技術(shù)要求與調(diào)查要素 19.2主要儀器設(shè)備 19.3調(diào)查方法 19.4資料整理 20食物網(wǎng) 20.1技術(shù)要求與調(diào)查要素 20.2樣品采集 20.3樣品分析 20.4資料整理 附錄A(規(guī)范性)海洋生物調(diào)查和分析記錄表 40參考文獻(xiàn) V本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是GB/T42629《國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程》的第3部分。GB/T42629已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：總則；——第3部分：海洋生物調(diào)查；——第4部分：海洋沉積物物理特性調(diào)查。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中華人民共和國自然資源部提出。本文件由全國海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC283)歸口。本文件起草單位：自然資源部第二海洋研究所、中國大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會(huì)、自然資源部第三海洋研究所、中國科學(xué)院海洋研究所、北京先驅(qū)高技術(shù)開發(fā)有限責(zé)任公司。VI為全面貫徹《中華人民共和國深海海底區(qū)域資源勘探開發(fā)法》,并遵守國際海底管理局有關(guān)規(guī)章和環(huán)境指南的要求，指導(dǎo)我國承包者切實(shí)履行多金屬結(jié)核、富鈷結(jié)殼和多金屬硫化物資源等深海海底區(qū)域資源勘探開發(fā)的環(huán)境調(diào)查義務(wù)，編制了GB/T42629《國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程》系列規(guī)程，使我國在國際海底區(qū)域和公海的環(huán)境調(diào)查技術(shù)、方法與國際接軌，為我國承包者履行環(huán)境調(diào)查義務(wù)和開展公海環(huán)境調(diào)查提供技術(shù)支撐。GB/T42629旨在確立普遍適用于國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查的內(nèi)容、程序和共性要求，擬由4個(gè)部分組成?！?部分：總則。目的在于確立適用于國際海底區(qū)域和公海海洋化學(xué)、海洋生物、海洋沉積物物理特性和物理海洋等海洋環(huán)境調(diào)查的程序和總體要求?！?部分：海洋化學(xué)調(diào)查。目的在于規(guī)范海洋化學(xué)調(diào)查內(nèi)容和分析方法?！?部分：海洋生物調(diào)查。目的在于規(guī)范海洋生物調(diào)查內(nèi)容、方法和技術(shù)要求?！?部分：海洋沉積物物理特性調(diào)查。目的在于規(guī)范海洋沉積物物理特性調(diào)查內(nèi)容、方法和技術(shù)要求。本文件為GB/T42629的第3部分，規(guī)定了國際海底區(qū)域和公海海洋生物調(diào)查的基本要求和方法。通過本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施，可有效推進(jìn)國際海底區(qū)域和公海海洋生物調(diào)查工作的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化和制度化，使不同組織實(shí)施單位、不同調(diào)查船、不同調(diào)查研究人員獲得的數(shù)據(jù)具有可比性。1國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程第3部分：海洋生物調(diào)查1范圍本文件規(guī)定了國際海底區(qū)域和公海海洋生物調(diào)查的一般規(guī)定、調(diào)查要素、樣品采集、樣品分析及資料整理的基本要求和方法。本文件適用于除極地海洋以外的國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查中的海洋生物調(diào)查。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T12763.6—2007海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋生物調(diào)查GB/T30744—2014深海微生物樣品前處理技術(shù)規(guī)范GB/T34656—2017海洋沉積物間隙生物調(diào)查規(guī)范GB/T42629.1—2023國際海底區(qū)域和公海環(huán)境調(diào)查規(guī)程第1部分：總則3術(shù)語和定義GB/T42629.1界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。存在于沉降到海底的光合生物碎屑和腐殖質(zhì)中的葉綠素a和脫鎂葉綠素a。棲息于水—沉積物界面，并能在海底照片上清楚分辨的動(dòng)物，大小通常大于等于1cm。大型底棲動(dòng)物macrofauna棲息于沉積物表面和底內(nèi)，并在沉積物樣品分選時(shí)被250μm孔徑網(wǎng)篩所阻留的動(dòng)物。小型底棲后生動(dòng)物metazoanmeiofauna棲息于沉積物表面和底內(nèi)，并在沉積物樣品分選時(shí)被32μm孔徑網(wǎng)篩所阻留的后生動(dòng)物以及它們的幼體等。2結(jié)核動(dòng)物nodulefauna在多金屬結(jié)核表面和裂隙中生活的動(dòng)物。食腐動(dòng)物scavenger以動(dòng)植物的尸體及其分解物、糞便等為食的動(dòng)物。海洋哺乳動(dòng)物marinemammal在海洋中胎生哺乳、體溫恒定的脊椎動(dòng)物。注：現(xiàn)存的海洋哺乳動(dòng)物分屬于哺乳綱下的三個(gè)目，包括鯨目，海牛目和食肉目。海鳥seabird在形態(tài)和行為上完全適應(yīng)于海洋環(huán)境，可在咸水中覓食的鳥類。[來源：中國海洋與濕地鳥類，有修改]環(huán)境DNAenvironmentalDNA;eDNA環(huán)境中的水、沉積物和生物體及其身上脫落的組織和排泄物等釋放出來的游離DNA分子?？煞从抄h(huán)境中當(dāng)前和過去一段時(shí)間內(nèi)的生物活動(dòng)和存在情況。4一般規(guī)定4.1技術(shù)設(shè)計(jì)技術(shù)設(shè)計(jì)要求如下：a)根據(jù)調(diào)查任務(wù)進(jìn)行技術(shù)設(shè)計(jì)，其內(nèi)容包括調(diào)查項(xiàng)目、調(diào)查要素、調(diào)查站位、調(diào)查方法、調(diào)查時(shí)間、b)根據(jù)海洋生物調(diào)查要素需求，在海洋生物調(diào)查站位應(yīng)同步開展水體和底質(zhì)環(huán)境參數(shù)調(diào)查，包括物理海洋、海洋化學(xué)和海洋地質(zhì)等調(diào)查，生物調(diào)查與環(huán)境參數(shù)調(diào)查應(yīng)同船、同站、同步作業(yè)。4.2調(diào)查要求調(diào)查項(xiàng)目如下。a)水體生物：微生物，微微型光合浮游生物，微、小型浮游生物，大、中型浮游生物，魚類浮游生b)底棲生物：巨型底棲動(dòng)物、大型底棲動(dòng)物、小型底棲后生動(dòng)物、有孔蟲、結(jié)核動(dòng)物、微生物、底棲魚類和食腐動(dòng)物。c)其他生物：海洋哺乳動(dòng)物和海鳥。4.2.2樣品和海底視像資料類型及采集方法4.2.2.1樣品類型及采集方法樣品類型及采集方法要求如下。3a)海水樣品適用于葉綠素a、微生物、微微型光合浮游生物和微型浮游生物等調(diào)查項(xiàng)目，應(yīng)采用采水型溫鹽深剖面儀(CTD)按規(guī)定水層采樣(見表1)。表1采水層次單位為米海區(qū)標(biāo)準(zhǔn)層次多金屬結(jié)核調(diào)查區(qū)30005000離底100離底50近底層富鈷結(jié)殼調(diào)查區(qū)水深<3000離底100離底50近底層水深≥3000多金屬硫化物調(diào)查區(qū)離底300離底200離底100離底50近底層稀土調(diào)查區(qū)及其他區(qū)域表層30005000離底100離底50近底層2000注：根據(jù)調(diào)查和研究目標(biāo)的特殊需要，適當(dāng)增加或調(diào)整采樣層次，尤其是躍層和葉綠素a次表層最大值層次；初級(jí)生產(chǎn)力測(cè)定站位、水樣采集層次按初級(jí)生產(chǎn)力測(cè)定要求設(shè)定。b)沉積物樣品適用于大型底棲動(dòng)物、小型底棲動(dòng)物、有孔蟲、結(jié)核動(dòng)物、微生物和沉積物葉綠素a調(diào)查項(xiàng)目。c)浮游生物拖網(wǎng)用于大、中型浮游生物，小型浮游生物和魚類浮游生物等項(xiàng)目；底層拖網(wǎng)、變水層拖網(wǎng)、釣具等適用于游泳動(dòng)物調(diào)查項(xiàng)目。d)載人潛水器(HOV)、遙控潛水器(ROV)和深海著陸器(lander)適用于巨型底棲動(dòng)物、底棲魚類和食腐動(dòng)物以及微生物等采樣調(diào)查項(xiàng)目。4.2.2.2海底視像資料類型及采集方法海底視像資料適用于底棲魚類、食腐動(dòng)物和巨型底棲動(dòng)物等調(diào)查項(xiàng)目，應(yīng)采用HOV、ROV、自治潛水器(AUV)、深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)和lander采集海底視頻和照片。4.3調(diào)查與分析儀器設(shè)備海洋生物調(diào)查與分析設(shè)備主要包括。a)調(diào)查和取樣設(shè)備：HOV、ROV、AUV、(電視)箱式取樣器、(電視)多管取樣器、深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)、lander、浮游生物網(wǎng)、多聯(lián)浮游生物分層拖網(wǎng)、CTD采水器、底棲生物樣品分選裝置等。光計(jì)、流式細(xì)胞儀、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀(PCR儀)等。4采樣要求如下。a)使用浮游生物拖網(wǎng)和CTD采水時(shí)，應(yīng)避開調(diào)查船的排污口，作業(yè)時(shí)不應(yīng)排污。b)使用專業(yè)規(guī)定的網(wǎng)具采樣時(shí)，嚴(yán)格控制起、落網(wǎng)速度不超過30m/min,浮游生物拖網(wǎng)應(yīng)安裝網(wǎng)口流量計(jì)。拖網(wǎng)時(shí)注意工作狀態(tài)是否正常，遇異常情況應(yīng)立即采取有效措施。起網(wǎng)后認(rèn)真沖洗網(wǎng)具，收集樣品，特別是粘附在網(wǎng)衣和網(wǎng)底管套篩絹上的生物樣品，避免標(biāo)本夾帶。c)使用調(diào)查項(xiàng)目規(guī)定的采樣器采集沉積物樣品時(shí)，注意采樣器的工作狀態(tài)。如果發(fā)現(xiàn)沉積物樣品的上覆水泄漏，樣品受到嚴(yán)重?cái)_動(dòng)時(shí)應(yīng)重新采集。d)海底視像資料采集應(yīng)嚴(yán)守海底視像資料采集設(shè)備的操作程序，注意設(shè)備在海底的工作狀態(tài)，離底高度盡量控制在3m左右，保證采集的視像資料質(zhì)量。e)海水樣品、浮游生物網(wǎng)樣和沉積物樣品采集過程中，根據(jù)調(diào)查需求保留備份樣品進(jìn)行環(huán)境DNA分析，用于輔助開展各類生物多樣性調(diào)查。樣品采集記錄表按附錄A中的表A.1～表A.48。遇異?，F(xiàn)象或新發(fā)現(xiàn)，除記錄外，還應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)拍照或錄像。樣品分析應(yīng)按GB/T42629.1—2023中的第8章和本文件具體要求執(zhí)行。4.6資料整理及報(bào)告編寫資料整理和報(bào)告編寫應(yīng)按GB/T42629.1—2023中的第9章和第10章以及本文件具體要求執(zhí)行。5葉綠素a5.1技術(shù)要求和調(diào)查要素采集200m以淺水樣用于測(cè)定水體葉綠素a濃度，水層設(shè)置見表1中200m以淺水層設(shè)置，條件許可時(shí)，可加采躍層(或葉綠素a次表層最大值層)水樣；采集表層10cm沉積物測(cè)定沉積物葉綠素a濃度，每隔1cm取一層樣品。每層樣品不少于2g濕重。葉綠素a濃度在0.5mg/m3水平時(shí)，樣品重復(fù)性的相對(duì)誤差在±10%以內(nèi)。調(diào)查要素如下。a)水體葉綠素a濃度；根據(jù)任務(wù)設(shè)計(jì)要求、樣品情況選做粒度分級(jí)葉綠素a。5b)沉積物葉綠素a濃度。5.2水體葉綠素a萃取熒光法測(cè)定主要儀器設(shè)備包括。a)采水器。c)濾膜/篩絹：玻璃纖維濾膜(等效截留孔徑約0.65μm),200μm孔徑篩絹(用于除去大型浮游生物)。按表1規(guī)定的層次采集水樣，并記錄于葉綠素采樣記錄表中，記錄表按表A.1的規(guī)定。采樣后，應(yīng)盡快過濾。過濾時(shí)水樣先經(jīng)200μm孔徑篩絹預(yù)過濾，除去大部分浮游動(dòng)物后，再過濾至濾膜上。過濾海水的體積為500cm3~1000cm3,過濾時(shí)抽氣負(fù)壓應(yīng)小于50kPa。過濾水樣量與濾膜貯存號(hào)記錄于葉綠素采樣記錄表中，記錄表按表A.1的規(guī)定。葉綠素a濾膜樣品原則上要求在海上現(xiàn)場(chǎng)完成測(cè)定分析。過濾后的濾膜應(yīng)在1h內(nèi)提取葉綠素，若不能立即進(jìn)行測(cè)量，可將濾膜對(duì)折，用鋁箔包好，存放于冰箱(一20℃)保存不超過30d。如無條件于現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)定，濾膜可存放于超低溫冰箱(<-70℃)保存不超過90d或放入液氮中長(zhǎng)期保存。熒光計(jì)：激發(fā)光波長(zhǎng)450nm,檢測(cè)光波長(zhǎng)685nm。體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮和體積分?jǐn)?shù)為10%的鹽酸。熒光計(jì)校準(zhǔn)按照GB/T12763.6—2007中5.2.1.4.1的要求進(jìn)行。若使用內(nèi)置萃取酸化法計(jì)算程序的專用葉綠素測(cè)定熒光計(jì)，宜使用葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照儀器操作說明校準(zhǔn)并存儲(chǔ)儀器內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，無需測(cè)定換算系數(shù)Fa。將載有浮游植物的濾膜放入加有10cm3體積分?jǐn)?shù)為90%丙酮的提取瓶?jī)?nèi)，蓋緊，搖蕩，立即放于6低溫(<0℃)冰箱內(nèi)，避光提取12h～24h。測(cè)定操作程序如下。a)取出樣品放在室溫、黑暗處約0.5h,使樣品溫度與室溫一致。b)每批樣品測(cè)定前后，以90%丙酮作對(duì)比液，測(cè)出空白熒光值。c)將提取瓶?jī)?nèi)上清液倒入測(cè)定池中，選擇適當(dāng)量程檔，測(cè)定樣品的熒光值Rb。d)加1滴體積分?jǐn)?shù)為10%鹽酸于測(cè)定池中，30s后測(cè)定其熒光值R。。e)將測(cè)定結(jié)果記錄于葉綠素a測(cè)定記錄表中，記錄表按表A.2的規(guī)定。若使用專用葉綠素?zé)晒庥?jì)，在完成儀器校準(zhǔn)后，宜按照儀器內(nèi)置的萃取酸化法測(cè)定程序直接測(cè)出葉綠素a和脫鎂葉綠素a濃度，將測(cè)定結(jié)果記錄于葉綠素a測(cè)定記錄表中，記錄表按表A.3的規(guī)定。葉綠素a濃度計(jì)算按照GB/T12763.6—2007中5.6.1.1.1的要求進(jìn)行計(jì)算。將上述計(jì)算結(jié)果填寫于葉綠素a測(cè)定記錄表，記錄表按表A.2和表A.3的規(guī)定。平面分布圖要求如下。a)各層次分布圖：等值線取值標(biāo)準(zhǔn)(單位為mg/m3)為0.10,0.20,0.30,0.50,0.75,1.00,2.00。b)含量分布圖：等值線取值標(biāo)準(zhǔn)(單位為mg/m2)為5,10,15,20,25,30,35,40,50。等值線取值標(biāo)準(zhǔn)(單位為mg/m3)為0.10,0.20,0.30,0.50,0.75,1.00,2.00。5.3水體葉綠素a粒度分級(jí)測(cè)定水體葉綠素a粒度分級(jí)測(cè)定的樣品采集、分析和資料處理，宜按照GB/T12763.6—2007中5.4.1的要求進(jìn)行。根據(jù)大洋水體特點(diǎn)，過濾海水體積要求500cm3~1000cm3。樣品采樣信息和測(cè)定結(jié)果分析分別記錄于表A.1和表A.4中。5.4沉積物葉綠素a測(cè)定從多管取樣器采集未受擾動(dòng)的沉積物芯樣按照5.1.1.1的要求處理沉積物樣品，用于測(cè)定沉積物葉綠素a。原則上要求在海上現(xiàn)場(chǎng)完成測(cè)定分析。如無條件于現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)定，沉積物樣品可存放于冰箱(-20℃)保存不超過6個(gè)月或放入液氮中長(zhǎng)期保存。7GB/T42629.3—20235.4.2樣品分析5.4.2.1沉積物葉綠素a提取取1g～2g沉積物樣品，稱重后加入0.1gMgCO?粉末轉(zhuǎn)移至含有10cm3體積分?jǐn)?shù)為90%丙酮溶液的離心管內(nèi)，蓋緊，搖蕩，再將離心管放入有冰水的超聲破碎儀(功率為50W～100W)以30s間隔超聲處理3min,隨后立即放于低溫(-20℃)冰箱內(nèi)遮光提取1d。5.4.2.2熒光測(cè)定測(cè)定步驟如下：a)樣品測(cè)定前后，以體積分?jǐn)?shù)為90%的丙酮作對(duì)比液，測(cè)出空白熒光值；b)取出樣品，低溫、避光條件下，離心10min(轉(zhuǎn)速不大于800×g),離心后放在室溫、黑暗處約0.5h,使樣品溫度與室溫一致；c)將提取瓶?jī)?nèi)上清液倒入測(cè)定池中，測(cè)定樣品的熒光數(shù)值R,;d)加1滴體積分?jǐn)?shù)為10%鹽酸于測(cè)定池中，10s后測(cè)定酸化后樣品的熒光數(shù)值R。;e)將測(cè)定結(jié)果記錄于沉積物葉綠素a測(cè)定記錄表中，記錄表按表A.5的規(guī)定；f)測(cè)定完后，烘干沉積物，稱量干重，記錄于記錄表中，記錄表按表A.5的規(guī)定。5.4.3資料整理5.4.3.1數(shù)值計(jì)算提取液中葉綠素a濃度計(jì)算，見公式(1)。p.(Chla)=F?·(R,-R?)……(1)式中：p(Chla)——提取液中葉綠素a濃度，單位為毫克每立方米(mg/m3)F?——量程檔“d”的換算系數(shù)，單位為毫克每立方米(mg/m3);R?——樣品酸化后熒光值；R?——樣品酸化前熒光值。若使用專用葉綠素?zé)晒庥?jì)，在完成儀器校準(zhǔn)后，宜按照儀器內(nèi)置的萃取酸化法測(cè)定程序直接測(cè)出提取液葉綠素a和脫鎂葉綠素a濃度，將測(cè)定結(jié)果記錄于記錄表中，記錄表按表A.5的規(guī)定。沉積物葉綠素a含量計(jì)算，見公式(2)和公式(3)。式中：V——提取液的體積，單位為立方厘米(cm3);W?——沉積物樣品濕重，單位為克(g);W?——沉積物樣品干重，單位為克(g)。8GB/T42629.3—2023將上述計(jì)算結(jié)果填寫于沉積物葉綠素(萃取熒光法)測(cè)定記錄表，記錄表按表A.5的規(guī)定。6初級(jí)生產(chǎn)力6.1技術(shù)要求和調(diào)查要素按真光層(自海表層到光強(qiáng)衰減至1%海表光強(qiáng)的水層深度)內(nèi)光衰減百分比層次采集水樣。當(dāng)真光層深度在3m～10m時(shí)，采表層(100%)和光衰減至10%和1%層次(共3層)水樣；當(dāng)真光層深度大于10m時(shí)，采表層(100%)和光衰減至50%、30%、10%、5%和1%層次(共6層)水樣。真光層深度和各光衰減百分比層次深度的確定，可使用水下光量子計(jì)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)測(cè)，也可根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)海水透明度用公式(4)和公式(5)計(jì)算獲得。I?=I?·e-kdk=1.7/S…(5)注：當(dāng)太陽照射角度低時(shí)(<30°),用1.2d代替d。測(cè)定范圍0.05mg/(m3·h)～100mg/(m3·h)。當(dāng)初級(jí)生產(chǎn)力在30mg/(m3·h)水平時(shí)，樣品重復(fù)性的相對(duì)誤差在±10%以內(nèi)。水體初級(jí)生產(chǎn)力，根據(jù)任務(wù)設(shè)計(jì)要求、樣品情況選做初級(jí)生產(chǎn)力粒度分級(jí)。6.2測(cè)定方法海水樣品采集按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.1的要求進(jìn)行，采樣信息記錄于初級(jí)生產(chǎn)力采9GB/T42629.3—2023按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.2的要求將水樣分裝入聚碳酸酯無色透明培養(yǎng)瓶。按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.3的要求加入1C工作液。按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.4的要求取總計(jì)數(shù)樣。初級(jí)生產(chǎn)力培養(yǎng)時(shí)間宜在4h左右，并盡量接近當(dāng)?shù)刂形鐣r(shí)間。按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.5和5.3.4.3.6的要求將培養(yǎng)海水過濾至玻璃纖維濾膜(等效截留孔徑0.65μm)。過濾后得到的濾膜，應(yīng)置于通風(fēng)櫥中以濃鹽酸蒸氣熏15min,再置于干燥器中完全干燥，最后放入閃爍瓶低溫保存。6.2.2樣品分析初級(jí)生產(chǎn)力樣品分析按照GB/T12763.6—2007中5.3.4.3.8的要求進(jìn)行，測(cè)定結(jié)果記錄于初級(jí)生產(chǎn)力采樣、過濾、測(cè)定記錄表中，記錄表按表A.6的規(guī)定。在使用液體閃爍計(jì)數(shù)儀進(jìn)行樣品分析前，要求使用一系列(不少于6個(gè))?C萃滅標(biāo)準(zhǔn)瓶在液閃計(jì)數(shù)儀上測(cè)定以進(jìn)行萃滅校正，用直線回歸法得出道比求效率的方程。6.2.3資料整理數(shù)值計(jì)算如下：a)測(cè)定海水樣品的鹽度，計(jì)算海水中二氧化碳總濃度，按公式(6)計(jì)算。p(C)=(0.067S-0.05)×12000 (6)式中：p(C)——海水中二氧化碳的總濃度(以碳計(jì)),單位為毫克每立方米(mg/m3);S——海水實(shí)用鹽度(無量綱)。b)加入1?C的量按公式(7)計(jì)算。R——加入?C的量，單位為千貝可(kBq);R,——各總計(jì)數(shù)閃爍瓶測(cè)得*C數(shù)量的平均值，單位為千貝可(kBq);V?——培養(yǎng)水樣的體積，單位為立方厘米(cm3);V?——取測(cè)總計(jì)數(shù)水樣的體積，單位為立方厘米(cm3)。c)初級(jí)生產(chǎn)力按公式(8)計(jì)算?！璆B/T42629.3—2023式中：P、——海洋初級(jí)生產(chǎn)力(以碳計(jì)),單位為毫克每立方米小時(shí)[mg/(m3·h)];R——加入“C的量，單位為千貝可(kBq);R.——白瓶樣品中C的放射性活度的平均值，單位為千貝可(kBq);R?——黑瓶樣品中1C的放射性活度，單位為千貝可(kBq);p(C)——海水中二氧化碳的總濃度(以碳計(jì)),單位為毫克每立方米(mg/m3);T——培養(yǎng)時(shí)間，單位為小時(shí)(h)。d)生產(chǎn)力指數(shù)按公式(9)計(jì)算。式中：I——生產(chǎn)力指數(shù)(以碳計(jì)),單位為毫克每小時(shí)毫克[mg/(h·mg)];P、——水體初級(jí)生產(chǎn)力，單位為毫克每立方米小時(shí)[mg/(m3·h)];p.(Chla)——水體中葉綠素a的濃度，單位為毫克每立方米(mg/m3)。e)水柱初級(jí)生產(chǎn)力按公式(10)計(jì)算。……(10)式中：Ps——水柱初級(jí)生產(chǎn)力，單位為毫克每平方米小時(shí)[mg/(m2·h)];P、——第i層初級(jí)生產(chǎn)力，單位為毫克每立方米小時(shí)[mg/(m3·h)];n——采樣層次數(shù)；D;——第i層深度，單位為米(m),l≤i≤n-1。將上述計(jì)算結(jié)果記錄于初級(jí)生產(chǎn)力采樣、過濾、測(cè)定記錄表中，記錄表按表A.6的規(guī)定。等值線取值標(biāo)準(zhǔn)[單位為mg/(m2·h)]為1.0,5.0,10.0,20.0,30.0,50.0,100.0。等值線取值標(biāo)準(zhǔn)[單位為mg/(m3·h)]為0.1,0.3,0.5,1.0,3.0,5.0,10.0,30.0,50.0,100.0。6.3初級(jí)生產(chǎn)力粒度分級(jí)測(cè)定初級(jí)生產(chǎn)力粒度分級(jí)測(cè)定的樣品采集、分析和資料處理，按照GB/T12763.6—2007中5.4.2的規(guī)定執(zhí)行。計(jì)算不同光學(xué)深度上的初級(jí)生產(chǎn)力總值時(shí)，三種粒級(jí)浮游植物的初級(jí)生產(chǎn)力之和與直接用玻璃纖維濾膜抽濾的測(cè)量結(jié)果應(yīng)接近，若兩者差異較大(大于10%),初級(jí)生產(chǎn)力的總值取兩者的平均值。7微生物7.1技術(shù)要求和調(diào)查要素技術(shù)要求如下。a)采樣站位和層次具體要求包括：1)站位布設(shè)應(yīng)盡量和其他調(diào)查項(xiàng)目一致；2)采樣水層見表1水樣采集層次的有關(guān)規(guī)定。b)無菌操作具體要求包括：2)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)水樣和沉積物樣品的分樣，均應(yīng)按無菌操作要求進(jìn)行；3)其他海上調(diào)查所需物品，如水樣貯存瓶(棕色)、移液器吸頭(1mL、5mL和10mL)、培養(yǎng)c)樣品保存具體要求包括：1)應(yīng)盡快將樣本采集到調(diào)查船上，并立即進(jìn)行無菌處理保存；2)用于微生物計(jì)數(shù)的樣品，暫放冰箱(4℃左右)保存；3)用于擴(kuò)增子分析的樣品，應(yīng)存放于一80℃超低溫冰箱或液氮冷凍保藏。微生物調(diào)查要素為海水和沉積物中微生物豐度和微生物群落組成。7.2樣品采集海水和沉積物中微生物樣品采集按照GB/T30744—2014中第7章的規(guī)定執(zhí)行，完成樣品采集后填寫微生物現(xiàn)場(chǎng)采樣記錄表，記錄表按表A.7和表A.8的規(guī)定。7.3樣品分析7.3.1主要儀器設(shè)備主要儀器設(shè)備包括。a)熒光顯微鏡：具備藍(lán)光道和紫外光道供觀察4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色，配置電腦或高分辨率并適用于弱光場(chǎng)的數(shù)碼相機(jī)。b)抽濾裝置：進(jìn)口成品濾器組或自行裝配25mm和47mm濾器和負(fù)壓抽濾設(shè)備。c)移液器：置備不同量程的移液器。d)超凈臺(tái)：有條件的單位選用超凈室，內(nèi)置生物安全柜。e)低溫冰箱：宜選用一80℃超低溫冰箱存放水樣濾膜和沉積物樣品，無條件時(shí)可置于—20℃或一40℃冰箱保存。f)滅菌鍋：用于高溫高壓滅菌消毒。耗材包括。a)微孔濾膜(醋酸纖維或硝化纖維):直徑25mm和47mm,孔徑0.2μm、0.45μm和0.8μm。b)黑色核孔濾膜(聚碳酸酯材質(zhì)):直徑25mm,孔徑0.2μm。c)注射器和濾器：一次性無菌注射器和無菌濾器。d)熒光顯微鏡計(jì)數(shù)用的裝樣瓶：50mL螺蓋塑料瓶，用前用體積分?jǐn)?shù)為5%的鹽酸溶液浸泡24h以上，用經(jīng)0.2μm濾膜過濾的蒸餾水清洗并高壓滅菌。7.3.3試劑和工作溶液試劑和工作溶液包括。a)熒光顯微鏡直接計(jì)數(shù)用固定液(甲醛溶液):經(jīng)0.2μm濾膜過濾，質(zhì)量濃度為37%～40%的甲醛溶液。b)DAPI儲(chǔ)備液和工作溶液：取10mgDAPI溶于50mL蒸餾水中(200μg/mL),用0.2μm一次性濾器過濾，按1mL量分裝于1.5mL離心管中，在一20℃冷凍保存?zhèn)溆茫４嫫诳蛇_(dá)一年。臨用前取一小管儲(chǔ)備液解凍后按10μg/mL稀釋，并用0.2μm一次性濾器過濾，制備成工作溶液。樣品處理要求如下。a)熒光直接計(jì)數(shù)的水樣：取水樣50mL于預(yù)先處理的采樣瓶(見7.3.2d)]中，加甲醛溶液2.5mL(甲醛在樣品中的質(zhì)量濃度為2%)室溫固定樣品15min,樣品于2℃~8℃低溫保存。b)微生物群落組成樣品：取海水樣品5L過濾至0.2μm孔徑濾膜，將濾膜內(nèi)折置于50mL無菌離心管中并放于一20℃冰箱冷凍保存；取沉積物10g置于50mL無菌離心管中并放于—20℃冰箱冷凍保存。7.3.5樣品分析步驟采用落射熒光顯微鏡用DAPI直接計(jì)數(shù)法測(cè)定微生物總數(shù)(有條件的可使用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定微生物總數(shù))。DAPI熒光染色計(jì)數(shù)法的具體操作步驟如下。a)濾器裝配：長(zhǎng)期未用的濾器應(yīng)先裝好濾器和抽濾裝置，用經(jīng)0.2μm過濾的高壓滅菌蒸餾水加滿濾筒并抽濾清洗2次～3次，再卸下濾筒，在濾板上先放置孔徑為0.8μm或0.45μm的直徑25mm微孔濾膜作襯底；然后將黑色核孔濾膜(光滑面朝上)放于襯墊上，再裝配好濾筒。b)加樣：加入適量樣品(控制在視野出現(xiàn)菌體50個(gè)左右),若樣品量少于1mL應(yīng)先加入2mL經(jīng)0.2μm過濾的無菌海水，再加樣，以使微生物均勻分布于濾膜c)抽濾：在負(fù)壓(50kPa)條件下，抽濾樣品至濾膜剛好呈濕潤狀態(tài)后停止抽濾。d)染色：用無菌注射器吸取DAPI工作液，套上0.2μm無菌濾器，沿濾筒壁加入1mL染色液，使其蓋滿濾膜并染色5min～10min;隨后過濾殘留液體。e)制片：取出濾膜，置于滴有無熒光鏡油的載玻片上，貼上濾膜(載菌一面朝上),并在濾膜上滴加一小滴鏡油，蓋上蓋玻片(濾膜上下兩面均不能有氣泡)。f)計(jì)數(shù)：熒光顯微鏡調(diào)至藍(lán)光通道模式，油鏡條件下，隨機(jī)選取不少于10個(gè)視野，計(jì)算具有微生物形態(tài)呈亮綠色的細(xì)胞數(shù)量；每個(gè)樣品至少計(jì)數(shù)300個(gè)菌體；每次(不同測(cè)定日期)測(cè)定時(shí)，應(yīng)加測(cè)未加樣品的空白對(duì)照，空白制片，每個(gè)視野不應(yīng)出現(xiàn)1個(gè)以上微生物。g)將計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于海洋水體細(xì)菌數(shù)量直接計(jì)數(shù)記錄表，記錄表按表A.9的規(guī)定。GB/T42629.3—2023分子測(cè)序包括純培養(yǎng)微生物DNA分析、微生物擴(kuò)增子分析與微生物宏基因組分析，要求如下：a)海水及沉積物中微生物菌株分離培養(yǎng)及保藏按照GB/T30744—2014中第7章相關(guān)要求b)水體微生物濾膜樣品按7.3.4b)的要求過濾獲取，按照GB/T30744—2014中10.4的規(guī)定提取水體微生物DNA;c)沉積物中底棲微生物DNA提取按照GB/T34656—2017中14.5的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行；d)底棲微生物16SrDNA擴(kuò)增方法按照GB/T34656—2017中14.5的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行；e)水體微生物濾膜樣品和沉積物微生物樣品宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)分析按照GB/T34656—2017中14.5的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。7.4資料整理7.4.1數(shù)值計(jì)算7.4.1.1微生物豐度微生物豐度按公式(11)計(jì)算。式中：Bx——微生物豐度，單位為個(gè)每立方分米(個(gè)/dm3);N?——各視野平均微生物數(shù)，單位為個(gè)；S——濾膜實(shí)際過濾面積，單位為平方毫米(mm2);S:——顯微鏡視野面積，單位為平方毫米(mm2);V——過濾樣品量(式中0.05為加入體積分?jǐn)?shù)為37%～40%甲醛占固定樣品總體積的比例),單位為立方分米(dm3)。7.4.1.2微生物群落多樣性微生物群落多樣性要求如下。a)對(duì)16SrDNA擴(kuò)增子測(cè)序結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，包括數(shù)據(jù)進(jìn)行去噪、去嵌合體等。b)通過將代表性序列和微生物核糖體基因綜合數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)獲得物種注釋信息。c)對(duì)所有代表性序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系構(gòu)建，計(jì)算各樣品的α多樣性及β多樣性。其中α多樣性指數(shù)包括：用來度量群落均勻度的均勻度指數(shù)(EvennessIndex);用來定量度量群落豐富度的包括豐富度和均勻度兩個(gè)層面的香農(nóng)-維納指數(shù)(Shannon-WeinerIndex);用來定性度量群落豐富度只包括豐富度的observedOTU指數(shù)；用來衡量進(jìn)化關(guān)系的faith_pd指數(shù)。β多樣性指數(shù)包括分別以布雷柯蒂斯距離(Bray-CurtisDistance)和杰卡德距離(JaccardDistance)計(jì)算獲得的各樣品微生物群落組成距離矩陣和主坐標(biāo)分析(PCoA)降維分布圖觀察各樣品微生物群落組成的差異情況。7.4.2填寫報(bào)表以上測(cè)定和計(jì)算結(jié)果分別填入海洋水體微生物數(shù)量直接計(jì)數(shù)記錄表和微生物擴(kuò)增子分析信息記錄7.4.3繪制分布圖一般以等值線表示，取值標(biāo)準(zhǔn)視具體情況而定。一般以等值線表示，取值標(biāo)準(zhǔn)視具體情況而定。7.4.3.3微生物群落組成圖一般以柱狀圖表示，取值標(biāo)準(zhǔn)視具體情況而定。8微微型光合浮游生物8.1技術(shù)要求和調(diào)查要素采水層次見表1?？筛鶕?jù)調(diào)查的需要，酌情增加躍層或葉綠素a次表層最大值層。對(duì)不同類群微微型光合浮游生物(原綠球藻、聚球藻和微微型真核藻)進(jìn)行區(qū)分，分別測(cè)定其細(xì)胞豐度。調(diào)查要素包括微微型光合浮游生物3個(gè)類群的豐度。8.2樣品采集8.2.1主要儀器設(shè)備樣品固定可采用多聚甲醛溶液(固定終濃度為1%)或戊二醛溶液(固定終濃度為0.1%)。配置方法如下。a)多聚甲醛溶液：在通風(fēng)櫥中把10g多聚甲醛放入85cm3煮沸的蒸餾水中，然后在70℃連續(xù)攪拌至少2h使其均勻混合(可使用恒溫磁力攪拌器);加入少量NaOH溶液(1mol/dm3)直至溶液澄清；加入10cm310%磷酸緩沖液，調(diào)節(jié)pH到7.5,溶液體積到100cm3;使用0.2μm的微孔濾膜過濾，過濾后的多聚甲醛溶液可分裝于10cm3試管中，儲(chǔ)存于一20℃冰箱。未凍結(jié)的多聚甲醛溶液(4℃保存)使用不宜超過1周。b)25%戊二醛溶液：25%戊二醛溶液，經(jīng)0.2μm的微孔濾膜預(yù)過濾。8.2.3水樣采集和保存使用CTD采水器采集水樣，每次采水宜不少于30cm2,并記錄于海洋微微型光合浮游生物海上采樣記錄表中，記錄表按表A.11的規(guī)定。水樣經(jīng)過20μm孔徑篩絹預(yù)先過濾，然后取過濾水樣放入預(yù)先貼好標(biāo)簽的2mL或5mL的凍存管中；加入適量固定劑(見8.2.2),充分混勻；在室溫下放置15min后，將樣品置于液氮中速凍保存，或于液氮速凍后轉(zhuǎn)移到一80℃超低溫冰箱保存(一20℃條件下保存不宜超過1個(gè)月，-80℃或液氮中保存不宜超過半年),直至分析。如有條件進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)分析，應(yīng)將水樣置于4℃避光條件保存并在12h內(nèi)上機(jī)完成分析。8.3樣品分析8.3.1主要儀器設(shè)備流式細(xì)胞測(cè)定儀。經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾的現(xiàn)場(chǎng)海水，也可使用超純水。用超純水或經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾的現(xiàn)場(chǎng)海水，稀釋直徑1μm的標(biāo)準(zhǔn)黃綠色熒光微珠懸浮液至濃度約為10?個(gè)/mm3。步驟如下。a)準(zhǔn)備好鞘液，開機(jī)預(yù)熱，當(dāng)使用過濾海水為鞘液時(shí)，不宜使用儀器內(nèi)的鞘液過濾器，否則應(yīng)注意更換鞘液過濾器。b)儀器自較：按照儀器廠商提供的方法檢查儀器的靈敏度和準(zhǔn)確度(用CV值表示，一般CV值應(yīng)小于2.0),確保儀器狀態(tài)良好。算樣品流速(mm3/min),水樣重量可通過密度換算為體積(過濾海水p=1.03mg/mm3,超純水d)將冷凍樣品置于37℃水浴中避光解凍，將10mm3的熒光小球工作液和1cm3的樣品加入貼好標(biāo)簽的流式細(xì)胞進(jìn)樣管中，用漩渦振蕩器充分混勻。e)設(shè)定儀器各熒光通道的參數(shù)：在紅色熒光通道設(shè)定閾值，使之適合采集海區(qū)微微型光合浮游生物樣品的測(cè)定，保證目標(biāo)細(xì)胞群出現(xiàn)在分析圖譜中。并做好參數(shù)設(shè)定的記錄，采集Log信號(hào)。f)選擇和校準(zhǔn)流速：流速控制在(10～30)mm3/s范圍內(nèi)，采集速度(50～100)個(gè)顆粒/s為宜。g)數(shù)據(jù)獲取：進(jìn)樣，至少穩(wěn)定15s后開始采集數(shù)據(jù)，使用列表模式(Listmode)提取數(shù)據(jù)，采集數(shù)GB/T42629.3—2023量宜大于10000個(gè)顆粒。記錄樣品分析時(shí)儀器設(shè)置的各項(xiàng)參數(shù)。h)將結(jié)果記錄于海洋微微型光合浮游生物測(cè)定結(jié)果記錄表，記錄表按表A.12的規(guī)定。8.4資料整理8.4.1不同類群的區(qū)分不同類群可根據(jù)下列特征進(jìn)行區(qū)分。a)根據(jù)各細(xì)胞群光散射信號(hào)(前向散射光和側(cè)向散射光，分別表征細(xì)胞大小和粒度)和熒光信號(hào)(橙色熒光和紅色熒光，分別表征藻膽蛋白和葉綠素含量)的差異區(qū)分原綠球藻、聚球藻和微微型真核藻類。b)不同類群微微型光合浮游生物的區(qū)分，可考慮以下重要特征：前向散射光、側(cè)向散射光和熒光信號(hào)。其中，前向散射光、側(cè)向散射光和紅色熒光信號(hào)強(qiáng)度大小依次為：微微型真核藻>聚球藻>原綠球藻；橙色熒光信號(hào)強(qiáng)度大小依次為聚球藻>原綠球藻≈微微型真核藻。8.4.2獲取細(xì)胞數(shù)在儀器分析結(jié)果的散點(diǎn)圖上圈出目標(biāo)細(xì)胞群，獲得該類群細(xì)胞的數(shù)量，做好記錄。8.4.3數(shù)值計(jì)算樣品中各個(gè)類群的細(xì)胞豐度可用公式(12)計(jì)算。式中：C——細(xì)胞豐度，單位為個(gè)每立方厘米(cells/cm3);N——獲取該類群細(xì)胞數(shù)，單位為個(gè)(cells);V?——樣品體積加添加物(固定劑，熒光微珠等)體積，單位為立方厘米(cm3);V、——樣品體積，單位為立方厘米(cm3);R——樣品流速，單位為立方厘米每分鐘(cm3/min);T——樣品測(cè)定時(shí)間，單位為分鐘(min)。8.4.4填寫報(bào)表將測(cè)定結(jié)果記錄于海洋微微型光合浮游生物測(cè)定結(jié)果記錄表，記錄表按表A.12的規(guī)定。8.4.5繪制分布圖平面分布圖包括：a)各類群微微型光合浮游生物細(xì)胞豐度(單位為cells/cm3)各層次分布圖；b)微微型光合浮游生物總細(xì)胞豐度(單位為cells/cm3)各層次分布圖。8.4.5.2斷面分布圖斷面分布圖包括：a)各類群微微型光合浮游生物(原綠球藻、聚球藻和微微型真核藻)細(xì)胞豐度(單位為cells/cm3)斷面分布圖；b)微微型光合浮游生物總細(xì)胞豐度(單位為cells/cm3)斷面分布圖。上述平面和斷面分布圖等值線取值標(biāo)準(zhǔn)，可視所測(cè)得細(xì)胞豐度數(shù)值范圍具體情況設(shè)定。9.1技術(shù)要求和調(diào)查要素9.1.1技術(shù)要求采樣要求如下：a)微型浮游生物樣品用CTD采水器采集，每次采水體積不少于2000cm3;b)小型浮游生物樣品用大洋浮游植物網(wǎng)采集(表2),由200m至表層垂直拖曳。樣品分析要求90%以上的物種鑒定到種(幼體除外),并按種計(jì)數(shù)。調(diào)查要素包括微、小型浮游生物的種類組成和豐度。9.2樣品采集拖網(wǎng)采樣設(shè)備及要求如下。a)網(wǎng)具：采用大洋浮游植物網(wǎng)，具體指標(biāo)見表2。b)網(wǎng)底管：網(wǎng)底管套的篩絹與網(wǎng)衣篩絹的孔徑應(yīng)相同。c)流量計(jì)：應(yīng)在網(wǎng)口半徑二分之一處安裝流量計(jì)，應(yīng)在每個(gè)航次使用前標(biāo)定一次流量計(jì)。d)絞車及鋼纜：絞車變速范圍為0.3m/s～1m/s,并附有排纜裝置和鋼纜計(jì)數(shù)器。e)吊桿：吊桿高度大于5m,負(fù)荷大于2000kg,吊桿離舷間距1m左右并能調(diào)節(jié)位置。f)沖水設(shè)備：用于沖洗收集粘貼在網(wǎng)衣或網(wǎng)底管篩絹上的標(biāo)本。表2浮游生物網(wǎng)網(wǎng)具規(guī)格及適用對(duì)象網(wǎng)型適用范圍及采集對(duì)象網(wǎng)長(zhǎng)網(wǎng)口內(nèi)徑網(wǎng)口面積m2篩絹規(guī)格及孔寬近似值mm大洋浮游植物網(wǎng)適用于垂直采集小型浮游生物0.25NY??HC(0.020)大洋浮游動(dòng)物網(wǎng)適用于垂直采集大、中型浮游生物和魚類浮游生物CB30(0.198)JP32(0.202)表2浮游生物網(wǎng)網(wǎng)具規(guī)格及適用對(duì)象(續(xù))網(wǎng)型適用范圍及采集對(duì)象網(wǎng)長(zhǎng)網(wǎng)口內(nèi)徑網(wǎng)口面積m2篩絹規(guī)格及孔寬近似值大洋雙鼓網(wǎng)適用于定量垂直或傾斜采集魚類浮游生物多聯(lián)浮游生物分層拖網(wǎng)適用于分層采集大、中型浮游生物0.5或根據(jù)采樣深度和實(shí)際需要，選用CTD采水器。9.2.2采樣前的準(zhǔn)備固定液包括。a)魯哥氏液：60g碘化鉀溶于1dm3蒸餾水，加入40g碘使其溶解，再加入100cm3冰醋酸。b)緩沖甲醛溶液：體積分?jǐn)?shù)約為40%的甲醛溶液加入同量蒸餾水配制成1dm3約20%的甲醛溶液，再加入100g六次甲基四胺。c)戊二醛溶液。9.2.2.2流量計(jì)現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)定標(biāo)定要求如下a)流量計(jì)現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)定工作盡量安排在風(fēng)平浪靜的海況下進(jìn)行。b)標(biāo)定前將流量計(jì)安裝在浮游生物拖網(wǎng)(脫去網(wǎng)衣，僅留網(wǎng)架)網(wǎng)口半徑二分之一處。c)將網(wǎng)架放至一定深度(如50m或100m等),然后以實(shí)際采樣時(shí)的拖網(wǎng)速度，勻速垂直拖網(wǎng)至表層(拖網(wǎng)過程中切忌停頓)并記錄轉(zhuǎn)數(shù)。d)重復(fù)拖網(wǎng)5次～10次，求得平均轉(zhuǎn)數(shù)(去除偏差大的數(shù)據(jù)后至少還有5次有效數(shù)據(jù))。e)按公式(13)換算成每轉(zhuǎn)濾水量。式中：V?——每轉(zhuǎn)濾水量，單位為立方米每轉(zhuǎn)(m3/r);H?——標(biāo)定時(shí)拖網(wǎng)放的水深，單位為米(m);S拖網(wǎng)網(wǎng)口的面積，單位為平方米(m2);N?！骄D(zhuǎn)數(shù)，單位為轉(zhuǎn)(r)。9.2.3海上采樣與樣品保存9.2.3.1網(wǎng)樣采集采集要求如下。a)網(wǎng)具：用大洋浮游植物網(wǎng)采集水柱中的小型浮游生物樣品。b)拖網(wǎng)速度：落網(wǎng)速度為0.5m/s,到達(dá)預(yù)定深度后停車30s,然后以0.5m/s～0.8m/s的速度起網(wǎng)。c)樣品保存：樣品用緩沖甲醛溶液固定，加入量為樣品體積的5%,根據(jù)樣品的實(shí)際濃度作適當(dāng)增減，需進(jìn)行電鏡觀察的樣品，用戊二醛固定，加入量為樣品體積的2%～5%,并記錄于浮游生物海上采樣記錄表，記錄表按表A.13的規(guī)定。按預(yù)定水層和規(guī)定量采集水樣。如需去除大于20μm的生物，可先用孔徑20μm的篩絹預(yù)過濾。樣品用魯哥氏液固定，每1dm3水樣加入10cm3~15cm3,根據(jù)樣品的實(shí)際濃度作適當(dāng)增減。如需要對(duì)樣品做電鏡觀察分析，則選用戊二醛固定，根據(jù)樣品濃度可加入樣品體積的2%～5%。采樣情況記錄于浮游生物海上采樣記錄表，記錄表按表A.13的規(guī)定。各類樣品應(yīng)有總編號(hào)?？偩幪?hào)由代表采樣海區(qū)、采樣工具與采樣方式、采樣年份和樣品序號(hào)等內(nèi)容的代號(hào)依次組成，每份貯存樣品的瓶外須貼有總編號(hào)的外標(biāo)簽，瓶?jī)?nèi)須放有總編號(hào)、站號(hào)和采樣日期等內(nèi)容的內(nèi)標(biāo)簽。采樣情況記錄于浮游生物海上采樣記錄表，記錄表按表A.13的規(guī)定。9.3樣品分析9.3.1主要儀器和設(shè)備光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡和沉降器。9.3.2種類鑒定與計(jì)數(shù)濃縮計(jì)數(shù)法用于網(wǎng)采或采水樣品浮游生物計(jì)數(shù)。每個(gè)樣品細(xì)胞鏡檢數(shù)不少于500個(gè)。計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于網(wǎng)采(微、小型)浮游生物標(biāo)本個(gè)數(shù)計(jì)數(shù)記錄表，記錄表按表A.14的規(guī)定。具體要求如下：視樣品中浮游生物數(shù)量多少，濃縮至適當(dāng)體積，用取樣管攪拌均勻，迅速將取樣管直立于樣品中，準(zhǔn)確地—次吸取所需體積并移入浮游生物計(jì)數(shù)框，加蓋玻片后進(jìn)行鑒定、計(jì)數(shù)；浮游生物的計(jì)數(shù)視其數(shù)量多少確定計(jì)數(shù)全部、1/2或1/4,重復(fù)計(jì)數(shù)3次。沉降計(jì)數(shù)法用于采水樣品浮游生物計(jì)數(shù)。每份水采樣品細(xì)胞鏡檢數(shù)不少于100個(gè)。計(jì)數(shù)結(jié)果記錄于水采(微、小型)浮游生物標(biāo)本個(gè)數(shù)計(jì)數(shù)記錄表，記錄表按表A.15的規(guī)定。具體要求如下：將水樣或混合樣(根據(jù)調(diào)查性質(zhì)及不同要求，由50cm3或100cm3等量的數(shù)層水樣混合而成)每份取3個(gè)分樣，分別裝滿3個(gè)等體積的沉降器(10cm3~20cm3),加蓋玻片靜置24h后，使用倒置顯微鏡鑒定，計(jì)數(shù)。取樣體積應(yīng)視樣品濁度和浮游植物豐度而定。9.4資料整理按GB/T12763.6—2007中7.4.1的相關(guān)規(guī)定計(jì)算微、小型浮游生物豐度。將上述分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的結(jié)果填入微、小型浮游生物數(shù)量統(tǒng)計(jì)表，記錄表按表A.16的規(guī)定。平面分布圖一般用等值線表示，取值標(biāo)準(zhǔn)要求如下。a)網(wǎng)采小型浮游生物細(xì)胞總豐度(單位：103cells/m3):5,10,50,100,500,1000。b)網(wǎng)采小型浮游生物優(yōu)勢(shì)種細(xì)胞豐度(單位：103cells/m3):1,5,10,50,100,500,1000。c)水采微型浮游生物細(xì)胞總豐度(單位：102cells/dm3):5,10,50,100,500,1000。d)水采微型浮游生物優(yōu)勢(shì)種細(xì)胞豐度(單位：102cells/dm3):1,5,10,50,100,500。e)以上取值標(biāo)準(zhǔn)，可視具體情況酌情調(diào)整。10.1技術(shù)要求和調(diào)查要素技術(shù)要求如下。a)垂直拖網(wǎng)：用大洋浮游動(dòng)物網(wǎng)由水深200m處至表層垂直拖曳；或者使用大洋雙鼓網(wǎng)由水深200m處至表層傾斜拖曳。b)分層拖網(wǎng)：使用多聯(lián)浮游生物分層拖網(wǎng)(表2)開展垂直拖曳或者傾斜拖曳采樣。根據(jù)測(cè)站深度規(guī)定采樣水層(表3)。視項(xiàng)目要求根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)溫度躍層、鹽度躍層、中層缺氧層和葉綠素a次表層最大值層等分段分層采樣。c)采樣時(shí)間：由于大、中型浮游動(dòng)物普遍具有晝夜垂直遷移的習(xí)性，因此需設(shè)計(jì)晝夜對(duì)比采樣調(diào)查。按調(diào)查海區(qū)當(dāng)?shù)貢r(shí)間，晝間采樣時(shí)間一般應(yīng)在8:00～16:00之間開展；夜間采樣時(shí)間一般應(yīng)在20:00～04:00之間開展；清晨和黃昏時(shí)刻的采樣可能因浮游動(dòng)物正處于垂直遷移過程中而導(dǎo)致調(diào)查偏差，故不推薦開展。d)生物量測(cè)定精密度：大、中型浮游生物濕重生物量測(cè)定的精密度優(yōu)于±1mg。e)樣品分析：包括生物量豐度和生物量測(cè)定兩部分。種類鑒定應(yīng)到物種階元或者最低可分類階元，個(gè)體計(jì)數(shù)應(yīng)按物種計(jì)數(shù)或者按最低可分類階元計(jì)數(shù)。表3大、中型浮游生物垂直分層采樣水層設(shè)置單位為米測(cè)站水深采樣深度范圍采樣網(wǎng)類型采樣水層0～近底9層，網(wǎng)口面積不小于0.5m20～50,50～100,100～200,200～300,300～500,500～1000,1000～2000,2000～3000,3000～近底>1000,≤30000～近底9層，網(wǎng)口面積不小于0.5m20～50,50～100,100～200,200～300,300～500,500～750,750～1000(1000m以深視水深決定是否繼續(xù)加采，每1000m加采一層)表3大、中型浮游生物垂直分層采樣水層設(shè)置(續(xù))單位為米測(cè)站水深采樣深度范圍采樣網(wǎng)類型采樣水層0～近底9層，網(wǎng)口面積不小于0.5m20～50,50～100,100～150,150～200,200～300,300～400,400～500,500～750,750～近底0～30005層，網(wǎng)口面積小于0.5m20～100,100～200,200～500,500～1000,1000~>1000,≤30000～近底5層，網(wǎng)口面積小于0.5m20～100,100～200,200～500,500～1000(1000m以深視水深決定是否繼續(xù)加采，每1000m加采一層)0～近底5層，網(wǎng)口面積小于0.5m20～50,50～100,100～200,200～500,500～近底注1:具有9層采樣網(wǎng)的分層拖網(wǎng)適用于大、中型浮游動(dòng)物調(diào)查；具有5層采樣網(wǎng)的分層拖網(wǎng)適用于以橈足類為主的中型浮游動(dòng)物調(diào)查。注2:當(dāng)聚焦于0m～1000m水層的大、中型浮游動(dòng)物調(diào)查時(shí)，可以將最大采樣深度設(shè)置為1000m,其他依據(jù)拖網(wǎng)類型采用上述第三種或第六種水層設(shè)計(jì)方案。調(diào)查要素包括大、中型浮游生物的種類組成，生物量和豐度。10.2樣品采集采樣設(shè)備要求如下。a)網(wǎng)具：根據(jù)不同的采樣方式選用大洋浮游動(dòng)物網(wǎng)、大洋雙鼓網(wǎng)或多聯(lián)浮游生物分層拖網(wǎng)(表2)。b)網(wǎng)底管：網(wǎng)底管套的篩絹與網(wǎng)衣篩絹的孔徑應(yīng)相同。c)流量計(jì)：流量計(jì)安裝方法同9.2.1。d)絞車及鋼纜：絞車變速范圍為0.1m/s～1m/s,并附有排纜裝置和鋼纜計(jì)數(shù)器。e)吊桿：吊桿高度大于5m,負(fù)荷大于2000kg,吊桿離舷間距1m左右并能調(diào)節(jié)位置。f)沖水設(shè)備：用于沖洗收集粘貼在網(wǎng)衣或網(wǎng)底管篩絹上的標(biāo)本。根據(jù)調(diào)查項(xiàng)目、站數(shù)、層次計(jì)算樣品數(shù)量，配以足量的樣品瓶、相應(yīng)的固定劑及其他器材。為了防止浮游軟體動(dòng)物等鈣質(zhì)外殼的溶解，應(yīng)使用緩沖甲醛溶液。按9.2.2的規(guī)定進(jìn)行。10.2.3海上采樣與樣品保存海上采樣要求如下。a)大洋雙鼓網(wǎng)傾斜拖曳：絞車速度為0.5m/s,船速為1.5kn～2kn。b)大洋浮游動(dòng)物網(wǎng)垂直拖曳：絞車速度為0.5m/s～1.0m/s。c)多聯(lián)浮游生物分層拖網(wǎng)：傾斜拖曳時(shí)，絞車速度為0.5m/s,船速為1.5kn～2kn;垂直拖曳時(shí)，絞車速度為0.5m/s～1.0m/s。d)記錄于浮游生物海上采樣記錄表和浮游生物分層拖網(wǎng)采樣記錄表，記錄表按表A.13和表A.17的規(guī)定。樣品用緩沖甲醛溶液固定，加入量為樣品體積的5%。需進(jìn)行電鏡觀察的樣品，用戊二醛固定，加入量為樣品體積的2%～5%。需進(jìn)行分子生物學(xué)分析的樣品，用無水乙醇固定，并保持最終保存液中乙醇濃度不低于70%。各類樣品須有總編號(hào)?？偩幪?hào)由代表采樣海區(qū)、網(wǎng)具與采樣方式、采樣年份和樣品序號(hào)等內(nèi)容的代號(hào)依次組成，每份貯存樣品的瓶外須貼有總編號(hào)的外標(biāo)簽，瓶?jī)?nèi)須放有總編號(hào)、站號(hào)和采樣日期等內(nèi)容的內(nèi)標(biāo)簽，填寫在浮游生物拖網(wǎng)樣品登記表，記錄表按表A.18的規(guī)定。10.3.3樣品生物量測(cè)定與鑒定計(jì)數(shù)將樣品倒入浮游動(dòng)物鑒定計(jì)數(shù)框中，在體視顯微鏡下進(jìn)行種類鑒定和計(jì)數(shù)。如果樣品數(shù)量大，可先挑出個(gè)體較大的大型甲殼動(dòng)物、箭蟲、水母和被囊類等全部計(jì)數(shù)，其余樣品用浮游動(dòng)物分樣器取樣鑒定、計(jì)數(shù)，結(jié)果記錄于大、中型浮游生物個(gè)體計(jì)數(shù)記錄表，記錄表按表A.19的規(guī)定。測(cè)定步驟如下。a)去除樣品中的雜物，但保留水母和被囊類等膠質(zhì)生物；如果樣品中存在體長(zhǎng)超過20mm且單一標(biāo)本占據(jù)超過20%的總生物量比例時(shí)(如存在火體蟲等),則需分別稱量和記錄去除前和去除后的濕重生物量。b)取孔徑略小于采樣網(wǎng)孔的篩絹，剪成與漏斗內(nèi)徑相同的圓塊，用水浸濕并用濾紙吸干后，用電子天平(天平分度值0.001g)稱重，記錄該篩絹的標(biāo)定重量。c)將已標(biāo)定重量的篩絹浸濕鋪于漏斗中，倒入待測(cè)樣品后抽濾片刻，至樣品表面沒有明顯水分時(shí)停止抽濾。d)移出載有樣品的篩絹至濾紙上吸干篩絹底表的水分。e)用電子天平稱重，從總重量中減去篩絹重量即得樣品濕重，測(cè)定結(jié)果記錄于大、中型浮游生物濕重生物量測(cè)定記錄表，記錄表按表A.20的規(guī)定。按照GB/T12763.6—2007中8.4.1和8.4.2的相關(guān)規(guī)定計(jì)算大、中型浮游生物濕重生物量和豐度。根據(jù)編寫報(bào)告的要求和規(guī)定將上述分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的結(jié)果填入大、中型浮游生物濕重生物量測(cè)定記錄表(記錄表按表A.20的規(guī)定)和大、中型浮游生物數(shù)量統(tǒng)計(jì)表(記錄表按表A.21的規(guī)定)。平面分布圖一般用等值線表示，測(cè)站稀少或測(cè)站不連續(xù)時(shí)可用不同等級(jí)的圓圈或符號(hào)表示。取值標(biāo)準(zhǔn)如下。a)浮游動(dòng)物濕重生物量(單位：mg/m3)0.1,0.5,1,2.5,5,10,25,50,100,>100。b)浮游動(dòng)物總豐度為(單位：ind./m3)5,10,25,50,100,250,500,>500。c)浮游動(dòng)物主要種或主要類別的豐度為(單位：ind./m3)1,5,10,25,50,100,250,500,>500。d)以上取值標(biāo)準(zhǔn)，可視具體情況酌情調(diào)整。11魚類浮游生物11.1技術(shù)要求和調(diào)查要素技術(shù)要求和調(diào)查要素按照GB/T12763.6—2007中9.1的相關(guān)要求執(zhí)行。采樣設(shè)備要求如下。a)網(wǎng)具：采用大洋浮游動(dòng)物網(wǎng)垂直取樣或用大洋雙鼓網(wǎng)傾斜取樣。b)網(wǎng)底管：網(wǎng)底管套的篩絹與網(wǎng)衣篩絹的孔徑應(yīng)相同。c)流量計(jì)：流量計(jì)安裝方法見9.2.1。d)絞車及鋼纜：絞車變速范圍為0.3m/s～1m/s,并附有排纜裝置和鋼纜計(jì)數(shù)器。e)吊桿：高度大于5m,負(fù)荷大于2000kg,吊桿離舷間距1m左右，并能調(diào)節(jié)位置。f)沖水設(shè)備：用于沖洗收集粘貼在網(wǎng)衣或網(wǎng)底管篩絹上的標(biāo)本。按10.2.2的規(guī)定進(jìn)行。11.2.3海上采樣與樣品保存按照GB/T12763.6—2007中9.2.2的相關(guān)要求采集樣品。形態(tài)鑒定樣品用緩沖甲醛溶液固定保存，加入量為樣品體積的5%;分子分析樣品用95%乙醇固定保存，按表A.22的規(guī)定做好采樣記錄。按照GB/T12763.6—2007中9.3的相關(guān)要求分析樣品，分析結(jié)果記錄于魚類浮游生物計(jì)數(shù)記錄按照GB/T12763.6—2007中9.4.1的相關(guān)要求整理計(jì)算魚類浮游生物豐度。根據(jù)編寫報(bào)告的要求和規(guī)定將上述分析統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的結(jié)果填入表A.23。平面分布圖一般用等值線表示，測(cè)站稀少或測(cè)站不連續(xù)時(shí)可用不同等級(jí)的圓圈或符號(hào)表示。取值標(biāo)準(zhǔn)如下。a)魚卵和仔、稚魚總豐度為(單位：ind./m3或ind./100m3)1,5,10b)魚卵或仔、稚魚主要科、屬或種的豐度(單位：ind./m3或ind./100m3)1,5,10,25,50,100,12巨型底棲動(dòng)物12.1技術(shù)要求和調(diào)查要素技術(shù)要求如下：a)采樣設(shè)備包括三角拖網(wǎng)、底棲生物撬網(wǎng)、HOV、ROV和lander等，依生境不同采取不同采樣設(shè)備；b)生物視像資料應(yīng)使用深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)、HOV、ROV、AUV和lander等設(shè)備采集；c)調(diào)查設(shè)備應(yīng)具有水下定位信標(biāo)、激光標(biāo)尺和離底高度計(jì)等傳感器，宜掛載溫度、鹽度、溶解氧、pH傳感器等環(huán)境傳感器。調(diào)查要素包括巨型底棲動(dòng)物種類、生物量和多樣性。12.2樣品(資料)采集主要儀器設(shè)備及要求如下。a)三角拖網(wǎng)：適用于坡度小于5°的地形。網(wǎng)口寬度250cm。主網(wǎng)網(wǎng)衣孔徑前部1/3為2cm、中部1/3為1.5cm、后部1/3為1cm,主網(wǎng)網(wǎng)長(zhǎng)450cm。襯網(wǎng)網(wǎng)衣孔徑4cm,襯網(wǎng)網(wǎng)長(zhǎng)250cm。b)底棲生物撬網(wǎng)：適用于坡度小于5°的地形采集巨型底棲動(dòng)物。網(wǎng)口寬度為1m～1.5m,網(wǎng)衣孔徑為0.25mm或0.5mm。c)HOV和ROV:具有7功能操作手和虹吸取樣器，具有高清光學(xué)設(shè)備(照相機(jī)和攝像機(jī))、高精度水下定位功能、生物樣品框和激光標(biāo)尺。d)AUV:具有高清光學(xué)設(shè)備(照相機(jī)或攝像機(jī))、高精度水下定位功能和激光標(biāo)尺。e)lander:具有高清光學(xué)設(shè)備(照相機(jī)或攝像機(jī))、生物誘捕器等。f)深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)：具有高清光學(xué)設(shè)備(照相機(jī)或攝像機(jī))。12.2.2海上采樣和樣品保存12.2.2.1三角拖網(wǎng)或底棲生物撬網(wǎng)采樣采樣要求如下。a)通過絞車張力監(jiān)控系統(tǒng)監(jiān)控拖網(wǎng)狀態(tài)，待拖網(wǎng)著底后開始拖曳，拖曳過程航速不大于2kn,拖曳時(shí)間不少于30min。b)拖網(wǎng)返回甲板后，用鑷子將生物樣品轉(zhuǎn)移至托盤中，用低溫(0℃~4℃)過濾(250μm網(wǎng)篩過濾)海水沖洗去除生物樣品上附著的雜質(zhì)，放入標(biāo)尺及站位號(hào)牌后，從正面和側(cè)面兩個(gè)不同角度對(duì)樣品進(jìn)行拍照。c)將樣品按類別、個(gè)體大小、柔軟脆弱和堅(jiān)硬等特征分別登記裝瓶記錄，記錄表按表A.24的規(guī)定，使用體積分?jǐn)?shù)為8%～10%緩沖甲醛溶液或體積分?jǐn)?shù)為75%及以上的乙醇溶液固定保存；條件允許時(shí)，樣品應(yīng)取部分組織樣于超低溫(一80℃)、液氮或一20℃條件下保存。采樣要求及步驟如下：a)HOV和ROV水下調(diào)查一般沿環(huán)境梯度設(shè)計(jì)測(cè)線，熱液和冷泉等特殊生境根據(jù)具體需求設(shè)計(jì)調(diào)查測(cè)線；b)采樣主要使用機(jī)械手、虹吸取樣器等采樣裝置，在水下將樣品放置于生物樣品框內(nèi)，采樣目標(biāo)和數(shù)量根據(jù)工作設(shè)計(jì)決定，采樣期間應(yīng)記錄好每個(gè)生物樣品的準(zhǔn)確采樣時(shí)間；c)樣品返回甲板后處理方式同拖網(wǎng)，采樣信息登記于表A.25;d)海底視像資料由高清照相機(jī)和攝像機(jī)同步采集，照相機(jī)根據(jù)水下觀察情況進(jìn)行拍照采樣，攝像機(jī)在水下作業(yè)過程中應(yīng)全程保持工作狀態(tài)。12.2.2.3深海著陸器(lander)采樣和視像采集采集要求如下：a)樣品由誘捕器(誘捕管或誘捕籠)采集；b)樣品返回甲板后現(xiàn)場(chǎng)處理和保存要求按12.2.2.1c)的要求進(jìn)行；c)海底視像由高清照相機(jī)或攝像機(jī)采集，照相機(jī)或攝像機(jī)根據(jù)調(diào)查需求設(shè)置采樣頻率。12.2.3AUV和深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)AUV和深海拖曳式光學(xué)觀測(cè)系統(tǒng)操作要求如下：a)作業(yè)過程航速≤2kn;b)進(jìn)入作業(yè)高度以后開啟錄像和照相功能，拍攝離底高度以3m左右為宜；c)水下作業(yè)過程中每5min～10min記錄一次觀測(cè)到的生物和地形特征，特殊現(xiàn)象要隨時(shí)記錄于表A.26;d)照相設(shè)置不大于每30s拍照一次或進(jìn)行手動(dòng)拍照。12.3樣品(資料)分析樣品返回甲板后，應(yīng)認(rèn)真檢查樣品，并做好記錄和標(biāo)示。回陸上實(shí)驗(yàn)室后，樣品按下列步驟處理：a)標(biāo)本分離按站進(jìn)行，并進(jìn)一步清除樣品內(nèi)的殘留雜質(zhì)；b)在體式顯微鏡下鑒定生物樣品種類，物種鑒定應(yīng)到最佳分類水平；c)經(jīng)鑒定的樣品以種為單位分裝并填寫記錄表，記錄表按表A.27的規(guī)定。測(cè)定要求如下。a)利用三角拖網(wǎng)或底棲生物撬網(wǎng)采集的巨型底棲動(dòng)物應(yīng)測(cè)定其生物量。b)生物量以濕重計(jì)，將生物用濾紙吸干后用電子天平稱重，并記錄巨型底棲動(dòng)物定量分析記錄c)個(gè)體大、數(shù)量多的軟體動(dòng)物的殼和肉分別稱濕重。管棲動(dòng)物應(yīng)剝?nèi)ス茏?小管可保留),寄居蟹應(yīng)去螺殼稱重，軟體動(dòng)物一般不去貝殼，但需吸盡殼表水分。調(diào)查船返航后，應(yīng)認(rèn)真核對(duì)視像資料，檢查并規(guī)范視像資料文件名，并登記統(tǒng)一管理。圖像分析按下列步驟處理：a)重新查看錄像資料，記錄巨型底棲動(dòng)物出現(xiàn)頻率和數(shù)量，為視頻中出現(xiàn)的底棲動(dòng)物提供分類學(xué)信息，針對(duì)不同類群進(jìn)行單獨(dú)記錄，記錄表按表A.28的規(guī)定；b)整理包含巨型底棲動(dòng)物的視像資料，選擇拍攝角度和清晰度合適的照片進(jìn)行種類鑒定，鑒定到最佳分類水平。記錄巨型底棲動(dòng)物定性分析種類分布記錄表，記錄表按表A.29的規(guī)定。按分類系統(tǒng)順序，列出調(diào)查海區(qū)巨型底棲動(dòng)物種類名錄表，包括中文名和拉丁名。13大型底棲動(dòng)物13.1技術(shù)要求和調(diào)查要素技術(shù)要求如下。a)采樣面積：每站不小于0.25m2。c)濕重生物量測(cè)定精密度：±0.01g。d)種類鑒定計(jì)數(shù)：按種計(jì)數(shù)。包括大型底棲動(dòng)物的豐度、生物量和群落結(jié)構(gòu)。設(shè)備要求如下。a)箱式取樣器：采樣箱體尺寸≥500mm(長(zhǎng))×500mm(寬)×500mm(高)(面積≥0.25m2),條件允許時(shí)，以使用電視箱式取樣器為佳。b)鋼纜及絞車系統(tǒng)：采用萬米纜，條件允許時(shí)，以使用萬米光纜或鎧裝電纜為佳?，F(xiàn)場(chǎng)沉積物樣品按如下步驟處理：a)將箱式取樣器中的表層水虹吸到孔徑為250μm篩子中，以濾取可能被向上卷起的底棲生物；b)放入標(biāo)尺及站位號(hào)牌后，從正面和側(cè)面兩個(gè)不同角度對(duì)樣品表面進(jìn)行照相，并記錄表層沉積物特征；c)取出表層可見的大型動(dòng)物、結(jié)核等，用過濾低溫海水沖洗生物和結(jié)核表面，以除去粘附的沉積物，沖洗后的海水經(jīng)250μm網(wǎng)篩淘洗，殘留物裝瓶，貼上標(biāo)簽后保存；d)箱式取樣器中的沉積物宜按(0～3)cm、(3～5)cm和(5～10)cm分為3層，利用洗泥器加入低e)10cm以上層次取樣結(jié)束后，再用鏟子檢查下層沉積物中是否還有大型底棲動(dòng)物。暫時(shí)性保存樣品使用8%～10%緩沖甲醛溶液保存，用于分子生物學(xué)分析和永久性保存的樣品應(yīng)使用體積分?jǐn)?shù)不小于75%的乙醇溶液保存。GB/T42629.3—2023每站采樣結(jié)束，應(yīng)立即填寫大型底棲動(dòng)物定量(采泥)取樣記錄表，記錄表按表A.30的規(guī)定，13.3樣品分析13.3.1樣品核對(duì)與登記調(diào)查船返航后，應(yīng)認(rèn)真核對(duì)樣品和采樣記錄是否相符。若發(fā)現(xiàn)標(biāo)簽損壞和不清，應(yīng)與原始記錄核對(duì)，并更換標(biāo)簽做好登記。13.3.2.1樣品挑選樣品運(yùn)回陸上實(shí)驗(yàn)室后，按下列步驟處理：a)將每站不同層次的沉積物樣，分別放在250μm的套篩上用水輕輕地沖洗，然后把套篩篩網(wǎng)上的樣品(殘留物)浸入盛有0.1%虎紅(四氯四碘熒光素鈉鹽)溶液的染色缸中，染色1h:b)用蒸餾水沖洗已染色的標(biāo)本，至沖洗水的顏色變淺為止；c)在體視顯微鏡下將沉積物樣中的大型底棲動(dòng)物標(biāo)本逐個(gè)挑出。13.3.2.2鑒定和計(jì)數(shù)鑒定和計(jì)數(shù)要求如下：a)在高倍體視顯微鏡下對(duì)大型底棲動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行觀察、鑒定和計(jì)數(shù)，鑒定結(jié)果記錄于大型底棲動(dòng)物定量分析記錄表，記錄表按表A.31的規(guī)定；b)鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)某號(hào)樣品中出現(xiàn)兩種以上，應(yīng)立即分開，另編新號(hào)，并及時(shí)填寫相應(yīng)記錄表，同時(shí)投放鑒定標(biāo)簽；c)易斷的紐蟲、環(huán)節(jié)動(dòng)物按頭部計(jì)數(shù)；軟體動(dòng)物的死殼不計(jì)數(shù)；數(shù)量大時(shí)，可取其中一部分稱重計(jì)13.3.2.3測(cè)定濕重生物量測(cè)定要求如下：a)管棲動(dòng)物應(yīng)剝?nèi)ス茏?小管可保留),寄居蟹應(yīng)去螺殼稱重，軟體動(dòng)物一般不去貝殼，但需吸盡殼表水分；b)個(gè)體大、數(shù)量多的軟體動(dòng)物的殼和肉分別稱濕重；c)有孔蟲、石珊瑚和部分鈣質(zhì)苔蘚蟲不計(jì)重。13.4資料整理13.4.1豐度計(jì)算大型底棲生物豐度按公式(14)計(jì)算。式中：……………C——單位面積沉積物中大型底棲動(dòng)物豐度，單位為個(gè)每平方米(ind./m2);GB/T42629.3—2023Ng——大型底棲動(dòng)物個(gè)數(shù)，單位為個(gè)(ind.);A——采樣面積，單位為平方米(m2)。13.4.2濕重生物量大型底棲生物濕重生物量按公式(15)計(jì)算。式中：P單位面積沉積物中大型底棲動(dòng)物濕重生物量，單位為毫克每平方米(mg/m2);mg——大型底棲動(dòng)物濕重，單位為毫克(mg);A—-采樣面積，單位為平方米(m2)。13.4.3填寫報(bào)表定量沉積物樣分析所得種類或類群的豐度和濕重生物量記錄于大型底棲動(dòng)物定量分析種類分布記錄表(表A.32)。13.4.4繪制分布圖繪制分布圖要求如下。a)豐度分布圖一般以等值線或不同大小的圓圈表示，豐度(ind./m2)的取值標(biāo)準(zhǔn)：1,5,10,25,50,100,>100;以上取值標(biāo)準(zhǔn)，可視具體情況酌情調(diào)整。b)濕重生物量分布圖，一般以等值線或不同大小的圓圈表示，濕重生物量(mg/m2)取值標(biāo)準(zhǔn)：1,10,25,50,100,250,500,>500;以上取值標(biāo)準(zhǔn)，可視具體情況酌情調(diào)整。c)主要種類分布圖：選擇對(duì)總豐度和總生物量，或?qū)Ω黝惾贺S度和生物量起決定作用和分布普遍的種類，繪制主要種類的豐度和濕重生物量分布圖。13.4.5種類名錄表按分類系統(tǒng)順序，列出調(diào)查海區(qū)大型底棲動(dòng)物種類名錄表。14小型底棲后生動(dòng)物14.1技術(shù)要求和調(diào)查要素14.1.1技術(shù)要求技術(shù)要求如下：a)從多管取樣器取芯樣，應(yīng)是未受擾動(dòng)的沉積物樣品；b)每站至少取3