藥物的雜質檢查-藥物特殊雜質檢查（藥物制劑檢查課件）

藥物特殊雜質檢查—利用藥物和雜質在吸附或分配性質上的差異一、色譜法知識點目錄薄層色譜法紙色譜法高效液相色譜法氣相色譜法色譜法利用吸附或分配性質的差異藥物中的一些雜質，如反應中間體、副產(chǎn)物、分解產(chǎn)物等，和藥物的結構相近，與某些試劑的反應也相同或相似，必須分離后再檢查。由于色譜法可以利用藥物和雜質吸附或分配性質的差異，將它們分離、檢測，因而廣泛應用于藥物的雜質檢查中。色譜法薄層色譜法紙色譜法高效液相色譜法氣相色譜法薄層色譜法簡便、快速，靈敏度也比較高，又不需要特殊設備，在雜質檢查中應用很多。常用的方法有如下幾種：1、薄層色譜法雜質對照品法1適用于已知雜質并能制備雜質對照品的情況。適用于雜質結構不能確定，或無雜質對照品的情況。要求供試品與所檢查雜質對顯色劑所顯顏色應相同，顯色靈敏度也相同或相近。對照藥物法3供試品自身對照法2當無合適的雜質對照品，尤其是供試品顯示的雜質斑點顏色與主成分斑點顏色有差異，難以判斷限量時，可用與供試品相同的藥物作為對照品，此對照藥物中所含待檢雜質需符合限量要求，且穩(wěn)定性好。薄層色譜法基本操作

常用于極性較大物質的分離、分析，如地高辛中的有關雜質的檢查。紙色譜法較薄層色譜法展開時間長，斑點較擴散，不能用于強酸等腐蝕性顯色劑，因而應用不如薄層色譜法廣泛。2、紙色譜法不僅分離效能高，而且可以準確地測定各組分的峰面積，在雜質檢查中應用日益增多，特別是已使用高效液相色譜法測定含量的藥物，可采用同一色譜條件進行雜質檢查。3、高效液相色譜法分離原理計算各雜質峰面積的和占總峰面積的百分率，不能超過限度。公式：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%檢查中應注意的問題：溶劑峰不應計算在總峰面積內(nèi)；誤差大，通常只用于粗略考查供試品中的雜質含量。

峰面積歸一化法1測定方法有以下幾種：當雜質峰面積與主成分峰面積相差懸殊時，可采用主成分自身對照法。

檢查時：將供試溶液稀釋成一定濃度作為對照溶液，分別取供試溶液和對照溶液進樣分析，供試溶液中各雜質峰面積及其總和與對照溶液主成分峰面積進行比較，控制供試品中雜質的限量。判斷：對照品液為供試品的稀釋液，進樣測得A主供試品液進樣測得∑Ai

其∑Ai＜A主即為合格.不加校正因子的主成分自身對照法2將供試溶液稀釋成與雜質限度相當濃度作為對照溶液，分別取供試溶液和對照溶液進樣分析，供試液中各雜質峰面積總和與校正因子相乘后與對照溶液主成分峰面積比較，計算供試品中雜質的含量。加校正因子的主成分自身對照法3配內(nèi)標溶液+雜質對照溶液作為校正因子測定液，測定內(nèi)標和雜質的峰高或峰面積，計算校正因子。計算對照品+內(nèi)標：進樣求校正因子公式1：（f)=(As/Cs)/(AR/CR)供試品+內(nèi)標：進樣求CX公式2：雜質濃度CX=f×AX/(AS/CS)內(nèi)標法測定樣品中雜質的總量限度4分別取供試溶液和對照溶液進樣分析，測量對照溶液和供試溶液中待測成分的峰面積，按下式計算含量：CX=CR×

AX/AR

本法由于微量注射器不易精確控制進樣量，應采用定量環(huán)或自動進樣器進樣。外標法測定供試品中某個雜質限量5

主要用于藥物中揮發(fā)性的雜質檢查，其檢查方法與HPLC法相同。4、氣相色譜法（GC）藥物特殊雜質檢查—利用藥物和雜質物理性質上的差異（一）一、目錄顏色的差異氣味及揮發(fā)性的差異溶解性的差異旋光性的差異藥物和雜質在物理性質上的差異對光選擇性的吸收差異藥物特殊雜質檢查藥物除檢查一般雜質外，還需檢查可能存在的特殊雜質。

藥物中特殊雜質的檢查，主要根據(jù)藥物和雜質在物理和化學性質上的差異來進行，方法的專屬性十分關鍵。不同的藥物，由于其合成工藝、原料和結構性能等不同，在生成和貯藏過程中可能引入特殊雜質。某些藥物自身無色，但從生產(chǎn)中引入了有色的物質，或其分解產(chǎn)物有顏色，采用檢查供試品溶液顏色的方法，可以控制藥物中有色雜質的量。（一）顏色的差異磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10mL溶解后，加水至25mL，應澄清無色；如顯色，與黃色3號標準比色液比較，不得更深。舉例

1.藥物中如存在具有特殊氣味的雜質，可以由氣味判斷該雜質的存在。（二）氣味及揮發(fā)性的差異黃凡士林中異性有機物檢查：異性有機物主要是指非烴類有機物，利用其灼燒時產(chǎn)生異味可檢查黃凡士林精制的程度。舉例

2.對于乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、濃過氧化氫溶液等揮發(fā)性藥物中所含不揮發(fā)性雜質的檢查，一般步驟為：先將供試品水浴加熱，使藥物揮發(fā)，再將殘渣于105℃烘至恒重，稱量。規(guī)定：稱得的質量不得超過一定值。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質檢查：取本品15mL，置水浴蒸干，于105℃烘至恒重，規(guī)定殘渣＜15mg。舉例（二）氣味及揮發(fā)性的差異有的藥物可溶于水、有機溶劑或酸堿中，而其雜質不溶；反之，雜質可溶而藥物不溶。利用藥物和其雜質溶解行為的差異，可對多種藥物進行雜質檢查。（三）溶解性的差異

吡哌酸在堿溶液中易溶，其雜質雙吡哌酸甲酯（I）和吡哌酸甲酯（II）為堿中不溶物。選用氫氧化鈉作為溶劑，控制供試品溶液的澄清度，可控制雜質的量。舉例比旋度的數(shù)值可以用來反映藥物的純度，限定雜質的含量。因為藥物和雜質的比旋度可有很大差異。（四）旋光性的差異

《中國藥典》（2010版）規(guī)定黃體酮在乙醇中的比旋度為＋186°～＋198°,如供試品的測定值不在此范圍，則表明其純度不符合要求。

舉例（五）對光選擇性的吸收差異若藥物和雜質對光的吸收存在著顯著差異，可利用這些差異對藥物中存在的雜質及其量加以控制。分光光度法紫外分光光度法原子吸收分光光度法紅外分光光度法熒光分析法（1）當雜質在某一波長處有最大吸收，而藥物在此無吸收，可以通過控制供試品溶液在此波長處的吸光度來控制雜質的量。1、紫外分光光度法地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查：規(guī)定0.01%的地蒽酚氯仿溶液在432nm波長處的吸光度不得超過0.12，即可控制雜質二羥基蒽醌的量不大于2.0%。舉例（2）有的雜質紫外吸收光譜與藥物的紫外吸收光譜重疊，可以通過控制供試品溶液的吸光度比值來控制雜質的量。1、紫外分光光度法苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸光度比值來控制雜質;純品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%時A247nm/A258nm=0.79;因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.舉例是通過測定藥物中所含待檢元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長光的程度，以求出藥物中待檢元素含量的方法。靈敏度高，專屬性強，主要用于金屬元素的測定。2、原子吸收分光光度法紅外分光光度法在雜質檢查中主要用于藥物中無效或低效晶型的檢查。3、紅外分光光度法甲苯咪唑中無效A晶型的檢查：A晶型C晶型在640cm-1

有強吸收吸收很弱在662cm-1

吸收很弱有強吸收舉例某些物質受紫外光或可見光照射后能發(fā)射出比激發(fā)光波長長的熒光。利用物質的激發(fā)和發(fā)射光譜，對物質進行分析的方法即為熒光分析法。4、熒光分析法

利血平中氧化產(chǎn)物檢查：利血平(無熒光)3,4-二去氫利血平(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平(II)(藍色熒光)

舉例藥物特殊雜質檢查—利用藥物和雜質在化學性質上的差異一、目錄酸堿性的差異氧化還原性質的差異雜質產(chǎn)生沉淀的反應雜質產(chǎn)生有色物質的反應雜質產(chǎn)生氣體的反應氰化物的檢查藥物和雜質在化學性質上的差異若雜質具有酸、堿性，可采用如下方法檢查。（一）酸堿性的差異規(guī)定消耗滴定液的體積1如己酸羥孕酮中正己酸酐、對甲苯磺酸的檢查：取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚藍指示液，用NaOH滴定液（0.02mol/L）滴定至顯微藍色，消耗NaOH滴定液不得超過0.50mL。pH法2如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢查：取本品0.10g+水10mL，以玻璃電極為指示電極，用酸度計進行測定，pH應為3.0～4.5。指示劑法3如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液加甲基橙指示劑不得顯紅色來控制該雜志。利用藥物與雜質之間氧化還原電位的差異進行檢查。（二）氧化還原性質的差異①NaCl中I-檢查：于供試品中加入淀粉混合液（

內(nèi)含NaNO2+H2SO4

），置日光下觀察，若含碘化物則被亞硝酸氧化析出碘而與淀粉顯藍色。②鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的限量檢查：由于后者可被碘氧化生成水溶性綠色化合物。因此ChP規(guī)定：本品50mg+4mLH2O+碳酸氫鈉0.1g+1滴碘溶液+5mL乙醚，振搖提取，分層后，乙醚層不得顯紅色，水層不得顯綠色。舉例利用藥物中存在的雜質能與一定試劑發(fā)生沉淀反應而檢查雜質的方法，簡單，快速，在藥物的質量控制中應用示例較多。（三）雜質產(chǎn)生沉淀的反應如檢查氯化鈉中鋇鹽的方法：取供試品4.0g，加水20mL溶解后濾過，濾液分為兩等份，一份中加稀硫酸2mL，另一份加水2mL，靜置15min，兩液應同樣澄清。舉例這類方法是根據(jù)限量要求，規(guī)定：一定反應條件下不得產(chǎn)生某種顏色；或供試品在相同條件下呈現(xiàn)的顏色不得超過雜質對照品相應顏色；或供試品在一定條件下的吸光度不得超過一定值。（四）雜質產(chǎn)生有顏色物質的反應鹽酸普萘洛爾中游離α-萘酚檢查：利用后者可與重氮鹽發(fā)生重氮化-偶合反應，生成偶氮染料。

ChP規(guī)定：供試品20mg+乙醇與10%NaOH液各2mL+重氮苯磺酸試液1mL，放置3min；如顯色，與0.3mLα-萘酚對照液(20μg/mL)比較不得更深。舉例（五）雜質產(chǎn)生氣體的反應利用與一定試劑反應產(chǎn)生氣體，來檢查的雜質有砷、硫、碳酸鹽、氨或胺鹽、氰化物等。氧化鎂中碳酸鹽的檢查：基于有碳酸鹽存在時，加醋酸即可生成醋酸鎂和二氧化碳的特性，規(guī)定：取供試品0.1g，加水5mL，煮沸，放冷，加醋酸5mL，不得泡沸。舉例