QB-T5482-2020化學(xué)消毒劑與殺菌劑基本消毒活性試驗(yàn)方法和要求

B中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)基本消毒活性試驗(yàn)方法和要求中華人民共和國工業(yè)和信息化部發(fā)布1化學(xué)消毒劑與殺菌劑基本消毒活性試驗(yàn)方法和要求SN/T1538.2培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南2 應(yīng)用相同的溫度(36℃或37℃)。 6.2.6洗液(用于膜過濾法)37.1通則使用下列方法的一種，對所有的玻璃儀器和能接觸到培養(yǎng)基和試劑或樣品的 干熱滅菌法，用于熱滅菌器對于濕熱滅菌法，高壓滅菌鍋在(121#3)℃下最短保留時(shí)間為15min.對于干熱滅菌法，干熱滅菌器在(180±5)℃下最短保留時(shí)間為30min,或在(170±5)℃下最短保留時(shí)間為1h,或在(160±5)℃下最短保留時(shí)間為2h。能控制在(20±1)℃、(45±1)℃(用以保持溶化的TSA可傾注于平皿)以及增加的試驗(yàn)溫度7.2.3培養(yǎng)箱能控制在(36±1)℃或(37=1)℃。(20±1)℃下，精度為0.1pH。由與待過濾的物質(zhì)相符的材料組成，應(yīng)配備容積不小于50mL的接液器。直徑為47mm~50mm,能提供穩(wěn)定的過濾流量，在20s~40s得到100mL過濾液，使微生物均勻分布在膜上。能控制在2℃~8℃。0.1mL、1mL和10mL,或帶有刻度的自動(dòng)吸管或數(shù)字直徑為90mm～100mm,帶8.1試驗(yàn)菌懸液4制備試驗(yàn)菌及其母代培養(yǎng)物，應(yīng)符合微生物保藏傳代要求。為制備試驗(yàn)菌的工作培養(yǎng)物，籽源于母代培養(yǎng)物接種于TSA斜面或平皿，并培養(yǎng)得到第1代培養(yǎng)物。18h～24h后，用同樣的方法由第1代培養(yǎng)物制備第2代培養(yǎng)物，并培養(yǎng)18h～24h。以同樣的方法，由第2代培養(yǎng)物制備第3代培養(yǎng)物。第2代和第3代培養(yǎng)物為工作培養(yǎng)物。若在特定時(shí)間未得到第2代培養(yǎng)物，在隨后的傳代中可采用48h的培養(yǎng)物，即將次培養(yǎng)物保留在8.1.4試驗(yàn)菌懸液(N)接種環(huán)在錐形瓶壁與液面接觸處涂抹以便移出菌，使細(xì)菌分散在稀釋劑中。用機(jī)械振動(dòng)器振搖錐形瓶3min。吸取錐形瓶中的懸液，移至另一試管。用稀釋液調(diào)整懸液中菌數(shù)為1.5×10?CFU/mL～5×108CFU/mL,用任一適用的方法估測其菌落數(shù)。保持懸液恒溫于試驗(yàn)溫度(θ±1)的水浴鍋中，并于2h用分光光度計(jì)調(diào)整菌落數(shù)(波長約620mm,口徑長為10mm的比色管)。每一實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對每一種使用涂布平板法時(shí)，將每份1.0mL樣品涂布于TSA平板(至少兩個(gè))表面培養(yǎng)與計(jì)數(shù)。8.1.5驗(yàn)證菌懸液(N)為便于計(jì)數(shù)，用稀釋劑制備10-1稀釋液，混勻。分取1.0mL樣品，采用傾注平板法或涂布平板法置于(36±1)℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)(48±2)h,計(jì)數(shù)。記錄每一平皿的確切菌落數(shù)，但若計(jì)數(shù)高于330,則記錄>330,確定Vc值。應(yīng)用所給方法，計(jì)算試驗(yàn)菌懸液(N)及驗(yàn)證菌懸液(Nv)的菌落數(shù)。8.2試樣溶液試樣溶液的濃度應(yīng)是所需試驗(yàn)濃度的1.25倍，因?yàn)樵谠囼?yàn)及驗(yàn)證期間，試樣溶液會(huì)被稀釋至80%。用水配制試樣溶液，至少3個(gè)不同濃度，其中包括活性范圍的濃度和非活性范圍的濃度。瓶中，以體積比的形式用水制備隨后的稀釋液(較低的濃度)?，F(xiàn)配試樣溶液，并于2h內(nèi)用于試驗(yàn)。應(yīng)得到物理上均相的制劑，其在整個(gè)程序中應(yīng)是穩(wěn)定的。若5a)作用溫度(以℃表示)必需測試溫度為20℃;增加的溫度可從4℃、10℃或40℃中選擇；b)作用時(shí)間(以min表示)9.2.1常規(guī)條件6混勻，并置于水浴中，恒溫在(20±1)℃。中和10min±10s后，立即混勻，分取兩份1.0的TSA。9.2.4中和劑控制(B)管移至(20±1)℃水浴內(nèi)5min±10s。加入1.0mL驗(yàn)證菌懸液，計(jì)時(shí)，混勻。將試管移至(20±1)℃記錄每一平皿的確切菌落數(shù)，但若計(jì)數(shù)高于330,則記錄>330,并確定Vc值。計(jì)算試驗(yàn)混合物(Na)及證實(shí)試驗(yàn)混合物9.3.2殺菌試驗(yàn)7記錄每一平皿的確切菌落數(shù)，但若計(jì)數(shù)高于165,則記錄>165,確定Vc值。8此限制范圍在14CFU～330CFU之間。對于膜過濾法，最高限制150CFU,允許有10%的偏差即為165最低限制(14)就是以此為依據(jù)的。最低限制僅指樣品(并不指對一個(gè)平皿來計(jì)算),例如，三個(gè)平皿，每1mL樣品分別含3CFU、8CFU以最高限制(330CFU,165CFU)反映了所計(jì)的總菌落數(shù)不準(zhǔn)確，以及因營養(yǎng)物質(zhì)的消耗而生長受根據(jù)含1mL樣品的平皿數(shù)確定并記錄Vc,以便計(jì)算試驗(yàn)菌懸液N,驗(yàn)證菌懸液Nv,和稀釋-中和若用多于一個(gè)含1mL樣品的平皿確定Vc值，則標(biāo)注每一平皿的計(jì)數(shù)。若一個(gè)平皿的計(jì)數(shù)高于330CFU,記錄為>330CFU。若采用多于一個(gè)含1mL樣品的平皿，且其中若Vc值小于14CFU,記錄該數(shù)(按照<14CFU計(jì)算菌落數(shù))。對于膜-過濾法，膜上的數(shù)為Vc值。記錄低于最低限制(14CFU)或高于最高限制(165CFU)的Vc值。除Na之外，僅考慮各個(gè)計(jì)數(shù)限制的Vc值，以進(jìn)一步計(jì)算。試驗(yàn)菌懸液的兩個(gè)稀釋度，用公式(1)計(jì)算出菌落數(shù)的加權(quán)平均值：N——每毫升試驗(yàn)菌懸液所含菌落數(shù)，單位為CFU/mL;C——Vc值總和，單位為CFU;n?——較低稀釋度(10-6)的Vc值的個(gè)數(shù)；n較高稀釋度(10-7)的Vc值的個(gè)數(shù)。將計(jì)算的結(jié)果采用四舍六入五留雙，修約至兩位有效數(shù)字，用科學(xué)計(jì)數(shù)No是每毫升試驗(yàn)混合物在作用時(shí)間開始時(shí)所含菌落數(shù)。Na是每毫升試驗(yàn)混合物在作用時(shí)間結(jié)束后，以及中和或膜過濾之前所含的菌落數(shù)。用公式(2)計(jì)算Na:Na=10c/n…………(2)Na—每毫升試驗(yàn)混合物在作用時(shí)間結(jié)束后，以及中和或膜過濾之前所含的菌落數(shù)，單位為c——Ve值總和，單位為CFU;;9Nv=10c/n………(3)Nvo=cln………(4) (5)10.2方法學(xué)的證實(shí)其商在5與15之間。10.3.4精密度，重復(fù)性a)鑒定試驗(yàn)室級別； ——作用時(shí)間(s); ——識別所用菌種。 g)地點(diǎn)，日期和確認(rèn)簽字。(規(guī)范性附錄) 于(36±1)℃[或(37±1)℃]下培養(yǎng)平皿24h。棄去不可計(jì)數(shù)的平皿，做平皿計(jì)數(shù)，確定每一平皿的3×103CFU/mL菌懸液1.0mL。加菌懸液時(shí)就開始計(jì)時(shí)，混勻，于(20±1)℃水浴鍋內(nèi)保持 冷卻至(45±1)℃的TSA,于(36±1)℃[或(37±1)℃]下培養(yǎng)平皿24h。棄去不可計(jì)數(shù)的平皿， 稀釋至5%(體積分?jǐn)?shù))或0.5%(體積分?jǐn)?shù))的新鮮蛋黃： 含5%(體積分?jǐn)?shù))的新鮮蛋黃；40g/L的吐溫80的0.0025mol/L磷酸鹽緩沖液 含7%(體積分?jǐn)?shù))的脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物；20g/L的卵磷脂；4%(體積分?jǐn)?shù))的吐溫80 含4%(體積分?jǐn)?shù))的脂肪醇環(huán)氧乙烷縮合物；4g/L的卵磷脂的0.0025mol/L磷酸鹽緩沖液 含0.075%(體積分?jǐn)?shù))碘美拉酸(用NaOH調(diào)pH至7) ——含30g/L的吐溫80;30g/L的皂角苷；1g/L的L-組氨酸；1g/L的半胱氨酸的0.0025mol/L