GB∕T 34656-2017 海洋沉積物間隙生物調(diào)查規(guī)范（正式版）

海洋沉積物間隙生物調(diào)查規(guī)范2017-10-14發(fā)布2017-10-14實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布I 引言 2規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14一般規(guī)定 24.1技術(shù)設(shè)計(jì) 24.2調(diào)查的基本要求 24.3采樣 34.4樣品分析 34.5資料整理的基本要求 44.6調(diào)查成果 44.7資料歸檔 54.8質(zhì)量計(jì)劃和質(zhì)量控制 55沉積物調(diào)查 5.1方法概述 55.2技術(shù)要求 55.3樣品采集和保存 65.4理化因子的測(cè)定 65.5沉積物年齡的測(cè)定 65.6沉積物重金屬、有機(jī)污染物和油類(lèi)的測(cè)定 65.7沉積物粒度的測(cè)定 65.8沉積物礦物組分的分析 65.9近海沉積物底質(zhì)類(lèi)型的劃分 65.10深海沉積物類(lèi)型的劃分 75.11沉積物生物組分調(diào)查 75.12資料整理 76懸浮體調(diào)查 6.1方法概述 76.2技術(shù)要求 76.3懸浮體質(zhì)量濃度測(cè)量 86.4懸浮體現(xiàn)場(chǎng)粒度和體積濃度測(cè)量 86.5顆粒有機(jī)碳和有機(jī)氮測(cè)定 96.6資料整理 7有孔蟲(chóng)調(diào)查 7.1方法概述 Ⅱ7.2技術(shù)要求 7.3有孔蟲(chóng)樣品的采集和保存 7.4工具和試劑 7.5有孔蟲(chóng)樣品的處理和分析 7.6資料整理 8介形蟲(chóng)調(diào)查 8.1方法概述 8.2技術(shù)要求 8.3介形蟲(chóng)樣品的采集和保存 8.4工具和試劑 8.5介形蟲(chóng)樣品的處理和分析 8.6資料整理 9放射蟲(chóng)調(diào)查 9.1方法概述 9.2技術(shù)要求 9.3放射蟲(chóng)樣品的采集和保存 9.4工具和試劑 9.5放射蟲(chóng)樣品的處理和分析 9.6資料整理 10沉積硅藻調(diào)查 10.1方法概述 10.2技術(shù)要求 10.3沉積硅藻樣品的采集和保存 10.4工具和試劑 10.5沉積硅藻樣品的處理和分析 10.6資料整理 11顆石藻調(diào)查 11.1方法概述 11.2技術(shù)要求 11.3顆石藻樣品的采集和保存 11.4工具和試劑 11.5顆石藻樣品的處理和分析 11.6資料整理 12沉積孢粉調(diào)查 12.1方法概述 12.2技術(shù)要求 12.3沉積孢粉樣品的采集和保存 12.4工具和試劑 12.5沉積孢粉樣品的處理和分析 12.6資料整理 13底棲病毒調(diào)查 Ⅲ13.1方法概述 13.2技術(shù)要求 13.3底棲病毒樣品的采集和保存 13.4工具和試劑 13.5底棲病毒樣品的處理和分析 13.6資料整理 14底棲微生物調(diào)查 14.1方法概述 14.2技術(shù)要求 14.3底棲微生物樣品的采集和保存 14.4工具和試劑 14.5底棲微生物樣品的處理和分析 14.6資料整理 15底棲微藻調(diào)查 15.1方法概述 15.2技術(shù)要求 15.3底棲微藻樣品的采集和保存 15.4工具和試劑 15.5底棲微藻樣品的處理和分析 15.6資料整理 16底棲原生動(dòng)物調(diào)查 16.1方法概述 16.2技術(shù)要求 16.3底棲原生動(dòng)物樣品的采集和保存 16.4工具和試劑 16.5底棲原生動(dòng)物樣品的處理和分析 16.6資料整理 17小型底棲后生動(dòng)物調(diào)查 17.1方法概述 17.2技術(shù)要求 17.3潮間帶和淺海取樣 17.4深海取樣 17.5小型底棲后生動(dòng)物樣品的處理和分析 17.6資料整理 附錄A(資料性附錄)沉積物生物群落的幾個(gè)主要類(lèi)群圖 附錄B(資料性附錄)沉積物間隙生物調(diào)查的幾種分層取樣設(shè)備圖 附錄C(資料性附錄)樣品標(biāo)簽和幾種采樣記錄表 附錄D(資料性附錄)幾種鏡檢記錄表 附錄E(規(guī)范性附錄)常用群落參數(shù)的計(jì)算 附錄F(規(guī)范性附錄)沉積物三角圖解分類(lèi)圖 附錄G(規(guī)范性附錄)水體測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)觀測(cè)層次表 附錄H(資料性附錄)沉積遺殼處理的沖樣記錄表 附錄I(規(guī)范性附錄)顆石藻調(diào)查的幾個(gè)特征分級(jí)表 附錄J(規(guī)范性附錄)沉積物病毒熒光顯微鏡計(jì)數(shù)流程圖 附錄K(規(guī)范性附錄)微型底棲生物調(diào)查的幾種取樣設(shè)備圖 附錄L(規(guī)范性附錄)微型底棲生物調(diào)查的過(guò)濾裝置和濾膜筐圖 附錄M(規(guī)范性附錄)微型底棲生物調(diào)查的幾個(gè)技術(shù)流程圖 附錄N(規(guī)范性附錄)各種溶液的配方和配制 參考文獻(xiàn) 圖A.1微型底棲生物的幾個(gè)主要類(lèi)群圖 圖A.2小型底棲后生動(dòng)物的幾個(gè)主要類(lèi)群圖 圖B.1推式定量分層取樣器圖 圖B.2搖桿式定量分層取樣器圖 圖E.1微型底棲生物的生物體積計(jì)算公式圖 圖F.1謝帕德(Shepard)碎屑沉積物三角圖解分類(lèi)圖 圖F.2?？?Folk)等碎屑沉積物三角圖解分類(lèi)圖 圖F.3深海沉積物三角圖解分類(lèi)圖 圖J.1沉積物病毒計(jì)數(shù)流程圖 圖K.1VanVeen抓斗式采泥器圖 圖K.2TFO采泥器圖 圖K.3沉積物捕獲器圖 圖L.1真空過(guò)濾系統(tǒng)圖 圖L.2濾膜筐圖 圖M.1底棲微藻和細(xì)菌樣品的截取和過(guò)篩技術(shù)流程圖 圖M.2底棲微藻和細(xì)菌熒光染色技術(shù)流程圖 圖M.3Ludox離心分離技術(shù)流程圖 圖M.4定量蛋白銀染色(QPS)技術(shù)流程圖 圖M.5變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)流程圖 圖M.6克隆文庫(kù)技術(shù)流程圖 表1有孔蟲(chóng)PCR擴(kuò)增引物 表2底棲微生物PCR擴(kuò)增引物 表3底棲微生物高通量測(cè)序擴(kuò)增引物 40表4實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增引物 表C.2采樣記錄表 表C.3小型底棲后生動(dòng)物取樣記錄表 表D.1底棲病毒、細(xì)菌熒光顯微鏡計(jì)數(shù)記錄表 表D.2底棲病毒、細(xì)菌流式細(xì)胞儀測(cè)定記錄表 表D.3微小型底棲動(dòng)物鏡檢記錄表 V表D.4小型底棲后生動(dòng)物計(jì)數(shù)表 表E.1生物量轉(zhuǎn)換系數(shù)表 表G.1水體測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)觀測(cè)層次表 表H.1沖樣記錄表 表I.1顆石保存特征分級(jí)表 表I.2沉積物中所有顆石藻相對(duì)豐度特征分級(jí)表 表N.1f/2培養(yǎng)液的配制表 表N.2SWIⅡ培養(yǎng)基的配制表 表N.3底棲原生動(dòng)物調(diào)查DGGE中的不同濃度的變性溶液配制表 表N.4裂解緩沖液的配制表 VⅡ本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家海洋局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC283)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)科學(xué)院海洋研究所、同濟(jì)大學(xué)、中國(guó)地質(zhì)調(diào)查局青島海洋地質(zhì)研究所、國(guó)家海洋局第一海洋研究所、國(guó)家海洋局第二海洋研究所、國(guó)家海洋局第三海洋研究所、中國(guó)科學(xué)院南海海洋研究所、中國(guó)地質(zhì)大學(xué)(北京)、中國(guó)科學(xué)院南京地質(zhì)古生物研究所、中國(guó)海洋大學(xué)。海洋沉積物間隙生物在三域生物分類(lèi)系統(tǒng)中涵蓋了六個(gè)“界”的生命形式：古菌界、細(xì)菌界、原生動(dòng)深海底棲生態(tài)系統(tǒng)中數(shù)量最多、功能最復(fù)雜的生命類(lèi)群，是維持底棲生命體系運(yùn)行的物質(zhì)基礎(chǔ)和能流關(guān)鍵。海洋沉積物間隙生物通過(guò)常規(guī)的海洋調(diào)查手段不易獲得，本標(biāo)準(zhǔn)的制定是為了填補(bǔ)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T12763《海洋調(diào)查規(guī)范》中缺乏有關(guān)沉積生命體系調(diào)查的規(guī)定。為適應(yīng)現(xiàn)代海洋科技的發(fā)展，完善我國(guó)海洋調(diào)查內(nèi)容，國(guó)家海洋局組織開(kāi)展了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《海洋沉積物間隙生物調(diào)查規(guī)范》的制定，為海洋生物多樣性，海洋戰(zhàn)略性生物資源的發(fā)掘利用，深海資源環(huán)境綜合探測(cè)，生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與評(píng)估、保護(hù)和管理提供理論根據(jù)和技術(shù)支撐。1海洋沉積物間隙生物調(diào)查規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)確定了海洋沉積物間隙生物調(diào)查的基本要求，確立了對(duì)沉積物、懸浮體、有孔蟲(chóng)、介形蟲(chóng)、放物、小型底棲后生動(dòng)物等調(diào)查的一般規(guī)定和方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于海岸帶、淺海和深海等近海和遠(yuǎn)海不同底棲生境的海洋調(diào)查。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T12763.1海洋調(diào)查規(guī)范第1部分：總則GB/T12763.4海洋調(diào)查規(guī)范第4部分：海水化學(xué)要素調(diào)查GB/T12763.6海洋調(diào)查規(guī)范第6部分：海洋生物調(diào)查GB/T12763.8海洋調(diào)查規(guī)范第8部分：海洋地質(zhì)地球物理調(diào)查GB17378.4海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第4部分：海水分析3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。海洋沉積物marinesediment在地殼表層地質(zhì)作用下由母巖(巖漿巖、變質(zhì)巖、先成的沉積巖)的風(fēng)化產(chǎn)物、生物來(lái)源物質(zhì)、火山物質(zhì)、宇宙物質(zhì)等原始物質(zhì)經(jīng)過(guò)搬運(yùn)、沉降或沉淀等作用，在海岸帶或海底基底上呈松散狀未固結(jié)的堆積物。沉積巖sedimentaryrock是組成巖石圈的三大類(lèi)巖石(另外兩種是巖漿巖、變質(zhì)巖)之一，它是在地表表層的條件下，由母巖(或任何先成巖石)的風(fēng)化產(chǎn)物、生物來(lái)源物質(zhì)、火山物質(zhì)、宇宙物質(zhì)等原始物質(zhì)經(jīng)過(guò)搬運(yùn)作用、沉積作用和沉積后成巖作用而形成的巖石。棲息或沉積于沉積物顆粒之間空隙中的所有的底棲生命形式。注：包括海洋微體生物(marinemicroorganism)、底棲病毒(benthicvirus)、微型底棲生物(microbenthos)、微型和小型底棲后生動(dòng)物(micro-andmeiobenthicmetazoa)等。從個(gè)體大小上，海洋沉積物間隙生物涵蓋粒徑小于0.2μm的毫微微型(femto-級(jí)),0.2μm～2μm的超微型(pico-級(jí))、2μm～20μm的微型(nano-級(jí))和大于20μm的微小型(micro-級(jí))的單細(xì)胞底棲生物和小型(meio-級(jí))底棲后生動(dòng)物。2微型底棲生物microbenthos生活于沉積物表面和底內(nèi)的，被0.2μm濾膜截留的所有的單細(xì)胞原核、真核微型生物。注：主要包括底棲細(xì)菌(benthicbacteria)、底棲微藻(benthicmicroalgae)及底棲原生動(dòng)物(benthicprotozoa)等，幾個(gè)主要類(lèi)群參見(jiàn)圖A.1。從個(gè)體大小上，微型底棲生物涵蓋粒徑小于2μm的超微型(pico-級(jí))、2μm～20μm的微型(nano-級(jí))和大于20μm的微小型(micro-級(jí))的底棲生物。底棲原生動(dòng)物benthicprotozoa生活史的全部或大部分時(shí)間與沉積物或水體的基質(zhì)相關(guān)聯(lián)的動(dòng)物性單細(xì)胞真核生物。注：包括異養(yǎng)鞭毛蟲(chóng)(heterotrophicflagellate)、纖毛蟲(chóng)(ciliate)和肉足蟲(chóng)(sarcodina)等。海洋微體生物marinemicroorganism沉積物調(diào)查和海洋地質(zhì)調(diào)查所涉及的微體古生物，也包括各類(lèi)群的現(xiàn)生種類(lèi)。底棲微生物benthicmirobes棲息于水域基底表面或底內(nèi)的一群個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、生理類(lèi)型多樣的單細(xì)胞或多細(xì)胞的低等生物，包括屬于原核生物類(lèi)的細(xì)菌、古菌和屬于真核生物類(lèi)的真菌等。小型底棲后生動(dòng)物metazoanmeiobenthos;metazoanmeiofauna生活于沉積物表面和底內(nèi)的、分選時(shí)能通過(guò)500μm孔徑網(wǎng)篩而被42μm或31μm孔徑網(wǎng)篩所阻留收集的小型后生動(dòng)物以及大型后生動(dòng)物的幼體等。幾個(gè)主要類(lèi)群(參見(jiàn)圖A.2)。4一般規(guī)定4.1技術(shù)設(shè)計(jì)根據(jù)調(diào)查任務(wù)進(jìn)行技術(shù)設(shè)計(jì)，內(nèi)容包括調(diào)查斷面、站位、項(xiàng)目、內(nèi)容、方法、時(shí)間、次數(shù)、專(zhuān)業(yè)配置、人員素質(zhì)、船只、器材設(shè)備、預(yù)期成果和調(diào)查計(jì)劃編制等。調(diào)查計(jì)劃編制的要求見(jiàn)GB/T12763.1中的相關(guān)章條。4.2調(diào)查的基本要求4.2.1調(diào)查項(xiàng)目底棲微藻、底棲原生動(dòng)物、小型底棲后生動(dòng)物，可根據(jù)任務(wù)書(shū)酌情增減或根據(jù)合同書(shū)、調(diào)查計(jì)劃自擬。4.2.2輔助參數(shù)海洋調(diào)查時(shí)，應(yīng)視需要確定與其有關(guān)的輔助觀測(cè)項(xiàng)目，可根據(jù)任務(wù)書(shū)或合同書(shū)、調(diào)查計(jì)劃自擬。4.2.3采樣方法與適用范圍適用于沉積物、有孔蟲(chóng)、介形蟲(chóng)、放射蟲(chóng)、沉積硅藻、顆石藻、沉積孢粉、底棲病毒、底棲微生物、底棲3微藻、底棲原生動(dòng)物、小型底棲后生動(dòng)物調(diào)查項(xiàng)目的采樣。適用于有孔蟲(chóng)、介形蟲(chóng)、放射蟲(chóng)、原生動(dòng)物等調(diào)查項(xiàng)目的樣品的輔助采集。適用于懸浮體調(diào)查等項(xiàng)目的水樣采集。使用調(diào)查項(xiàng)目規(guī)定的采樣器采樣，嚴(yán)守操作程序，注意采樣器的工作狀態(tài)。表層樣、柱狀樣和巖心樣的采集按任務(wù)要求取樣和處理，并根據(jù)調(diào)查任務(wù)的實(shí)驗(yàn)要求設(shè)計(jì)分層采樣(幾種分層設(shè)備參見(jiàn)圖B.1~圖B.2)。發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)重新采樣。使用專(zhuān)業(yè)規(guī)定的網(wǎng)具采樣，嚴(yán)格起、落網(wǎng)速度，準(zhǔn)確判斷網(wǎng)具到達(dá)預(yù)定水層。拖網(wǎng)時(shí)注意工作狀態(tài)是否正常，遇異常情況應(yīng)立即采取有效措施。起網(wǎng)后認(rèn)真沖洗網(wǎng)具，收集樣品，特別是粘附在網(wǎng)衣和網(wǎng)底管套篩絹上的生物樣品，嚴(yán)禁標(biāo)本挾帶。使用調(diào)查項(xiàng)目規(guī)定的采水器采水，入水前應(yīng)檢查采水器的球蓋是否打開(kāi)，出水嘴是否關(guān)閉，準(zhǔn)確放至預(yù)定水層，嚴(yán)守停滯時(shí)間。按要求取樣、處理。應(yīng)滿足GB/T12763.1和本標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)規(guī)定的具體要求處理。各調(diào)查項(xiàng)目應(yīng)按GB/T12763.1和本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定記錄。樣品采集和測(cè)定記錄表的格式參見(jiàn)附遇異?，F(xiàn)象或新發(fā)現(xiàn)，除記錄外還應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)拍照或錄像。4.4樣品分析各調(diào)查項(xiàng)目采得的樣品應(yīng)按GB/T12763.1和本標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)規(guī)定的具體要求處理。需要測(cè)定的樣品，應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)調(diào)查項(xiàng)目的要求進(jìn)行。4.4.3樣品的處理和保存需要現(xiàn)場(chǎng)分層、固定或染色的樣品，應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)調(diào)查項(xiàng)目的要求進(jìn)行。分析、測(cè)量、鑒定后的樣品，可依資料分析、應(yīng)用程序和學(xué)術(shù)價(jià)值高低，確定全部或部分保留。保留樣品應(yīng)按各專(zhuān)業(yè)的要求保管。44.4.4樣品的鑒定和計(jì)數(shù)主要生物種類(lèi)，一般應(yīng)鑒定到種，并按本標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)專(zhuān)業(yè)的要求計(jì)數(shù)。通過(guò)顯微鏡檢測(cè)等設(shè)備對(duì)樣品進(jìn)行觀察和分析，鏡檢時(shí)結(jié)果記錄于表格(參見(jiàn)表D.1～表D.4)。4.4.5樣品的數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析的主要內(nèi)容包括測(cè)定沉積物間隙生物主要類(lèi)群的構(gòu)成、豐度和優(yōu)勢(shì)類(lèi)群的種類(lèi)組成等。豐度以個(gè)體豐度(abundance)或相對(duì)豐度(relativeabundance)表示。借助統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，常用群落參數(shù)的計(jì)算見(jiàn)附錄E,微型底棲生物的生物體積計(jì)算公式見(jiàn)圖E.1,生物量轉(zhuǎn)換系數(shù)見(jiàn)表E.1。4.5資料整理的基本要求鑒定、計(jì)數(shù)及測(cè)定結(jié)果按本標(biāo)準(zhǔn)各調(diào)查要素所規(guī)定的公式和格式進(jìn)行計(jì)算、統(tǒng)計(jì)。按GB/T12763.1和本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，并參考GB/T12763.7的有關(guān)要求，填寫(xiě)各類(lèi)報(bào)表。有關(guān)數(shù)據(jù)資料形成后，根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)各調(diào)查要素的要求繪制各式圖表。每航次海上調(diào)查完成后，首席科學(xué)家應(yīng)按GB/T12763.1有關(guān)規(guī)定組織編寫(xiě)航次報(bào)告。按GB/T12763.1和本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行資料歸檔、驗(yàn)收和成果鑒定。包括沉積物樣品、巖樣、生物樣、水樣、現(xiàn)場(chǎng)描述記錄、導(dǎo)航定位記錄及各種記錄表等。這些調(diào)查的第一手資料，是調(diào)查的初級(jí)成果。對(duì)調(diào)查獲得的數(shù)據(jù)經(jīng)室內(nèi)處理、分析與計(jì)算，按成圖比例尺要求，編制基礎(chǔ)圖件。調(diào)查報(bào)告的內(nèi)容包括：a)前言，介紹調(diào)查任務(wù)的來(lái)源、目的和任務(wù)，調(diào)查海區(qū)的范圍和地理位置、調(diào)查項(xiàng)目?jī)?nèi)容和工作b)海上調(diào)查及資料整理，陳述海上調(diào)查的工作方法、調(diào)查站位層次設(shè)計(jì)、原始資料質(zhì)量、資料整理5方法、成果資料準(zhǔn)確度等；c)調(diào)查結(jié)果，包括沉積物類(lèi)型、懸浮體濃度、生物主要類(lèi)群的構(gòu)成、豐度和分布特點(diǎn)等；d)調(diào)查資料的分析，包括資料分析方法及其依據(jù)、各要素的分布特征、規(guī)律和綜合分析等；e)結(jié)論和工作建議。4.7資料歸檔調(diào)查資料歸檔的內(nèi)容包括：a)調(diào)查任務(wù)書(shū)或合同書(shū)、委托書(shū)等；b)課題論證報(bào)告、技術(shù)設(shè)計(jì)、方案報(bào)告及其審批意見(jiàn)；c)課題調(diào)查實(shí)施計(jì)劃、站位表等；e)計(jì)算、分析整理的成果數(shù)據(jù)報(bào)表及說(shuō)明；f)各種圖表、圖件(包括底圖)、照片及文字說(shuō)明；g)航次報(bào)告、專(zhuān)題總結(jié)報(bào)告；h)調(diào)查報(bào)告及成果驗(yàn)收書(shū)；i)課題成員及經(jīng)費(fèi)結(jié)算表。資料歸檔、檔案質(zhì)量與成果驗(yàn)收的相關(guān)要求見(jiàn)GB/T12763.1的相關(guān)規(guī)定。4.8質(zhì)量計(jì)劃和質(zhì)量控制執(zhí)行單位應(yīng)撰寫(xiě)質(zhì)量計(jì)劃書(shū)，內(nèi)容包括引用標(biāo)準(zhǔn)和文件、調(diào)查任務(wù)概況、質(zhì)量目標(biāo)、執(zhí)行單位組織機(jī)構(gòu)及崗位職責(zé)、質(zhì)量計(jì)劃保證措施。質(zhì)量控制措施主要包括以下幾個(gè)方面：a)建立質(zhì)量控制體系：任務(wù)執(zhí)行單位除接受主管部門(mén)和技術(shù)監(jiān)督機(jī)構(gòu)的監(jiān)督外，還應(yīng)自行核對(duì)和質(zhì)量檢查；制定質(zhì)量控制制度，明確質(zhì)量控制職責(zé)和質(zhì)量監(jiān)督、檢查程序，嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量控制規(guī)定；b)實(shí)施全過(guò)程質(zhì)量控制：下達(dá)調(diào)查任務(wù)應(yīng)有明確的質(zhì)量要求；對(duì)已有的文獻(xiàn)、資料應(yīng)進(jìn)行具體質(zhì)現(xiàn)場(chǎng)記錄；海上調(diào)查結(jié)束后，應(yīng)對(duì)原始資料、樣品進(jìn)行核對(duì)；對(duì)樣品的分析、鑒定和資料的整理、c)實(shí)行全員質(zhì)量控制：調(diào)查人員應(yīng)具備相關(guān)職業(yè)技能，在調(diào)查人員的職責(zé)中都應(yīng)有質(zhì)量要求。5沉積物調(diào)查5.1方法概述主要包括對(duì)沉積物特征、底質(zhì)類(lèi)型的劃分、沉積物理化因子的測(cè)定、沉積物粒度分析等，以獲取沉積物間隙生物調(diào)查的底質(zhì)環(huán)境的基本信息。測(cè)定按GB/T12763.8沉積物粒度分析的規(guī)定執(zhí)行。5.2技術(shù)要求技術(shù)要求主要包括以下方面：a)根據(jù)工作任務(wù)確定定性和定量分析；b)樣品不應(yīng)混樣和污染；c)調(diào)查要素包括沉積物粒度、沉積物類(lèi)型、沉積物生物組分等。65.3樣品采集和保存應(yīng)按GB/T12763.1、GB/T12763.6和GB/T12763.8的具體要求，采集海底表層沉積物、柱狀樣或未擾動(dòng)的鉆孔巖心樣，開(kāi)展樣品的現(xiàn)場(chǎng)描述和有關(guān)理化因子的現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定。依據(jù)工作任務(wù)對(duì)樣品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)密封、冷藏或冷凍保存。用于沉積物理化因子和粒度測(cè)定的樣品，應(yīng)對(duì)表層沉積物樣品進(jìn)行采集或者按照實(shí)驗(yàn)室要求對(duì)柱狀樣或鉆孔巖心進(jìn)行深度分層采集。采集的樣品用聚乙烯密封袋分裝密封，并在相應(yīng)的樣品袋上標(biāo)記樣品站位、取樣時(shí)間以及站位坐標(biāo)等相關(guān)信息。pH值、Eh值、溫度以及Fe3+/Fe2+比值等相關(guān)參數(shù)應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行測(cè)定，用于實(shí)驗(yàn)室測(cè)定其他理化因子的樣品應(yīng)放于一20℃冰箱內(nèi)保存，回到實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)測(cè)試條件準(zhǔn)備完畢后應(yīng)立即測(cè)定。5.4理化因子的測(cè)定根據(jù)調(diào)查要求，環(huán)境因子的測(cè)定應(yīng)包括含水量(%),總有機(jī)碳(%),葉綠素a(Chla)和脫鎂葉綠素a(Pha),pH值、Eh值、溫度以及Fe3+/Fe2+比值等。所測(cè)定的要素可根據(jù)調(diào)查任務(wù)要求酌情增減。5.5沉積物年齡的測(cè)定根據(jù)調(diào)查任務(wù)的要求，可酌情開(kāi)展柱狀樣或鉆孔巖心的沉積年齡測(cè)定。柱狀樣或鉆孔巖心頂部的沉積物，按GB/T12763.8的具體要求，根據(jù)任務(wù)需要選擇開(kāi)展210Pb、137Cs測(cè)年，鉆孔巖心可開(kāi)展C測(cè)年、光釋光測(cè)年和古地磁年代測(cè)定。5.6沉積物重金屬、有機(jī)污染物和油類(lèi)的測(cè)定調(diào)查按GB/T12763.4和GB17378.4的規(guī)定執(zhí)行。測(cè)定的要素可根據(jù)調(diào)查任務(wù)和海區(qū)的具體情況酌情增減。5.7沉積物粒度的測(cè)定有關(guān)沉積物粒度的測(cè)定按GB/T12763.8沉積物粒度分析的規(guī)定執(zhí)行，并可按該標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算沉積物粒度參數(shù)。5.8沉積物礦物組分的分析根據(jù)調(diào)查任務(wù)的要求，可酌情開(kāi)展沉積物碎屑礦物和黏土礦物組分的分析，按GB/T12763.8底質(zhì)礦物鑒定的規(guī)定執(zhí)行。5.9近海沉積物底質(zhì)類(lèi)型的劃分根據(jù)調(diào)查任務(wù)的需要，沉積物分類(lèi)和命名采用謝帕德(Shepard)或者?？?Folk)等的沉積物三角圖解法劃分(見(jiàn)圖F.1～圖F.2)。a)謝帕德的沉積物三角圖解法將沉積物劃分為：粘土、砂質(zhì)粘土、粉砂質(zhì)粘土、粘土質(zhì)砂、粘土質(zhì)粉砂、砂、粉砂質(zhì)砂、砂質(zhì)粉砂、粉砂9種類(lèi)型，劃分依據(jù)按GB/T12763.8沉積物粒度分析的規(guī)定執(zhí)行；b)福克等碎屑沉積物分類(lèi)法，包括含礫和無(wú)礫兩種沉積物分類(lèi)法，其中含礫沉積物的三角圖解法c)無(wú)礫沉積物三角圖解法可劃分為10個(gè)類(lèi)型：砂、粉砂質(zhì)砂、泥質(zhì)砂、粘土質(zhì)砂、砂質(zhì)粉砂、砂質(zhì)7d)除了上述劃分之外，應(yīng)按照粒度分析結(jié)果，明確所分析的沉積物中所含礫石、砂、粉砂及粘土粒級(jí)組分的百分含量。5.10深海沉積物類(lèi)型的劃分深海沉積物的類(lèi)型和命名采用深海沉積物三角圖解分類(lèi)法劃分(見(jiàn)圖F.3),劃分依據(jù)按GB/T12763.8沉積物粒度分析的規(guī)定執(zhí)行。5.11沉積物生物組分調(diào)查主要包括對(duì)樣品中的有孔蟲(chóng)、介形蟲(chóng)、放射蟲(chóng)、孢粉、鈣質(zhì)超微化石(顆石藻等)的鑒定和分析。生物遺殼的測(cè)定依據(jù)按GB/T12763.8有關(guān)沉積物古生物鑒定的規(guī)定執(zhí)行。其他沉積生物碎屑如魚(yú)石、魚(yú)耳石、輪藻、珊瑚、苔蘚蟲(chóng)、翼足類(lèi)等的樣品制片和鑒定分析，按GB/T12763.8有關(guān)沉積物古生物鑒定的規(guī)定執(zhí)行。技術(shù)要求主要包括以下方面：a)根據(jù)工作任務(wù)確定定性和定量分析；b)樣品不應(yīng)混樣和污染；c)個(gè)體豐度以個(gè)每克干樣，或個(gè)每50克干樣或個(gè)每10平方厘米表示；d)調(diào)查要素包括測(cè)定主要類(lèi)群的組成、豐度、優(yōu)勢(shì)種等。5.11.3樣品采集和保存應(yīng)按GB/T12763.1、GB/T12763.6和GB/T12763.8的具體要求，采集沉積物柱狀樣和未擾動(dòng)的芯樣。依據(jù)工作任務(wù)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)密封、冷藏或冷凍保存。5.12資料整理沉積物調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定。6懸浮體調(diào)查6.1方法概述通過(guò)現(xiàn)場(chǎng)儀器觀測(cè)、水樣過(guò)濾和實(shí)驗(yàn)室分析，調(diào)查與海洋沉積過(guò)程有關(guān)的懸浮顆粒等海洋環(huán)境要素，獲得海水中懸浮體濃度分布、粒度組成、顆粒有機(jī)碳、有機(jī)氮等的含量和分布，以了解海域水動(dòng)力條件、海洋沉積物來(lái)源和沉積特征。6.2技術(shù)要求技術(shù)要求包括以下方面：a)測(cè)站布設(shè)：調(diào)查海區(qū)應(yīng)具有代表性，推薦以大面站斷面、連續(xù)站的方式進(jìn)行觀測(cè)，每斷面不少于3個(gè)站位，同一斷面站位盡可能短時(shí)間內(nèi)完成；b)觀測(cè)層位：根據(jù)水深確定觀測(cè)層次，在水深小于20m的海域可以酌情減少(見(jiàn)表G.1)。8GB/T34656—20176.3懸浮體質(zhì)量濃度測(cè)量測(cè)量準(zhǔn)確度誤差范圍應(yīng)小于2%。測(cè)量?jī)x器包括如下：a)采水器：采用采水體積與過(guò)濾量相當(dāng)?shù)牟伤?；c)真空過(guò)濾裝置；d)稱(chēng)量天平：懸浮體濃度大于5mg/L的海域，可采用稱(chēng)量精度為10-'g/g的分析天平；懸浮體濃度不超過(guò)5mg/L的海域，建議選用稱(chēng)量精度為10-5g/g的電子分析天平。實(shí)驗(yàn)室分析的工作程序如下：a)將濾膜40℃烘干至恒重，然后在分析天平上稱(chēng)空濾膜重量，并將稱(chēng)量過(guò)的濾膜放入清潔的、編b)現(xiàn)場(chǎng)將海水樣品過(guò)濾到濾膜上，記錄下通過(guò)濾膜的海水體積；待濾膜上海水被抽干后，用去離子水沖洗濾膜2次，洗去鹽分；c)將抽干的濾膜放回原濾膜盒內(nèi)，冷凍保存于—20℃冰柜中以待其他用途分析；d)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)將帶有懸浮體樣品的濾膜在冷凍干燥機(jī)中干燥至恒重，用電子分析天平再次稱(chēng)量出帶樣品濾膜的總重量；e)將20%的樣品加空白校正膜，平行進(jìn)行濾膜的空白校正；f)按式(1)計(jì)算懸浮顆粒物濃度(SPM),按式(2)計(jì)算空白校正濾膜校正值(△W);W——水樣濾膜的質(zhì)量，單位為毫克(mg);△W——空白校正濾膜校正值，單位為毫克(mg);V——過(guò)濾海水的體積，單位為升(L)?！璚?——過(guò)濾后空白校正濾膜重量，單位為毫克(mW,——過(guò)濾前空白校正濾膜重量，單位為毫克(mg);n——空白校正濾膜個(gè)數(shù)。g)取濾膜上的懸浮體樣品，在實(shí)驗(yàn)室激光粒度儀中測(cè)量樣品粒度。6.4懸浮體現(xiàn)場(chǎng)粒度和體積濃度測(cè)量技術(shù)要求包括如下：9a)粒度測(cè)量范圍：根據(jù)海域特征可選擇1.25μm～250μm或2μm～500μm量程的儀器測(cè)量；b)測(cè)量分辨率：32個(gè)粒級(jí)；c)測(cè)量準(zhǔn)確度：誤差范圍應(yīng)小于2%?，F(xiàn)場(chǎng)水下激光粒度儀。測(cè)量要求包括如下方面：a)每年對(duì)現(xiàn)場(chǎng)激光粒度儀進(jìn)行校準(zhǔn)，每次下水作業(yè)前應(yīng)做背景值測(cè)試；b)測(cè)量時(shí)避免作業(yè)船螺旋槳攪動(dòng)水體等干擾，儀器入水測(cè)量?jī)A角按儀器使用說(shuō)明要求進(jìn)行；c)激光粒度儀浸入海水表層后，應(yīng)停留3min～5min,使探頭溫度與海水溫度平衡；儀器按各站的要求勻速下放，下放過(guò)程中自動(dòng)記錄每個(gè)間隔層的現(xiàn)場(chǎng)粒度；下放到位后，再勻速收回并同上做相同自動(dòng)記錄，每次下放和上升各記錄一個(gè)剖面的深度、粒級(jí)分布和體積濃度數(shù)據(jù)；d)測(cè)量資料用原始格式和ASCⅡ格式貯存，包括背景測(cè)試文件和剖面數(shù)據(jù)文件；由儀器下放過(guò)程記錄的深度和粒級(jí)分布給出該站位的粒級(jí)分布剖面；儀器上升過(guò)程的粒級(jí)分布剖面用于校核。6.5顆粒有機(jī)碳和有機(jī)氮測(cè)定采用干式燃燒法測(cè)量顆粒有機(jī)碳和氮。高溫條件下(900℃~1000℃)有機(jī)碳轉(zhuǎn)化為CO?,氮氧化物轉(zhuǎn)化為N?。用熱傳導(dǎo)方式可以測(cè)得兩種氣體。其中顆粒有機(jī)碳(POC)單位為μg/L,顆粒氮(PN)單位是pg/L。6.5.2調(diào)查儀器與試劑調(diào)查儀器與試劑包括如下：a)采水器：采用采水體積與過(guò)濾量相當(dāng)?shù)牟伤?；b)濾膜：推薦玻璃纖維(GF/F)或者石英纖維濾膜，孔徑不超過(guò)0.7μm;c)元素分析設(shè)備：在高溫灼燒條件下，用TCD氣相色譜方法檢測(cè)CO。和N?;d)電子天平分析：稱(chēng)量精度為10-?g/g;e)濃鹽酸(試劑級(jí)),乙酰苯胺(試劑級(jí))或EDTA(試劑級(jí))?，F(xiàn)場(chǎng)取樣包括如下工作程序：a)濾膜預(yù)處理：在馬福爐內(nèi)500℃條件下高溫灼燒5h,冷卻后用電子天平稱(chēng)重；b)將采水器中的海水全部過(guò)濾到濾膜上，并用蒸餾水洗去濾膜上的多余鹽分，置于一40℃深冷環(huán)境中密封保存；c)用高溫灼燒過(guò)的鋁箔包裹、儲(chǔ)存濾膜。樣品分析方法包括如下程序：a)推薦將濾膜置于閃爍管內(nèi)，在65℃環(huán)境下熔化干燥12h;閃爍管預(yù)先用酸清洗干凈，并經(jīng)高溫處理(450℃條件下高溫灼燒2h);b)將干燥的濾膜置于充滿HCl氣體的干燥器內(nèi)12h;c)隨后重復(fù)步驟a),干燥懸浮顆粒樣品；d)建議將濾膜樣品封存于預(yù)處理的鎳管中(850℃,1h),準(zhǔn)備上機(jī)測(cè)試；e)每20個(gè)～40個(gè)樣品應(yīng)進(jìn)行1次標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試，以檢驗(yàn)分析設(shè)備的漂移與誤差；大約每10個(gè)樣品需要做1次空白樣測(cè)試。懸浮體調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定。7有孔蟲(chóng)調(diào)查7.1方法概述通過(guò)對(duì)有孔蟲(chóng)的活體和遺殼進(jìn)行采集、處理、保存、鑒定和分析等，了解調(diào)查海區(qū)有孔蟲(chóng)在沉積物中的分布和保存狀況，以反映該區(qū)域的水文和環(huán)境變化。7.2技術(shù)要求技術(shù)要求包括以下方面：a)根據(jù)工作任務(wù)確定采樣方式，并預(yù)先設(shè)計(jì)采樣流程。其中，表層取樣要求是海底表層0cm~2cm的樣品，柱狀取樣的分層按照每2cm的間隔，或者按照任務(wù)要求；b)不同海區(qū)沉積物中有孔蟲(chóng)豐度相差較大，可根據(jù)任務(wù)需要確定采樣量。一般在河口近岸地區(qū)，沉積物取樣推薦20g～50g干樣，陸坡至深海沉積物取樣推薦2g～10g干樣；c)確保樣品不產(chǎn)生混樣和污染，并認(rèn)真填寫(xiě)、記錄站位和樣品信息；d)將殼徑大于0.15mm的有孔蟲(chóng)鏡檢，一般對(duì)于浮游有孔蟲(chóng)建議鑒定到種，對(duì)于底棲有孔蟲(chóng)的優(yōu)勢(shì)種類(lèi)應(yīng)鑒定到種，其他可鑒定到屬或歸為生態(tài)類(lèi)別(例如，瓶蟲(chóng)類(lèi)),注意記錄有孔蟲(chóng)的磨損、破碎和溶蝕現(xiàn)象等保存情況；e)有孔蟲(chóng)群落統(tǒng)計(jì)時(shí)，如全樣中大于0.15mm的殼體不足300個(gè)則計(jì)數(shù)全樣；若殼體數(shù)量太多時(shí)，可利用分樣器或?qū)蔷€分樣法劃分樣品計(jì)數(shù)分樣，每個(gè)分樣樣品鑒定統(tǒng)計(jì)建議不少于300個(gè)有孔蟲(chóng)；建議浮游有孔蟲(chóng)分樣殼體數(shù)量鏡檢約300個(gè)，底棲有孔蟲(chóng)分樣殼體鏡檢約150個(gè)；f)對(duì)各鑒定種類(lèi)的統(tǒng)計(jì)最后需換算為相對(duì)豐度，以百分含量(%)表示；或根據(jù)任務(wù)要求換算成絕對(duì)豐度，單位以個(gè)每克干樣表示；對(duì)于表層沉積樣品，也可以采用個(gè)每平方厘米表示。7.3有孔蟲(chóng)樣品的采集和保存根據(jù)不同的海底沉積物類(lèi)型，有孔蟲(chóng)標(biāo)本獲取和處理方法主要分為兩類(lèi)：a)河口近岸淺水型：沉積物以陸源碎屑為主，沉積速率快，有孔蟲(chóng)含量少。樣品用蒸餾水或自來(lái)水加少量六偏磷酸鈉浸泡，使之分散，加上適量的過(guò)氧化氫去除有機(jī)質(zhì)，加熱使之充分反應(yīng)，然后用0.063mm孔徑的網(wǎng)篩沖洗干凈；樣品烘干后，可選擇四氯化碳進(jìn)行浮選，浮選時(shí)需充分?jǐn)嚢枋褂锌紫x(chóng)殼體懸浮，并迅速將懸浮物倒入0.063mm的濾紙進(jìn)行過(guò)濾，便可獲得純凈的有孔蟲(chóng)標(biāo)本；b)陸坡及深海型：沉積物中陸源碎屑相對(duì)少，沉積物顆粒細(xì)，沉積速率較慢，有孔蟲(chóng)含量多。樣品用蒸餾水或自來(lái)水浸泡分散，經(jīng)過(guò)0.063mm孔徑網(wǎng)篩的水洗，之后烘干便可直接用于有孔蟲(chóng)標(biāo)本的制作。7.3.2沉積遺殼的采集和保存采集有孔蟲(chóng)遺殼樣品，需要沉積物采樣工具(如箱式采樣器、多管采樣器、重力采樣器等)并在海洋調(diào)查船上進(jìn)行。樣品應(yīng)冷藏保存，也可以根據(jù)工作任務(wù)需要，在現(xiàn)場(chǎng)處理(如用虎紅染色，以區(qū)分活體和遺殼)后，再密封冷藏(4℃)保存。7.3.3活體有孔蟲(chóng)的采集和保存對(duì)于活體有孔蟲(chóng)調(diào)查，采集表層沉積物(一般為沉積物表面0cm～2cm,但也可根據(jù)任務(wù)需求研究表層0cm～15cm的沉積物)進(jìn)行酒精固定，樣品以虎紅溶液染色48h以內(nèi)，再進(jìn)行樣品處理和分析，以區(qū)分活體和遺殼。用于分子鑒定的樣品，需采集現(xiàn)場(chǎng)沉積物中的活體有孔蟲(chóng)，冷藏或超低溫冷凍保存，回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理和分析。7.4工具和試劑工具和試劑包括如下：b)網(wǎng)篩(孔徑0.063mm,孔徑0.15mm)、結(jié)晶皿(50mL、100mL)7.5有孔蟲(chóng)樣品的處理和分析7.5.1沉積遺殼的處理和分析結(jié)晶皿或燒杯編號(hào)并稱(chēng)重編號(hào)并稱(chēng)重的工作程序如下：a)取結(jié)晶皿用清水洗凈；b)將結(jié)晶皿于60℃干燥箱中烘干；c)將結(jié)晶皿編號(hào)并稱(chēng)重(精確到0.01g);d)在樣品表格里記錄結(jié)晶皿的重量和對(duì)應(yīng)的樣品號(hào)，填寫(xiě)沖樣記錄表(參見(jiàn)表H.1)。樣品烘干稱(chēng)重的工作程序如下：a)取原始沉積物樣品放入已稱(chēng)取重量的結(jié)晶皿中，并記錄編號(hào)；b)稱(chēng)沉積物濕重；c)在60℃干燥箱中完全烘干，并稱(chēng)重，計(jì)算獲得樣品的干重。樣品浸泡的工作程序如下：a)取出烘干的沉積物，加入蒸餾水或自來(lái)水，充分浸泡(1天～2天)使樣品完全分散；b)有機(jī)質(zhì)含量高的樣品，以濃度為3%的雙氧水浸泡樣品2h后再進(jìn)行沖洗(主要針對(duì)河口近岸沉積物，還可添加少量六偏磷酸鈉使沉積物樣品更加松散，但本步驟不適于深海沉積物和有孔蟲(chóng)活體研究)。沖樣并烘干的工作程序如下：a)將樣品完全轉(zhuǎn)移至孔徑為0.063mm的網(wǎng)篩中，用流水反復(fù)將樣品沖洗干凈；b)轉(zhuǎn)移沖洗干凈的樣品至結(jié)晶皿中并編號(hào)；c)結(jié)晶皿于60℃恒溫箱中烘干；d)烘干后的樣品稱(chēng)重并記錄為粗組分重量。浮選濃縮的工作程序如下(可選擇進(jìn)行，主要針對(duì)河口近岸沉積物):a)大燒杯編號(hào)與樣品號(hào)對(duì)應(yīng)；b)四氯化碳懸??；c)完全干燥后，將沉積物殘?jiān)谷虢Y(jié)晶皿并編號(hào)；d)結(jié)晶皿鏡檢，將剩余沉積物殘?jiān)b袋并標(biāo)記站位。裝瓶封存的工作程序如下：a)將稱(chēng)重后的干燥樣品分別過(guò)0.15mm網(wǎng)篩和0.063mm網(wǎng)篩；b)兩組樣品分別裝瓶并貼上標(biāo)簽，注明樣品層位及殼徑信息。鏡檢制片和分析的工作程序如下：a)將大于0.15mm的樣品進(jìn)行鏡檢；b)隨機(jī)挑選150個(gè)～300個(gè)殼體制標(biāo)本片；c)根據(jù)工作任務(wù)的需要，進(jìn)行分類(lèi)鑒定和群落統(tǒng)計(jì)(包括種數(shù)、豐度、分異度及各類(lèi)群比值等);d)對(duì)于河口近岸沉積物，根據(jù)工作任務(wù)的要求，可選擇進(jìn)行對(duì)0.063mm的樣品進(jìn)行鑒定統(tǒng)計(jì)；e)填寫(xiě)有孔蟲(chóng)鑒定統(tǒng)計(jì)表(可根據(jù)工作需要自行設(shè)計(jì))。7.5.2活體有孔蟲(chóng)的分子鑒定采用針對(duì)有孔蟲(chóng)的特異性引物，擴(kuò)增其18S核糖體DNA(18SribosomalDNA,18SrDNA)、內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔(InternallyTranscribedSpacer,ITS)、28S核糖體DNA(28SribosomalDNA,28SrDNA)等基因片段，獲得單個(gè)體有孔蟲(chóng)的核酸序列。設(shè)備和工具包括如下：a)儀器設(shè)備：體視顯微鏡、冰箱、水浴鍋、高速離心機(jī)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀(PolymeraseChainRe-試劑包括如下：a)DNA提取試劑：脫氧膽酸鈉(Nadeoxycholate,DOC)裂解緩沖液、胍鹽裂解緩沖液、異丙醇、70%乙醇、1×TE緩沖液(Tris-EDTAbuffersolution,TE緩沖液)、Glycoblue(DNA共沉淀c)PCR產(chǎn)物純化用試劑：瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒、瓊脂糖；d)DNA連接用試劑：DNA連接試劑盒(包括DNA連接酶、連接用載體、連接緩沖液)、雙蒸水；e)克隆培養(yǎng)用試劑：胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、瓊脂粉、氨芐(終濃度0.1mg/mL)、感受態(tài)細(xì)胞、5-溴-4-氯-3-吲哚-βD-半乳糖苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranosiGal)(最終濃度40μg/mL)、異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyr-f)1×TAE電泳緩沖液(Tris-acetate-EDTAbuffersolution,TAE緩沖液);.1DOC法(適用于殼表粗糙的鈣質(zhì)種類(lèi))DOC法提取有孔蟲(chóng)DNA的工作程序包括如下：a)用滅菌過(guò)濾海水將待測(cè)有孔蟲(chóng)殼體表面清洗干凈；b)取一只洗凈的有孔蟲(chóng)置于50μLDOC裂解液中，研磨；d)10000r/min離心5min;e)取上清液，即為靶DNA,DOC裂解液配方包括如下(總體積為1000μL):a)三羥甲基氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane,TRIS]1M(pH8.5)100μLb)乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA)0.5M(pH8.0)8μLc)DOC(Nadeoxycholate脫氧膽酸鈉)10%100μLd)曲拉通X-100(Trito.2胍鹽法(適用于殼表致密的鈣質(zhì)種類(lèi)、玻璃質(zhì)殼種類(lèi)、砂質(zhì)殼種類(lèi))胍鹽法提取有孔蟲(chóng)DNA的工作程序包括如下：a)用滅菌過(guò)濾海水將待測(cè)有孔蟲(chóng)表面清洗干凈，取一只洗凈的有孔蟲(chóng)置于50μL胍鹽裂解液中，必要時(shí)將其磨碎；b)60℃加熱15min,或者室溫過(guò)夜；c)8000r/min離心1min,將上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mLEP管中；d)加入1μLGlycoblue(Glycoblue應(yīng)置于冰上),混勻；f)使上述混合物在-20℃沉淀至少2h,或過(guò)夜；g)最大轉(zhuǎn)速離心15min,移走上清液，注意不應(yīng)擾動(dòng)沉淀；h)用100μL70%酒精洗滌上述沉淀物；i)最大轉(zhuǎn)速離心1min,移走上清液；j)將沉淀物真空干燥5min～10min,或者室溫下干燥更長(zhǎng)時(shí)間；k)用15μL～20μLTEBuffer溶解沉淀物，于4℃放置至少1h,或過(guò)夜，期間取出渦旋數(shù)次；1)提取物即為靶DNA,于-20℃保存?？傮w積為212mL,配制方法如下：a)100mL雙蒸水；b)100g異硫氰酸胍；e)60℃~70℃加熱10min,攪拌使其溶解；f)加入4.24gN-月桂酰肌氨酸鈉；g)加入2.1mLβ-巰基乙醇；h)用雙蒸水將總體積調(diào)至212mL,于4℃保存。擴(kuò)增引物包括如下，如表1所示：基因基因片段擴(kuò)增引物再擴(kuò)增引物小亞基(SmallSubunit,SSU)s14-sBs14F3-newBs14F1-newB大亞基(LargeSubunit,LSU)2TA-L72TA-L1F2TA-L7ITS1+5.8S+ITS2s20-2TAICsBr-2TAIC引物堿基序列s14F3:5’ACGCAMGTGTGAAACTTG3'newB:5'TGCCTTGTTCGACTTCTC3’s14F1:5’AAGGGCACCACAAGAACGC3’2TA:5'CACATCAGCTCGAGTGAG3’L1F:5'ACTCTCTCTTTCACTCCC3’L7:5’GATGWGTCATTACCACC3’s20:5’TTGTACACACCGCCCGTC3’2TAIC:5'CTCACTCGAGCTGATGTG3’sBr:5'GTAGGTGAACCTGCAGAAGG3’注：某些有孔蟲(chóng)種類(lèi)DNA序列的擴(kuò)增需要進(jìn)行巢式PCR,即分別用不同的引物、不同的PCR程序，進(jìn)行2次PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系包括如下(總體積為25μL):c)DNA模板1μL～5μL;擴(kuò)增反應(yīng)程序包括如下：a)熱蓋開(kāi)啟105℃;b)95℃預(yù)變性60s;c)94℃變性30s;d)50℃退火30s;e)72℃延伸90s;f)重復(fù)步驟b)～d)共34次；h)終止于4℃。再擴(kuò)增反應(yīng)程序包括如下：a)熱蓋開(kāi)啟105℃;b)95℃預(yù)變性60s;c)94℃變性30s;d)52℃退火30s;f)重復(fù)步驟b)～d)共24次；g)72℃延伸3min;h)終止于4℃。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分析，檢測(cè)PCR產(chǎn)物有無(wú)及擴(kuò)增的DNA片段長(zhǎng)度是否正確。PCR陽(yáng)性產(chǎn)物克隆技術(shù)使用瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒，將經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果為陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。將DNA連接試劑盒中的試劑，包括DNA連接酶、連接用載體、連接緩沖液置于冰上融解，按照試劑盒說(shuō)明配制連接反應(yīng)體系，于16℃連接反應(yīng)過(guò)夜。以下操作建議在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行：a)開(kāi)42℃水浴鍋、超凈工作臺(tái)，取固體細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Luria-Bertani,LB培養(yǎng)基)(含氨芐)放b)從一80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞，置于冰上融解；d)冰浴30min;e)42℃水浴熱激90s;g)加入800μLLB液體培養(yǎng)基(不含氨芐);i)取20μL～50μL菌液均勻涂布在含有X-Gal、IPTG、氨芐的LB固體培養(yǎng)基平板上；j)放入37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)10h～14h。陽(yáng)性單克隆檢測(cè)的工作程序如下：a)挑選白色菌落進(jìn)行菌落PCR,PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序按照.2和.3.2的規(guī)定；b)電泳檢測(cè)，確認(rèn)插入片段的長(zhǎng)度是否正確；c)選取插入片段正確的單克隆，在1mL的LB液體培養(yǎng)基(含氨芐)中擴(kuò)大培養(yǎng)10h后送其菌液進(jìn)行測(cè)序。7.6資料整理有孔蟲(chóng)調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，群落分析的計(jì)算方法見(jiàn)附錄E。8介形蟲(chóng)調(diào)查8.1方法概述通過(guò)對(duì)介形蟲(chóng)的活體和遺殼進(jìn)行采集、處理和保存，以及鑒定分析等，了解調(diào)查海區(qū)介形蟲(chóng)在沉積物中的分布和保存狀況，來(lái)反映該區(qū)域的水文和環(huán)境變化。8.2技術(shù)要求技術(shù)要求主要包括以下方面：a)根據(jù)工作任務(wù)確定采樣方式，并預(yù)先設(shè)計(jì)采樣流程。其中，表層取樣要求是海底表層0cm~2cm的樣品，柱狀取樣的分層按照每2cm的間隔，或者按照任務(wù)要求。b)不同海區(qū)沉積物中介形蟲(chóng)豐度相差較大，可根據(jù)任務(wù)需要確定采樣量。一般在河口近岸地區(qū)，沉積物取樣推薦20g～50g干樣，陸坡至深海沉積物取樣推薦2g～10g或20g干樣。c)確保樣品不產(chǎn)生混樣和污染，并認(rèn)真填寫(xiě)、記錄站位和樣品信息。d)介形蟲(chóng)的鑒定采用體視顯微鏡，一般介形蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)種類(lèi)鑒定到種，其他可鑒定到屬，注意記錄介形蟲(chóng)的磨損、破碎和溶蝕現(xiàn)象等保存情況。e)介形蟲(chóng)群落統(tǒng)計(jì)時(shí)，如全樣中的殼體不足100個(gè)則計(jì)數(shù)全樣；殼體數(shù)量太多時(shí)，可利用分樣器或?qū)蔷€分樣法劃分樣品，每個(gè)分樣樣品鑒定統(tǒng)計(jì)推薦約100個(gè)介形蟲(chóng)。f)對(duì)各鑒定種類(lèi)的統(tǒng)計(jì)最后需換算為相對(duì)豐度，以百分含量(%)表示；或根據(jù)任務(wù)要求換算成絕對(duì)豐度，單位以個(gè)每克干樣表示；對(duì)于表層沉積樣品，也可以采用個(gè)每平方厘米表示。8.3介形蟲(chóng)樣品的采集和保存根據(jù)不同的海底沉積物類(lèi)型，介形蟲(chóng)標(biāo)本獲取和處理方法主要分為兩類(lèi)：a)河口近岸淺水型：沉積物以陸源碎屑為主，沉積速率快，介形蟲(chóng)含量少。樣品用蒸餾水或自來(lái)水加少量六偏磷酸鈉浸泡，使之分散，加上適量的過(guò)氧化氫去除有機(jī)質(zhì)，加熱使之充分反應(yīng)，然后用0.063mm的網(wǎng)篩沖洗干凈，樣品烘干后，可選擇四氯化碳進(jìn)行浮選，浮選時(shí)需充分?jǐn)嚢枋菇樾蜗x(chóng)殼體懸浮，并迅速將懸浮物倒入0.063mm的濾紙進(jìn)行過(guò)濾，便可獲得干凈的介形蟲(chóng)標(biāo)本；b)陸坡及深海型：沉積物中陸源碎屑相對(duì)少，沉積物顆粒細(xì)，沉積速率較慢，介形蟲(chóng)含量較多。樣品用蒸餾水或自來(lái)水浸泡分散，經(jīng)過(guò)0.063mm孔徑網(wǎng)篩的水洗，之后烘干便可直接用于介形蟲(chóng)標(biāo)本的制作。8.3.2沉積遺殼的采集和保存采集介形蟲(chóng)遺殼樣品，需要沉積物采樣工具(如箱式采樣器、多管采樣器、重力采樣器等)并在海洋調(diào)查船上進(jìn)行。樣品需要冷藏保存，也可以根據(jù)工作任務(wù)需要，在現(xiàn)場(chǎng)處理(如用虎紅染色，以區(qū)分活體和遺殼)后，再密封冷藏(恒溫為4℃)保存。8.3.3活體介形蟲(chóng)的采集和保存對(duì)于活體介形蟲(chóng)調(diào)查，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)采集的表層沉積物(一般為表面0cm～2cm,但也可根據(jù)任務(wù)需求研究表面0cm～10cm的沉積物)進(jìn)行酒精固定，樣品以虎紅染色48h以內(nèi)，再進(jìn)行樣品處理和分析，以區(qū)分活體和遺殼。8.4工具和試劑工具和試劑包括如下：b)網(wǎng)篩(孔徑0.063mm,孔徑0.15mm)、結(jié)晶皿(50mL、100mL)8.5介形蟲(chóng)樣品的處理和分析8.5.1結(jié)晶皿或燒杯編號(hào)并稱(chēng)重編號(hào)和稱(chēng)重的工作程序如下：a)取結(jié)晶皿用清水洗凈；b)將結(jié)晶皿于60℃干燥箱中烘干；c)將結(jié)晶皿編號(hào)并稱(chēng)重(精確到0.01g);d)在樣品表格里記錄結(jié)晶皿的重量和對(duì)應(yīng)的樣品號(hào)，填寫(xiě)介形蟲(chóng)沖樣記錄表(參見(jiàn)表H.1)。8.5.2樣品烘干稱(chēng)重樣品烘干稱(chēng)重的工作程序如下：a)取原始沉積物樣品放入已稱(chēng)取重量的結(jié)晶皿中，并記錄編號(hào)；b)稱(chēng)沉積物濕重；c)在60℃干燥箱中完全烘干、稱(chēng)重，計(jì)算獲得樣品的干重。樣品浸泡的工作程序如下：a)取出烘干的沉積物，加入蒸餾水或自來(lái)水，充分浸泡(1天～2天)使樣品完全分散；b)有機(jī)質(zhì)含量高的樣品，以濃度為3%的雙氧水浸泡樣品2h后再進(jìn)行沖洗(主要針對(duì)河口近岸沉積物，還可添加少量六偏磷酸鈉使沉積物樣品更加松散，但本步驟不適于深海沉積物和介形蟲(chóng)活體研究)。沖樣并烘干的工作程序如下：a)將樣品完全轉(zhuǎn)移至孔徑為0.063mm的網(wǎng)篩中，用流水反復(fù)將樣品沖洗干凈；b)轉(zhuǎn)移沖洗干凈的樣品至結(jié)晶皿中并編號(hào)；c)結(jié)晶皿于60℃恒溫箱中烘干；d)烘干后的樣品稱(chēng)重并記錄為粗組分重量。8.5.5浮選濃縮(可選擇，主要針對(duì)河口近岸沉積物)浮選濃縮的工作程序如下：a)大燒杯編號(hào)與樣品號(hào)對(duì)應(yīng)；b)四氯化碳懸?。籧)完全干燥后，將沉積物殘?jiān)谷虢Y(jié)晶皿并編號(hào)；d)結(jié)晶皿鏡檢，將剩余沉積物殘?jiān)b袋并標(biāo)記站位。裝瓶封存的工作程序如下：a)將稱(chēng)重后的干燥樣品分別過(guò)0.15mm網(wǎng)篩和0.063mm網(wǎng)篩；b)兩組樣品分別裝瓶并貼上標(biāo)簽，注明樣品層位及殼徑信息。鏡檢計(jì)數(shù)的工作程序如下：a)將大于0.15mm的樣品進(jìn)行鏡檢；b)若標(biāo)本量足夠，隨機(jī)挑選100個(gè)～200個(gè)殼體制標(biāo)本片；若標(biāo)本不足100個(gè)則全部挑選；c)根據(jù)工作任務(wù)的需要，進(jìn)行分類(lèi)鑒定和群落統(tǒng)計(jì)(包括種數(shù)、豐度、分異度等);d)對(duì)于河口近岸沉積物，根據(jù)工作任務(wù)，可選擇進(jìn)行對(duì)0.063mm的樣品鑒定和統(tǒng)計(jì)；e)填寫(xiě)介形蟲(chóng)鑒定統(tǒng)計(jì)表(可根據(jù)工作需要自行設(shè)計(jì))。8.6資料整理介形蟲(chóng)調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，群落分析的計(jì)算方法見(jiàn)附錄E。9放射蟲(chóng)調(diào)查9.1方法概述調(diào)查浮游性放射蟲(chóng)沉積在相關(guān)海域沉積物中的保存狀況，揭示該類(lèi)動(dòng)物群的埋藏豐度與組合特征。技術(shù)要求包括如下：a)表層取樣要求是采集沉積物表層0cm～2cm的樣品，柱狀取樣的分層按照每2cm的間隔，或者按照任務(wù)要求；b)陸架淺水型的分析樣品取5g～10g,陸坡及深水型的分析樣品推薦取1g～2g或5g;c)放射蟲(chóng)的標(biāo)本鑒定在生物顯微鏡的透射光中進(jìn)行，一般鑒定到種類(lèi)，在不同的調(diào)查海區(qū)可各自選取約60個(gè)優(yōu)勢(shì)種或常見(jiàn)種進(jìn)行種類(lèi)鑒定，其他種類(lèi)標(biāo)本僅做數(shù)量統(tǒng)計(jì)；如任務(wù)要求統(tǒng)計(jì)種類(lèi)多樣性，則需鑒定每個(gè)分樣中的全部種類(lèi)；d)放射蟲(chóng)群落統(tǒng)計(jì)時(shí)，如全樣中的殼體不足300個(gè)則計(jì)數(shù)全樣；殼體數(shù)量太多時(shí)，可利用分樣器或?qū)蔷€分樣法劃分樣品，每個(gè)分樣樣品鑒定統(tǒng)計(jì)不少于300個(gè)放射蟲(chóng)；e)對(duì)各鑒定種類(lèi)的統(tǒng)計(jì)最后需換算為相對(duì)豐度，以百分含量(%)表示；或根據(jù)任務(wù)要求換算成絕對(duì)豐度，單位以個(gè)每克干樣表示；對(duì)于表層沉積樣品，也可以采用個(gè)每平方厘米表示。9.3放射蟲(chóng)樣品的采集和保存根據(jù)不同的海底沉積物組成類(lèi)型，放射蟲(chóng)標(biāo)本獲取的處理方法主要分為兩類(lèi)：a)陸架及淺水型：以陸源碎屑及各種鈣質(zhì)生物殼體為主，沉積速率較快，放射蟲(chóng)含量很少。樣品用干凈水加焦磷酸鈉浸泡使之分散，加上適量的過(guò)氧化氫與鹽酸去除有機(jī)質(zhì)和鈣質(zhì)顆粒，加熱使之充分反應(yīng)，然后用0.063mm的網(wǎng)篩沖洗干凈，樣品烘干后為了去除部分粗顆粒，采用四氯化碳進(jìn)行浮選，浮選時(shí)需充分?jǐn)嚢枋狗派湎x(chóng)殼體懸浮，并迅速將懸浮物倒入0.063mm的篩絹或?yàn)V紙進(jìn)行過(guò)濾，便可較為容易獲取干凈的放射蟲(chóng)標(biāo)本；b)陸坡及深海型：陸源碎屑很少，尤其是沉積物顆粒較細(xì)，沉積速率較慢，放射蟲(chóng)標(biāo)本含量較多。樣品用干凈水加少量焦磷酸鈉浸泡分散，再加上適量的過(guò)氧化氫與鹽酸(依鈣質(zhì)顆粒含量而定)去除有機(jī)質(zhì)和鈣質(zhì)顆粒，直至停止反應(yīng)，處理后的殘余樣品經(jīng)過(guò)0.063mm孔徑網(wǎng)篩的水洗，之后烘干便可直接用于標(biāo)本薄片的制作。9.3.2沉積遺殼的采集和保存采集放射蟲(chóng)遺殼樣品，海底表層樣品采用箱式采樣器、抓斗采泥器及柱狀取樣管的表層0cm~2cm樣品。樣品用塑料袋、塑料盒或玻璃瓶封存，保存在4℃的冷庫(kù)中，或存放在一般的樣品庫(kù)中也影響不大。9.4工具和試劑工具和試劑包括如下：璃棒；b)試劑：焦磷酸鈉、過(guò)氧化氫、鹽酸、四氯化碳、酒精、中性樹(shù)膠、二甲苯(用于稀釋或清除殘余樹(shù)膠)。9.5放射蟲(chóng)樣品的處理和分析樣品前處理的工作程序如下：a)稱(chēng)取干樣1g～2g或5g左右，放入300mL燒杯中，加入200mL干凈水和0.5g～1g焦磷酸鈉浸泡約10h;b)沉積物在水中被分散后，根據(jù)有機(jī)質(zhì)含量加入適量的H?O?(30%,分析純),置80℃水浴中，并充分浸泡一段時(shí)間，直至反應(yīng)結(jié)束，期間注意控制加熱的程度與時(shí)間，避免因溢出泡沫而丟失放射蟲(chóng)標(biāo)本；c)根據(jù)鈣質(zhì)含量加入適量36%分析純的HCl,等待約10min,或至反應(yīng)結(jié)束；d)加入適量干凈水，靜置約5min,倒掉上層清液，如此重復(fù)2遍～3遍，以去除多余的HCl和H?O?,減少水體中的酸性含量；e)將燒杯置于超聲波振蕩器中，持續(xù)1min～2min,以除去放射蟲(chóng)表面粘附的粘土；f)用0.063mm銅篩沖洗樣品，注意不應(yīng)用過(guò)大的水力沖洗，以免標(biāo)本的溢出；g)將0.063mm篩子中的剩余樣品收集到小燒杯或器皿中沉淀、去水、烘干，以備制片。薄片的制作工作程序如下：a)干樣制片法：取用每一個(gè)樣品的全部(或按比例)標(biāo)本，置于載玻片中央，滴上若干酒精使其分散，并用針形物協(xié)助均勻鋪開(kāi)，鋪開(kāi)的面積與蓋玻片(一般為24mm×50mm)相同，稍后酒精全部揮發(fā)，或可在電熱板上加速烘干，待標(biāo)本中的水分完全去除后，滴加3滴～5滴中性樹(shù)膠，再用蓋玻片輕輕地覆上，使樹(shù)膠慢慢擴(kuò)散至完全遍布標(biāo)本與蓋玻片的區(qū)域。制片之前或之后需在載玻片上做好樣品的編號(hào)標(biāo)記；b)水樣制片法：在標(biāo)本中保存一定量的水，使用小吸管先均勻攪拌，再吸取一定比例的含水樣均勻地置于載玻片上，分散面積與蓋玻片面積相同，之后將載玻片放在電熱板上烘干，其余的封片方法與上述相同；c)使用電熱板加熱或烘干的溫度一般控制在60℃~80℃;d)制作好的標(biāo)本薄片可讓其自然干固，也可放在烘箱中一段時(shí)間(60℃~80℃,不宜過(guò)高，以免起泡),待樹(shù)膠固結(jié)硬化后用二甲苯清洗(擦除)薄片上的多余樹(shù)膠；e)將薄片貼上事先準(zhǔn)備好的標(biāo)簽，注意與編號(hào)的一一對(duì)應(yīng)。9.6資料整理放射蟲(chóng)調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，群落分析的計(jì)算方法見(jiàn)附錄E。10沉積硅藻調(diào)查調(diào)查通過(guò)對(duì)硅藻遺殼進(jìn)行采集、富集和統(tǒng)計(jì)鑒定，查明調(diào)查海區(qū)硅藻遺殼的分布狀況、保存狀況以及群落組成，進(jìn)而反演調(diào)查海域的水文、氣候和環(huán)境信息。技術(shù)要求包括如下：a)表層取樣要求是沉積物表層0cm～2cm的樣品，柱狀取樣的分層按照每2cm的間隔，或者按照任務(wù)要求；b)如果分析樣品為濕樣，取5g～10g;如果分析樣品為干樣，則取1g～5g;c)硅藻的標(biāo)本鑒定在生物顯微鏡的透射光中進(jìn)行，每個(gè)樣品進(jìn)行隨機(jī)行數(shù)觀察，建議鑒定到種或變型，否則鑒定到屬。對(duì)于殼體不完整的個(gè)體，中心綱硅藻以一半以上完整，羽紋綱硅藻以縱溝一側(cè)完整參與記數(shù)。在不同的調(diào)查海區(qū)可各自選取優(yōu)勢(shì)種或常見(jiàn)種進(jìn)行鑒定(如任務(wù)要求統(tǒng)計(jì)種類(lèi)多樣性，則需鑒定每個(gè)樣品中的全部種類(lèi)),其他種類(lèi)標(biāo)本僅做數(shù)量統(tǒng)計(jì)；d)每個(gè)分樣樣品鑒定統(tǒng)計(jì)的個(gè)體數(shù)量要求大于300個(gè)，單位以個(gè)每克干樣或個(gè)每平方厘米表示，如分析樣品中的硅藻標(biāo)本不足300個(gè)，則全部統(tǒng)計(jì)；對(duì)各鑒定種類(lèi)的統(tǒng)計(jì)最后需換算為相對(duì)豐度。10.3沉積硅藻樣品的采集和保存根據(jù)不同類(lèi)型海底沉積物中硅藻含量的不同，硅藻標(biāo)本的處理方法分為兩類(lèi)：a)陸架及淺水型：以陸源碎屑及各種鈣質(zhì)生物殼體為主，沉積速率較快，硅藻含量相對(duì)很少。硅藻標(biāo)本獲取的處理方法為樣品用蒸餾水浸泡分散，再加上適量的過(guò)氧化氫與鹽酸(依鈣質(zhì)顆粒含量而定)去除有機(jī)質(zhì)和鈣質(zhì)顆粒，直至停止反應(yīng)，再將處理好的樣品置于比重約為2.4的溴化鋅或其他重液中進(jìn)行浮選，充分?jǐn)嚢枋构柙鍢悠窇腋?，之后便可直接用于?biāo)本薄片的制作；b)陸坡及深海型：陸源碎屑很少，尤其是沉積物顆粒較細(xì)，沉積速率較慢，硅藻標(biāo)本含量相對(duì)較多。硅藻標(biāo)本獲取的處理方法為樣品用蒸餾水浸泡分散，再加上適量的過(guò)氧化氫與鹽酸(依鈣質(zhì)顆粒含量而定)去除有機(jī)質(zhì)和鈣質(zhì)顆粒，直至停止反應(yīng)，之后便可直接用于標(biāo)本薄片的制作。10.3.2沉積遺殼的采集和保存表層沉積物：用塑料刀或勺從采泥器中刮取剛采集的樣品上部0cm～2cm的沉積物，代表表層樣。通常情況下，取5g左右新鮮樣品，裝入聚乙烯袋中封存，貼上填寫(xiě)好站號(hào)及層位的標(biāo)簽，放入樣品柱狀沉積物：按照分析的精度，在每個(gè)層位取5g左右新鮮樣品或1g干樣，裝入聚乙烯袋中封存，貼上填寫(xiě)好站號(hào)及層位的標(biāo)簽，放入樣品箱中，置于陰涼處保存，備分析使用。通風(fēng)櫥。10.5沉積硅藻樣品的處理和分析離心機(jī)法的工作程序如下：a)用長(zhǎng)柄藥匙取2g左右沉積物濕樣，置于5mL試管底部，加入體積約三倍于樣品的10%HCl去除鈣質(zhì)，至不冒氣泡為止(具體時(shí)間視沉積物中的鈣質(zhì)含量決定);b)在2500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min,倒掉殘余HCl并用蒸餾水清洗試管內(nèi)部3次；c)洗凈后加入30%H?O?3mL～4mL,在恒溫60℃水浴鍋中煮1h～2h去除有機(jī)質(zhì)，至不冒氣泡為止；d)在2500r/min轉(zhuǎn)速下離心分離5min,倒掉H?O?,并用蒸餾水清洗試管內(nèi)部3次。注：根據(jù)耗費(fèi)時(shí)間的長(zhǎng)短，有離心機(jī)法和靜置沉淀法兩種前處理程序。如果時(shí)間允許，建議少用離心機(jī)，用靜置沉淀的方法分離沉積物與上清液。靜置沉淀法的工作程序如下：a)取沉積物樣品1g～2g,在裝有硅藻樣品的小燒杯中加入10%～15%的稀鹽酸，待樣品與鹽酸完全反應(yīng)后攪拌均勻并靜置12h～24h;b)倒掉殘余鹽酸；加入蒸餾水，靜置至少24h后，倒掉上清液，如此用蒸餾水重復(fù)清洗3次；c)加入濃度為30%的雙氧水(H?O?),置于恒溫水浴鍋中(60℃)加熱1h～2h;d)將樣品從水浴鍋中取出，同樣用蒸餾水清洗3次。注：如果樣品為干樣，則宜取干樣1g～5g,放入300mL燒杯中，加入200mL蒸餾水和0.5g～1g焦磷酸鈉浸泡約10h,待沉積物分散后，再進(jìn)行上述相關(guān)處理。玻片的制作工作程序如下：a)蓋玻片在使用前先用10%～20%的稀HCl浸泡至少24h,然后再用酒精浸泡去除HCl,以備使用；b)用玻璃棒將處理好的硅藻液體均勻涂于蓋玻片上，待蓋玻片上的硅藻液體風(fēng)干后，在載玻片上滴加1滴～2滴中性樹(shù)脂，輕輕蓋上涂好的蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡；c)制作好的標(biāo)本玻片可讓其自然風(fēng)干，也可放在烘箱中加熱48h(45℃~55℃,不宜過(guò)高，以免起泡);d)取出玻片，待玻片冷卻后，在玻片上貼好已準(zhǔn)備的標(biāo)簽，保存于樣品盒中；e)每個(gè)樣品制片兩張，以備鑒定分析。將做好的玻片在×1000倍生物顯微鏡下進(jìn)行硅藻的鑒定，計(jì)數(shù)在×400倍下進(jìn)行。每個(gè)樣品統(tǒng)計(jì)硅藻殼面數(shù)至少300粒(不包括硅藻休眠孢子和復(fù)大孢子)。計(jì)算出各硅藻種占各樣品硅藻總數(shù)除硅藻休眠孢子和復(fù)大孢子外的相對(duì)百分含量，以便于進(jìn)一步的數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析。沉積硅藻調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，群落分析的計(jì)算方法見(jiàn)附錄E。11顆石藻調(diào)查調(diào)查通過(guò)對(duì)沉積物中顆石藻取樣分析和觀察鑒定，進(jìn)行年代地層學(xué)分析，推測(cè)沉積物的地層年代；對(duì)顆石藻群落特征分析，探討其海洋學(xué)/古海洋學(xué)意義；對(duì)顆石藻保存特征分析，探討沉積環(huán)境(含沉積物來(lái)源)或成巖作用。技術(shù)要求包括如下：a)取樣質(zhì)量：樣品無(wú)污染和混樣，采用一次性取樣工具；b)取樣深度或間隔：海底表層取0cm～2cm深度的樣品，箱式、多管和柱狀取樣的分層按照每2cm～10cm的間隔，或者按照任務(wù)要求。對(duì)于保存一定沉積序列抓斗樣，有條件可插管，然后按柱狀樣分層取樣；c)取樣量：陸架淺水型沉積物取5g～10g,陸坡及深水型沉積物取1g～2g,并換算成干重。推薦采樣體積大于3cm3或重量大于5g,可滿足制片前清理樣品(刮去外層)、多次制片或掃描電鏡樣分析的需求；d)鑒定要求：優(yōu)勢(shì)類(lèi)別鑒定到種或?qū)?；e)統(tǒng)計(jì)要求：每個(gè)樣品至少觀察5個(gè)視野(顯微放大倍率1000倍),鑒定統(tǒng)計(jì)的個(gè)體數(shù)量要求大于300個(gè)。如分析樣品中顆石粒個(gè)體不足300個(gè)，則至少觀察統(tǒng)計(jì)100個(gè)視野；f)群落特征參數(shù)：包括種類(lèi)數(shù)、優(yōu)勢(shì)種和常見(jiàn)種，計(jì)算相對(duì)豐度、分異度等。11.3顆石藻樣品的采集和保存常見(jiàn)的沉積物取樣方式主要有箱式、多管、抓斗、重力活塞以及鉆探等方式，其中抓斗取樣難以獲得代表海底海水和沉積物交界的沉積物樣品，少數(shù)情況可保存一定沉積序列。取樣后，樣品用密封式塑料袋(常用)、密封式塑料盒或玻璃瓶封存，有條件可保存在恒溫為4℃的冷庫(kù)中，或存放在常溫樣品庫(kù)中保存。11.4工具和試劑工具和試劑包括如下：a)制片工具：燒杯(常用50mL,20mL),洗瓶，電熱板，載玻片，蓋玻片，大小號(hào)吸管，玻璃棒(大b)試劑與溶劑：蒸餾水，氨水(堿性緩沖液pH9左右配制：1L蒸餾水中加數(shù)滴氨水，搖勻，用試紙檢驗(yàn)pH值),稀鹽酸(10%)用于清洗容器和工具；c)封片介質(zhì)：要求折射率低于或介于方解石之間，即1.658～1.486,中性樹(shù)膠(或加拿大樹(shù)膠),或光學(xué)膠水(該法需要配備紫外光照射),或冷杉膠；d)觀察工具：主要為偏光顯微鏡(放大倍數(shù)200倍、400倍、1000倍),顯微鏡的反差裝置視需要而定。有條件可用掃描電鏡或透射電鏡。11.5顆石藻樣品的處理和分析顆石藻由于個(gè)體十分微小，很容易受到交叉污染，制樣中注意以下事項(xiàng)：a)試驗(yàn)臺(tái)潔凈：用于制樣的部分最好用一次性紙張覆蓋，制完一個(gè)樣品后更換，制樣過(guò)程中應(yīng)避免溶液飛濺；b)樣品新鮮：宜刮去樣品外表，使用里面樣品；從樣品袋中取樣或刮樣品表面時(shí)避免手接觸樣品，可用一次性手套或用一次性紙張隔離；c)制樣容器和工具潔凈：宜使用一次性工具(如牙簽、紙張),多次使用的容器和工具需清洗并在稀鹽酸(10%)中浸泡10min左右，最后沖洗干凈。簡(jiǎn)單涂片法的工作程序如下：a)標(biāo)記一個(gè)載片；b)刮取綠豆大小的新鮮沉積物，置于蓋片/載片上；加一滴蒸餾水，用牙簽來(lái)回涂抹成濃稠的沉積物懸浮液；c)用牙簽在蓋片/載片上薄薄地涂抹一層；涂片過(guò)程中可將粗顆粒用牙簽趕到邊緣并拋棄，然后置電熱板(通常設(shè)定溫度70℃~90℃)上快速干燥；d)取適量封片介質(zhì)置于載片/蓋片上，并將蓋片蓋在載片上，置于電熱板上加熱，壓實(shí)和擠壓排除介質(zhì)中氣泡，取下冷卻；如使用羅蘭德光學(xué)膠水(Norland),則用紫外光照射數(shù)分鐘即可。其中第2步的替代方法為：b)取原樣少許置于燒杯中加入適量緩沖后的蒸餾水浸泡分散，混合均勻后取1滴～2滴滴于蓋片/載片上陸架淺?；蛏詈Ｖ亓α鞒练e樣品中顆石含量很少，需要采用沉淀富集法，步驟如下：a)溶解和分散樣品：取約1g樣品，置于燒杯中加入適量緩沖液(pH9左右)浸泡后攪動(dòng)分散；或置于超聲波水池中震蕩10s～15s,使樣品散開(kāi)，攪動(dòng)均勻；b)分離粗碎屑物：攪動(dòng)均勻后的樣品溶液靜置5min～10min左右，粗顆粒(砂)碎屑逐漸沉淀到燒杯底部，將上覆樣品溶液倒入另一燒杯，拋棄底部粗碎屑物；c)分離粘土碎屑物：上覆樣品溶液(燒杯加蓋或覆蓋紙張)靜置15h～20h,倒棄上覆溶液(主要含粘土礦物),取底部沉淀物攪勻，制樣。如樣品中粘土粒級(jí)組分多，該步驟可重復(fù)2次~3次。該步驟也可用離心法，需要對(duì)代表性樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定分離粘土組分所需離心處理時(shí)的轉(zhuǎn)速與時(shí)間。顆石藻調(diào)查的資料整理應(yīng)滿足本標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定，具體工作包括以下幾個(gè)方面：a)顆石藻的分類(lèi)鑒定：對(duì)顆石藻觀察和鑒定的方法主要借助偏光顯微鏡，放大1000倍左右觀察，一般鑒定到種或?qū)?，部分?lèi)別可鑒定到屬。對(duì)于個(gè)體十分微小的物種，可借助掃描電鏡等，放大10000倍以上觀察鑒定；b)顆石藻保存特征分析：顆石藻保存特征指顆石藻個(gè)體是否遭受(化學(xué)溶蝕或物理破碎)破壞或次生結(jié)晶(重結(jié)晶)作用及程度的粗略定性和定量分級(jí)特征(見(jiàn)表I.1);沉積物中所有顆石粒相對(duì)豐度特征，即顆石粒個(gè)體占沉積物碎屑顆粒數(shù)量的百分比(見(jiàn)表I.2),參考Rothwell(1989)估計(jì)沉積物中礦物碎屑顆粒含量方法。均應(yīng)觀察10個(gè)以上視野(放大倍率1000倍),其中確定沉積物缺乏顆石粒的觀察應(yīng)統(tǒng)計(jì)100個(gè)視野；c)顆石藻類(lèi)別豐度定量分析：有兩個(gè)最低數(shù)量要求每個(gè)樣品鑒定統(tǒng)計(jì)顆石藻個(gè)體數(shù)量大于300個(gè)；每個(gè)樣品觀察視野(1000倍)數(shù)大于5個(gè)，這5個(gè)視野宜分散在樣品涂片中不同部位。對(duì)于顆石藻豐度很高樣品，單個(gè)視野中顆石藻個(gè)體數(shù)接近或大于100個(gè)，可利用目鏡中十字絲劃分觀察象限，對(duì)1/4視野中的顆石藻進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)，同樣至少統(tǒng)計(jì)5個(gè)視野中的1/4象限；對(duì)顆石藻十分稀少樣品，至少統(tǒng)計(jì)100個(gè)視野；d)顆石藻類(lèi)別豐度計(jì)算：對(duì)于海洋調(diào)查項(xiàng)目，推薦用相對(duì)豐度，分別計(jì)算每個(gè)類(lèi)別個(gè)體總數(shù)占顆石藻總個(gè)體的百分比；e)另有多種半定量統(tǒng)計(jì)法(如Backman,1983等),可計(jì)算觀察薄片中一定面積內(nèi)生態(tài)或年代標(biāo)志顆石藻類(lèi)別的豐度。而定量分析的制片法(隨機(jī)沉降法，如Beaufort,1991;Su,1996;或噴涂法，如Bollmann等，1999;小珠標(biāo)準(zhǔn)法，如Okada,1992),可估計(jì)單位重量樣品中顆石藻類(lèi)別的絕對(duì)豐度。這些方法多用