(高清版)GBT 40179-2021 植物中有機酸的測定 液相色譜-質譜-質譜法

ICSCCS07.080A40GB/T40179—2021液相色譜-質譜/質譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40179—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國測試技術研究院生物研究所、四川大學、中國計量大學、北京工商大學、河北省食品檢驗研究院。1GB/T40179—2021植物中有機酸的測定液相色譜-質譜/質譜法1范圍本文件規(guī)定了植物中有機酸的液相色譜-質譜/質譜測定方法?；郊姿岷?,4-二羥基苯甲酸的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1有機酸organicacids植物材料中一類具有酸性的有機化合物。4原理試樣用50%甲醇溶液加熱回流提取后，經反相色譜柱分離，液相色譜-質譜/質譜法測定和確證，內標工作曲線法定量。5試劑或材料除非另有說明，本方法使用的試劑均為色譜純。水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.2甲酸。5.30.1%甲酸溶液：移取甲酸1.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。5.450%甲醇溶液：移取甲醇500.0mL于1L容量瓶中，用水定容至刻度。信息詳見附錄A中表A.1,純度均≥98%。5.6單一標準儲備液：分別準確稱取各有機酸標準品適量(精確到0.01mg),其中富馬酸、反式-烏頭酸2GB/T40179—2021酸、2,5-二羥基苯甲酸和3,4-二羥基苯甲酸用甲醇溶解，混勻，配制成濃度均為1000.0mg/L的有機酸單一標準儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.7混合標準儲備液：分別準確吸取適量各有機酸單一標準儲備液于同一10mL容量瓶中，用50%甲的混合標準儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.8內標儲備液：準確稱取琥珀酸-2,2,3,3-d?標準品適量(精確到0.01mg),用50%甲醇溶液溶解，混勻，配制成濃度為100mg/L的內標儲備液，于0℃~4℃下密封保存，有效期為3個月。5.9內標溶液：準確吸取內標儲備液1.0mL于100mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋并定容至刻5.10混合標準工作溶液：分別準確吸取適量混合標準儲備液于10mL容量瓶中，再分別準確加入2.5mL內標溶液，用50%甲醇溶液稀釋配制成濃度均為0.10mg/L、0.25mg/L、0.50mg/L、0.75、1.0mg/L、1.25mg/L的系列混合標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.110.22μm親水性尼龍微孔濾膜。6儀器設備6.1液相色譜-質譜/質譜聯(lián)用儀：配電噴霧離子源(ESI)。6.2電子天平：感量為0.0001g和0.01mg。6.3高速離心機：轉速不低于10000r/min。6.4高速均質器。6.5高速粉碎機。6.6冷凝回流裝置。7分析步驟7.1樣品制備取金銀花、黨參、山楂、枸杞等有代表性干制成兩份，裝入潔凈的盛樣容器內，密封并標識，于0℃~4℃下避光保存，一周內測定。7.2試樣處理稱取約1.5g干樣或10g鮮樣(精確至0.001g)于100mL圓底燒瓶中，加入內標儲備液625μL和離心5min,取2.0mL上清液于10mL容量瓶中，用50%甲醇溶液定容至刻度，混勻，過0.22μ3GB/T40179—2021b)流動相：流動相A為0.1%甲酸溶液，流動相B為甲醇，梯度洗脫程序見表1;時間/min流動相B體積分數(shù)/%05655555在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果樣品中待測物質的保留時間和標準工作溶液中對應的保留時間一致(變化范圍在士2.5%以內),且樣品譜圖中待測組分監(jiān)測離子的相對豐度和濃度相當?shù)臉藴适?0士30士50見附錄B中表B.1,多反應監(jiān)測圖參見附錄C。4GB/T40179—20217.5平行試驗按7.2～7.4的規(guī)定對同一試樣進行兩次平行測定。8試驗數(shù)據處理樣品中待測物含量的計算見式(1): (1)式中：X——試樣中被測組分含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——從內標標準工作曲線上得到的被測組分溶液質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣溶液總體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質量，單位為克(g)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留兩位小數(shù)。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。本方法測定14種有機酸的定量限參見附錄A中表A.1。5(資料性)有機酸化合物信息及定量限有機酸化合物信息及定量限見表A.1。表A.1有機酸化合物信息及定量限序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質量定量限/(mg/kg)干樣鮮樣1富馬酸fumaricacidC?H?O?0.492反式-烏頭酸t(yī)rans-aconiticacid4023-65-8C?H?O?0.253沒食子酸gallicacidC?H?O?0.120.8242,5-二羥基苯甲酸2,5-dihydroxybenzoicacid490-79-9C?H?O?0.120.825己二酸adipicacidC?H??O?0.496綠原酸chlorogenicacid327-97-90.120.827對羥基苯甲酸p-hydroxybenzoicacid99-96-7C?H?O?0.030.2083,4-二羥基苯甲酸3,4-dihydroxybenzoicacid99-50-3C?H?O?0.120.829香草酸vanillicacidCgHgO?0.986.52咖啡酸caffeicacid331-39-5C,HgO?0.25丁香酸syringicacid530-57-4C?H??O?0.49對香豆酸p-coumaricacid501-98-4C?H?O?0.120.82阿魏酸ferulicacidC??H??O?0.25水楊酸salicylicacid69-72-7C?H?O?0.120.82琥珀酸-2,2,3,3-d?succinicacid-2,2,3,3-d?14493-42-6C?H?D?O?GB/T40179—2021(資料性)e)干燥氣溫度：290℃;序號中文名稱保留時間min定量離子對m/定性離子對m/z源內碎裂電壓V碰撞能量V1富馬酸115.0/71.0115.0/71.0;115.0/32.12反式-烏頭酸173.0/85.1173.0/85.1;173.0/128.93沒食子酸8.80169.0/125.0169.0/125.0;169.0/124.042,5-二羥基苯甲酸153.0/109.0153.0/109.0;153.0/108.05己二酸145.1/101.2145.1/101.2;145.1/83.26綠原酸353.1/191.0353.1/191.0;353.1/85.07對羥基苯甲酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.083,4-二羥基苯甲酸153.0/109.1153.0/109.1;153.0/108.09香草酸167.1/152.0167.1/152.0;167.1/108.0咖啡酸179.0/135.1179.0/135.1;179.0/134.0丁香酸197.1/182.0197.1/182.0;197.1/123.0對香豆酸163.0/119.0163.0/119.0;163.0/93.1阿魏酸193.1/134.0193.1/134.0;193.1/178.0水楊酸137.0/93.0137.0/93.0;137.0/65.1琥珀酸-2,2,3,3-d?121.0/77.0121.0/77.0;121.0/102.06響應值/104響應值/104響應值/104響應值/104響應值/104(資料性)15種有機酸的液相色譜-質譜/質譜MRM15種有機酸的液相色譜-質譜/質譜MRM圖見圖C.1～圖C.15。響應值門03時應值/103響應值/104i/min8.80minr/mll圖C.1富馬酸的MRM圖圖C.2反式-烏頭酸的MRM圖圖C.3沒食子酸的MRM圖4.5-4-0//min圖C.42,5-二羥基苯甲酸的圖C.5己二酸的MRM圖圖C.6綠原酸的MRM圖MRM圖//minminl/min16.6216.62min2.5-/min對羥基苯甲酸的MRM圖3,4-二羥基苯甲酸的MRM圖響應值/10響應值/10響應值/104GB/T40179—2021響應值/1043.5-3-2.5-2-0.5-0