T-YNRZ 011-2024 咖啡生豆氨基酸總量測定分光光度法

ICS67.140.20CCSB35TheDeterminationofTotalAminoAcidsinCoffeebeansIT/YNRZ011—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5儀器和器皿 6試劑和溶液 7分析步驟 28結(jié)果計算 29檢測報告 3T/YNRZ011—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提出。本文件由云南省熱帶作物學(xué)會歸口。本文件起草單位：云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、大理大學(xué)。本文件主要起草人：陳玉芹、趙成法、李慶聰、尹紅星、戴余波、王應(yīng)清、劉小瓊、胡永亮、黃家衛(wèi)。1T/YNRZ011—2024咖啡生豆氨基酸總量測定分光光度法本文件規(guī)定了咖啡生豆中氨基酸總量測定的術(shù)語和定義，原理、儀器和器皿，試劑和溶液、分析步驟，結(jié)果計算和檢測報告的方法。本文件適用于咖啡生豆中氨基酸總量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5009.124食品中氨基酸的測定GB/T18007咖啡及其制品術(shù)語NY/T1518袋裝生咖啡取樣3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1咖啡生豆咖啡生豆即未烘焙過的咖啡豆，按GB/T18007的5.6規(guī)定執(zhí)行3.2茚三酮比色法按GB5009.124規(guī)定執(zhí)行4原理氨基酸在pH8.0的條件下與茚三酮反應(yīng)，形成紫色絡(luò)合物，用分光光度法在570nm的波長下測定其含量。5儀器和器皿5.1分析天平：感量0.0001g。5.2可見光分光光度儀。5.3安瓿瓶。5.4陶瓷蒸發(fā)皿。5.5比色管：磨口，50mL。5.6比色杯：1cm。5.7容量瓶：25mL、50mL、100mL、1000mL。5.8酒精噴燈。5.9研磨機或組織粉碎機。6試劑和溶液除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純（AR），水為蒸餾水。6.1試劑2T/YNRZ011—20246.1.1亮氨酸：純度≥98%。6.1.2濃鹽酸（HCl）：質(zhì)量分數(shù)≥36%。6.1.3磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O）。6.1.4磷酸二氫鉀（KH2PO4）。6.1.5茚三酮：純度≥95%。6.1.6氯化亞錫（SnCl2?2H2O）。6.2溶液配制6.2.16mol/L鹽酸溶液：取500mL濃鹽酸（6.1.2）加水稀釋至1000mL，混勻。6.2.2pH8.0磷酸鹽緩沖液配制6.2.2.11/15mol/L磷酸氫二鈉：稱取11.9g十二水磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O加水溶解后定容至1000mL。6.2.2.21/15mol/L磷酸二氫鉀：稱取經(jīng)110℃烘干2小時的磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.908g，加水溶解后定容至100mL，搖勻備用。6.2.2.3取1/15mol/L磷酸氫二鈉溶液（6.2.2.1）950mL和1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液（6.2.2.2）50mL，混勻，該混合溶液pH為8.0。6.2.32%茚三酮溶液配制稱取茚三酮（純度≥95%）2g，加50mL水和80mg氯化亞錫（SnCl2?2H2O）攪拌均勻。分次加少量水溶解，放在暗處，靜置一晝夜，過濾后加水定容至100mL容量瓶中，搖勻備用。6.2.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制6.2.4.1亮氨酸10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液：精確稱量亮氨酸（純度≥98%）0.25g，用蒸餾水溶解后，定量轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，加水至標(biāo)線，搖勻，此時標(biāo)準(zhǔn)儲備液1mL含有10mg的亮氨酸。6.2.4.2亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：精確移取0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液（6.2.4.1），分別加水定容至50mL容量瓶中，搖勻。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液1mL分別含有0.10mg、0.20mg、0.30mg、0.40mg、0.50mg、0.60mg亮氨酸。7分析步驟7.1樣品制備取樣按照NY/T1518的規(guī)定執(zhí)行，樣品制備按照GB5009.124-2016中5.1的規(guī)定。7.2樣品試液制備稱取試樣100mg～200mg（0.1mg），于10mL安瓿瓶中，準(zhǔn)確加入10mL6mol/L鹽酸溶液，用酒精噴燈封口，封口后的安瓿瓶放入110℃±1恒溫箱內(nèi)水解24h后，取出冷卻至室溫。打開安瓿瓶將水解液全部轉(zhuǎn)移至陶瓷蒸發(fā)皿中，70℃水浴蒸干，加水溶解后過濾至容量瓶中用水定容至100mL，制成待測液，備用。7.3測定準(zhǔn)確吸取待測液（7.2）1mL，注入50mL比色管中，加0.5mLpH8.0磷酸緩沖液（6.2.2）和0.5mL2%茚三酮溶液（6.2.3），混合均勻，在沸水浴中加熱15min，立即冷卻后加水定容至50mL。放置10min后，1cm比色杯，在570nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度(A)。7.4亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作分別準(zhǔn)確吸取1mL亮氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（6.2.4.2）于一組50mL比色管中，按7.3的操作測定吸光度(A)。將測得的吸光度作為y坐標(biāo)，對應(yīng)的亮氨酸含量作為x坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.5空白試驗除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。8結(jié)果計算3T/YNRZ011—20248.1計算方法咖啡生豆中氨基酸總量以干基質(zhì)量分數(shù)（%）表示，按式（1）計算：式中：C—根據(jù)7.4測定的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的亮氨酸的毫克數(shù)，單位為毫克（mgV1—試液總量，單位為毫升（mL）；V2—測試用試液量，單位為毫升(mL)；m—試樣重量，單位為克（gω—試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分數(shù)%）。取兩次測