(正式版)GB/T 21037-2024 飼料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測定

代替GB/T21037—2007二甲氧甲基芐氨嘧啶的測定Determinationofdiaveridine,trimethoprimandormetopriminfeeds國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會IGB/T21037—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T21037—2007《飼料中三甲氧芐胺嘧啶的測定高效液相色譜法》,與a)增加了二甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測定方法(見第1章);b)適用范圍中增加了精料補充料和動物源性飼料原料(見第1章);c)更改了檢出限和定量限(見第1章，2007年版的第1章);d)增加了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(見第4章);e)更改了原理(見5.1,2007年版的第3章);f)更改了試驗步驟(見5.5,2007年版的第7章);g)更改了精密度(見5.7,2007年版的第9章)。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC76)提出并歸口。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2007年首次發(fā)布為GB/T21037—2007;1GB/T21037—2024二甲氧甲基芐氨嘧啶的測定本文件描述了飼料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜測定方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料、精料補充料、添加劑預(yù)混合飼料和動物源性飼料原料中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶的測定。本文件液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的檢出限為2.5μg/kg,定量限為5.0μg/kg;高效液相色譜法的檢出限為0.25mg/kg,定量限為0.50mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(仲裁法)4.1原理試樣中的待測物在弱堿性條件下用乙酸乙酯提取、正己烷脫脂，混合型強陽離子交換小柱凈化，液4.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。24.2.7乙酸乙酯。4.2.12正己烷乙腈飽和溶液：量取80mL正己烷于100mL分液漏斗中，加入10mL乙腈(4.2.3)4.2.17標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1mg/mL):稱取二甲氧芐氨嘧啶(CAS:5355-16-8,純度不低于98%)、三甲氧芐氨嘧啶(CAS:738-70-5,純度不低于98%)和二甲氧甲基芐氨嘧啶(CAS:6981-18-6,純度不低于98%)標(biāo)準(zhǔn)品各10mg(精確至0.01mg),分別置于10mL容量瓶中，用1%乙酸-乙腈溶液(4.2.10)溶4.2.20內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1mg/mL):稱取dg-三甲氧芐氨嘧啶(CAS:1189460-62-5,純度不低于34.3.7氮吹儀。平行做2份試驗。稱取試樣約2g(精確至0.1mg),置于50mL離心管中，加入100μL內(nèi)標(biāo)工作乙酯(4.2.7),渦旋混合2min,超聲提取10min(5min渦旋混合1次),于4℃下10000r/min離心溶解殘渣，渦旋混合30s,再加入3mL正己烷乙腈飽和溶液(4.2.12),渦旋混合30s,于4℃下4GB/T21037—2024表1梯度洗脫程序時間/minA相/%B相/%00d)離子源溫度：350℃;待測物名稱定性離子對定量離子對碰撞能量二甲氧芐氨嘧啶三甲氧芐氨嘧啶二甲氧甲基芐氨嘧啶dg-三甲氧芐氨嘧啶在儀器的最佳條件下，分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(4.2.23)和試樣溶液(4.5.2)上機測定。溶液中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶和d?-三甲氧芐氨嘧啶的定量離子色譜圖見附錄A。在相同試驗條件下，試樣溶液中待測物的保留時間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(濃度相當(dāng))中待測物的保留5GB/T21037—2024時間一致，其相對偏差在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對，比較試樣譜圖中待測物監(jiān)測離子對的相對離子豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對應(yīng)的監(jiān)測離子對的相對離子豐度，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表3定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>20%～50%>10%～20%最大允許偏差4.5.3.5定量以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的質(zhì)量濃度和內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新測定。單點校準(zhǔn)定量時，試樣溶液中待測組分質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度相差不超過30%。4.6試驗數(shù)據(jù)處理試樣中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶含量以質(zhì)量分數(shù)w,計，數(shù)值以微克每千克(μg/kg)表示。多點校準(zhǔn)按公式(1)計算；單點校準(zhǔn)按公式(2)計算： (1)式中：p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中待測物質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?———試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮氣吹至近干后復(fù)溶試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用試樣提取溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。式中：A——試樣溶液待測物色譜峰面積；Ag;———標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)標(biāo)物色譜峰面積；ps——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);pi——試樣溶液內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮氣吹至近干后復(fù)溶試樣溶液定容體積，單位為毫升(mL);A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液待測物色譜峰面積；A;-——試樣溶液內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積；ps;———標(biāo)準(zhǔn)溶液內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——凈化用試樣提取溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);1000——換算系數(shù)。測定結(jié)果以平行測定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字?！?GB/T21037—2024在重復(fù)性條件下，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不大于該算術(shù)平均值的15%。5高效液相色譜法5.2.5乙酸乙酯。5.2.9乙腈-5%乙酸溶液：移取10mL乙腈(5.2.3)于100mL容量瓶中，用5%乙酸溶液(5.2.7)稀釋、5.2.12磷酸二氫鉀溶液(0.05mol/L):準(zhǔn)確稱取6.80g磷酸二氫鉀于1000mL容量瓶中，用水溶解、5.2.13標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(1mg/mL):稱取二甲氧芐氨嘧啶(CAS:5355-16-8,純度不低于98%)、三甲氧芐氨嘧啶(CAS:738-70-5,純度不低于98%)、二甲氧甲基芐氨嘧啶(CAS:6981-18-6,純度不低于98%)2℃~8℃貯存，有效期3個月。臨用現(xiàn)配。5.2.15混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.2.14)于10mL容量瓶中，用1%乙酸5.3儀器設(shè)備7提取10min(5min渦旋混合1次),于4℃下10000r/min離心5min,上層有機相移至另一50mL離腈飽和溶液(5.2.10),渦旋混合30s,于4℃下10000r/min離心5min,棄去上層正己烷溶液，取全部8GB/T21037—2024與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(濃度相當(dāng))中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶的保留時間一致，其相對偏差在±2.5%之內(nèi)。以二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積(響應(yīng)值)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液中待測物的質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。如超出范圍，應(yīng)將試樣溶液用1%乙酸溶液(5.2.8)稀釋后，重新測定。單點校準(zhǔn)定量時，試樣溶液中待測物的質(zhì)量濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度相差不超過30%。5.6試驗數(shù)據(jù)處理試樣中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶含量以質(zhì)量分數(shù)w;計，數(shù)值以毫克每千克(mg/kg)表示。多點校準(zhǔn)按公式(3)計算；單點校準(zhǔn)按公式(4)計算： (3)式中：p——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中待測物質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V?———試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?————凈化前復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮氣吹至近干后復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——移取上清液體積，單位為毫升(mL);1000———換算系數(shù)。 (4)式中：A——試樣溶液的待測物色譜峰面積；V?——試樣提取用乙酸乙酯總體積，單位為毫升(mL);V?——凈化前復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化、氮氣吹至近干后復(fù)溶后試樣溶液體積，單位為毫升(mL);ps———標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液待測物色譜峰面積；V?——移取上清液體積，單位為毫升(mL);V?——凈化用備用液體積，單位為毫升(mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);f——稀釋倍數(shù)；1000——換算系數(shù)。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。5.7精密度在重復(fù)性條件下，2次獨立測定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對差值不超過該算術(shù)平均值的10%。9相對非度相對豐度相對非度相對豐度(資料性)二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶、二甲