精細(xì)陶瓷 室內(nèi)照明環(huán)境下半導(dǎo)體光催化材料抗病毒活性的測(cè)定 Q-β噬菌體測(cè)試法 征求意見稿_第1頁
精細(xì)陶瓷 室內(nèi)照明環(huán)境下半導(dǎo)體光催化材料抗病毒活性的測(cè)定 Q-β噬菌體測(cè)試法 征求意見稿_第2頁
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4GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016精細(xì)陶瓷室內(nèi)照明環(huán)境下半導(dǎo)體光催化材料抗病毒活性的測(cè)定Q-β噬菌體測(cè)試法警示——經(jīng)過微生物技術(shù)培訓(xùn)的人員才宜進(jìn)行本方法的試驗(yàn)。本文件規(guī)定了含有室內(nèi)光照活性催化劑或表面有室內(nèi)光照活性催化膜的材料的抗病毒活性的測(cè)試方法,本方法通過計(jì)數(shù)經(jīng)室內(nèi)光照之后的Q-β噬菌體的減少來確定其抗病毒活性。注:在試驗(yàn)方法中,Q-β噬菌體代表流感病毒作為試驗(yàn)微生物。本文件適用于建材領(lǐng)域不同種類的室內(nèi)光催化材料,如板材、片材、平板材料等。本文件不適用于粉末,顆?;蚨嗫资覂?nèi)光激發(fā)的光催化材料。本文件適用于具有抗病毒性能的室內(nèi)光催化材料,不適用于其他用途如抗細(xì)菌性能、抗真菌性能、水中污染物降解、自清潔、防霧和空氣凈化性能的檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。ISO14605精細(xì)陶瓷(先進(jìn)陶瓷,先進(jìn)技術(shù)陶瓷)室內(nèi)光照環(huán)境下測(cè)試半導(dǎo)體光催化材料用光源[Fineceramics(advancedceramics,advancedtechnicalceramics)—Lightsourcefortestingsemiconductingphotocatalyticmaterialsusedunderindoorlightingenvironment]ISO27447精細(xì)陶瓷(先進(jìn)陶瓷、先進(jìn)技術(shù)陶瓷)半導(dǎo)體光催化材料抗菌活性的試驗(yàn)方法[Fineceramics(advancedceramics,advancedtechnicalceramics)—Testmethodforantibacterialactivityofsemiconductingphotocatalyticmaterials]ISO80000-1量和單位第1部分:總則(Quantitiesandunits—Part1:General)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1光催化劑photocatalyst在一定光源激發(fā)下,能產(chǎn)生催化作用的物質(zhì)。由光照激發(fā)、基于氧化和還原反應(yīng)的產(chǎn)生相關(guān)功能的物質(zhì)。這些功能包括分解和去除空氣和水污染物、除臭、抗菌、抗真菌、自清潔和防霧作用。3.2室內(nèi)光活性催化劑indoor-light-activephotocatalyst由普通照明用人工光源(如室內(nèi)照明環(huán)境)激發(fā)的光催化劑。3.3室內(nèi)光照環(huán)境indoorlightingenvironment采用人工光源進(jìn)行普通照明的環(huán)境。5GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:20163.4室內(nèi)光催化材料indoor-light-activephotocatalyticmaterials通過涂覆、浸泡、摻雜等方式在表面或內(nèi)部添加了室內(nèi)光活性催化劑的材料。3.5抗病毒antiviral降低材料表面病毒侵染活性的能力。3.6噬菌體bacteriophage可以感染細(xì)菌的一類病毒。3.7噬菌斑plaque由單個(gè)噬菌體侵染并裂解宿主細(xì)胞形成的清晰可見的區(qū)域。3.8室內(nèi)光活性催化抗病毒活性值indoor-light-activephotocatalystantiviralactivityvalue光催化材料與未經(jīng)光催化劑處理的對(duì)照材料在室內(nèi)光照后得到的噬菌斑數(shù)量的對(duì)數(shù)值的差值。注:該值包含了未經(jīng)室內(nèi)光照時(shí)噬菌斑數(shù)量的減少。3.9室內(nèi)光照條件下的室內(nèi)光活性催化抗病毒活性值indoor-light-activephotocatalystantiviralactivityvalueforindoorlightillumination在室內(nèi)光照射條件下光催化處理材料上噬菌斑數(shù)量的對(duì)數(shù)值與暗條件下光催化處理材料上噬菌斑數(shù)量的對(duì)數(shù)值的差值。4符號(hào)下列符號(hào)適用于本文件:A——未經(jīng)處理的樣品上接種后立即分離得到的噬菌體滴度的平均值;BD——未經(jīng)處理的樣品在暗條件下一定時(shí)間后分離得到的噬菌體滴度的平均值;BF-L——未經(jīng)處理的樣品在室內(nèi)光照強(qiáng)度L下光照一定時(shí)間后分離得到的噬菌體滴度的平均值;CD——經(jīng)室內(nèi)光照激發(fā)的光催化劑處理的樣品在暗條件下一定時(shí)間后分離得到的噬菌體滴度的平均值;CF-L——經(jīng)室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑處理的樣品在室內(nèi)光照強(qiáng)度L下光照一定時(shí)間后分離得到的噬菌體滴度的平均值;DF——稀釋倍數(shù);F——紫外濾光片的型號(hào)(條件A或條件BL——室內(nèi)光照度;Logmax——噬菌體滴度最大對(duì)數(shù)值;Logmean——3個(gè)未經(jīng)處理的樣品的噬菌體滴度對(duì)數(shù)平均值;Logmin——噬菌體滴度最小對(duì)數(shù)值;N——噬菌體滴度(噬菌斑形成單位);VD——不含室內(nèi)光照活性催化劑的樣品在暗條件下一定時(shí)間后的抗病毒活性值;6GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016VF-L——室內(nèi)光照激發(fā)的光催化材料樣品在光照強(qiáng)度F-L光照一定時(shí)間后的室內(nèi)光激發(fā)光催化劑抗病毒活性值;ΔV——室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑室內(nèi)光貢獻(xiàn)的抗病毒活性值;Z——兩個(gè)平板上噬菌斑數(shù)量的平均值。5原理該試驗(yàn)方法通過將片狀、塊狀或平板狀材料類的試樣與噬菌體接觸并置于室內(nèi)光下照射,從而獲得光催化材料的抗病毒活性值。該測(cè)試方法適用于室內(nèi)光活性催化材料的開發(fā)、性能比對(duì)、質(zhì)量保證、表征、可靠性及設(shè)計(jì)。該方法是將試樣置于室內(nèi)光照射下與噬菌體接觸來獲得室內(nèi)光激發(fā)的光催化材料的抗病毒活性。該方法適用于片材、板材或平板狀材料。在室內(nèi)光激發(fā)的光催化處理的試樣上接種噬菌體懸液,然后暴露在光下照射一定時(shí)間。光照結(jié)束后,洗脫試樣上的試驗(yàn)噬菌體懸液,用Q-β噬菌體的敏感宿主大腸桿菌測(cè)定洗脫液的噬菌斑形成單位。將未經(jīng)光催化劑處理的材料和光催化材料在經(jīng)過室內(nèi)光照強(qiáng)度照射后得到的結(jié)果以及未經(jīng)光催化處理的材料和光催化處理的材料在暗條件下相同時(shí)間得到的結(jié)果進(jìn)行比較。注:本文件試驗(yàn)方法參考了GB/T42439[1]并進(jìn)行了修改。即,采用相同的無光源尺寸、相似的操作步驟和計(jì)算方法。因此,建議應(yīng)用本文件進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)參考GB/T42439[16材料6.1試驗(yàn)微生物和試驗(yàn)準(zhǔn)備6.1.1試驗(yàn)微生物試驗(yàn)所使用的菌株應(yīng)與表1中的相同或等效,宜從世界菌種保藏聯(lián)合會(huì)(WFCC)成員機(jī)構(gòu)獲得。微生物的無菌操作應(yīng)在合適的生物安全柜中進(jìn)行。表1試驗(yàn)用的噬菌體和宿主菌ATCC23631-B1NBRC20012注:ATCC23631-B1與NBRC20012并不嚴(yán)格一致,但是它們來源相同(見附錄B)。6.1.2細(xì)菌的準(zhǔn)備細(xì)菌準(zhǔn)備要求如下:a)將大腸桿菌接種到斜面培養(yǎng)基上[6mL~10mLLB瓊脂(見6.2.4)],(37±1)℃培養(yǎng)16h~24h,存放于在5℃~10℃冰箱內(nèi);b)一個(gè)月內(nèi)可以按照上述步驟制備傳代菌種;c)超過1個(gè)月的斜面培養(yǎng)物不應(yīng)使用;7GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016d)從原代菌株開始菌種的傳代次數(shù)不超過10次。注:如果細(xì)菌在超低溫冰箱保存,從原代菌株開始菌種的傳代次數(shù)為10次。6.1.3噬菌體的準(zhǔn)備噬菌體準(zhǔn)備步驟如下:a)在300mL錐形瓶中加入25mL含鈣LB肉湯(見6.2.4),接種大腸桿菌;b)在(37±1)℃和(110±10)rpm條件下振蕩培養(yǎng)(18±2)h;c)在300mL錐形瓶中加入25mLLB培養(yǎng)基,預(yù)熱至(35~37)℃,接種0.025mLb)的培養(yǎng)物;d)按上述條件培養(yǎng),直至細(xì)菌濃度至(2.0±1.0)×108cfu/mL。宜重復(fù)此步驟多次,以建立濁度和細(xì)菌濃度之間的關(guān)系。如果已獲得充足的數(shù)據(jù),此后可只測(cè)試濁度;e)在細(xì)菌培養(yǎng)物上接種Q-β噬菌體,使噬菌體的終濃度約為2×107pfu/mL[感染倍數(shù)(m.o.i.)約為f)按b)條件培養(yǎng)細(xì)菌4h;g)將培養(yǎng)物在(4±2)℃儲(chǔ)存過夜;h)轉(zhuǎn)移培養(yǎng)物至離心管中,并于(4±2)℃,10000g條件下離心20min;i)用移液管小心地將上清液移到無菌試管中;j)將含有噬菌體的上清液通過無菌過濾器過濾以純化噬菌體溶液;k)測(cè)定噬菌體儲(chǔ)備液的滴度(見9.6),并在(4±2)℃儲(chǔ)存;l)檢測(cè)是否有細(xì)菌污染。取1mL噬菌體儲(chǔ)備液混入LB瓊脂培養(yǎng)基(見6.2.6)上,并在(37±1)℃培養(yǎng)24h。如果有菌落生長(zhǎng)則棄掉噬菌體儲(chǔ)備液;m)噬菌體儲(chǔ)備液的滴度應(yīng)不小于1.0×1010pfu/mL,且不被污染。噬菌體懸浮液的滴度宜在1.0×1011pfu/ml以上,并可能達(dá)到1.0×1013pfu/ml。注:隨著時(shí)間延長(zhǎng)噬菌體儲(chǔ)備液的滴度會(huì)緩慢降低。6.2培養(yǎng)基6.2.1通則可使用下文所列組分相同的商品培養(yǎng)基。制備的培養(yǎng)基的體積可根據(jù)所測(cè)試的試樣的數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。6.2.21/500營(yíng)養(yǎng)肉湯(1/500NB)將100mL純水、0.3g肉汁提取物、1.0g蛋白胨、0.5g氯化鈉加入到錐形瓶中,充分溶解。溶解后,取氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.1(25℃時(shí))。用純水將上述溶液稀釋500倍。使用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.2(25℃時(shí)),在(121±2)℃條件下高壓蒸汽滅菌至少15min。如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為7d。6.2.3鈣溶液取100mL純水、3.0g二水氯化鈣放入錐形瓶中,充分溶解。加棉塞并高壓蒸汽滅菌(見6.2.2)。制備好后,如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為6個(gè)月。6.2.4含鈣LB溶液取1000mL純水、10.0g蛋白胨、5.0g酵母提取物和10.0g氯化鈉,放入錐形瓶中,充分溶解。當(dāng)各組分充分溶解后,用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.2(25℃時(shí))。加棉塞并高壓蒸汽滅菌(見8GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:20166.2.2)。高壓蒸汽滅菌后,加入10mL鈣溶液并混勻。制備好后,如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為1個(gè)月。6.2.5瓊脂粉使用微生物級(jí)的瓊脂粉,濃度為1.5%時(shí)膠強(qiáng)度在400g/cm2~600g/cm2的瓊脂粉。6.2.6LB瓊脂取1000mL純水、10.0g蛋白胨、5.0g酵母提取物、10.0g氯化鈉及10.0g瓊脂粉(見6.2.5),放入錐形瓶中,充分混勻。加熱,使水能充分溶解各組分。用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.2(25℃時(shí))。加棉塞并高壓蒸汽滅菌(見6.2.2)。制備好后,如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為1個(gè)月。6.2.7底層瓊脂平板(含鈣LB瓊脂)取1000mL純水、10.0g蛋白胨、5.0g酵母提取物、10.0g氯化鈉及10.0g瓊脂粉(見6.2.5),放入錐時(shí))。加棉塞并高壓蒸汽滅菌(見6.2.2)。高壓蒸汽滅菌后,加入10mL鈣溶液并充分混勻。制備好后,在90mm直徑的培養(yǎng)皿中注入(15~20)mL的培養(yǎng)基,儲(chǔ)存于(5~10)℃?zhèn)溆?。其有效期?4d。6.2.8上層瓊脂取1000mL純水、15.0g蛋白胨、7.5g酵母提取物、15.0g氯化鈉及10.0g瓊脂粉(見6.2.5),放入錐時(shí))。加棉塞并滅菌(見6.2.2)。滅菌完畢,加入15mL鈣溶液并充分混勻。制備好后,如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為1個(gè)月。注:當(dāng)重新融化上層瓊脂時(shí),在沸水中加熱錐形瓶,不要高壓蒸汽滅菌。6.2.9卵磷脂吐溫80大豆酪蛋白營(yíng)養(yǎng)液(SCDLP)取1000mL純水、17.0g酪蛋白胨、3.0g大豆蛋白胨、5.0g氯化鈉、2.5g磷酸氫二鉀、2.5g葡萄糖、1.0g卵磷脂,放入錐形瓶中并充分溶解。加入7.0g非離子型表面活性劑(吐溫80)并充分溶解。使用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.2(25℃時(shí))。如果需要,分裝于試管中,加棉塞并滅菌(見6.2.2)。制備好后,如不立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為1個(gè)月。6.2.10蛋白胨生理鹽水溶液取1000mL純水、10.0g蛋白胨、8.5g氯化鈉,加入到錐形瓶中,并充分溶解。當(dāng)各組分充分溶解后,使用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.1(25℃時(shí))。如果需要,分裝于試管中,加棉塞并滅菌(見6.2.2)。制備好后,如不是立即使用,則儲(chǔ)存于(5~10)℃,其有效期為1個(gè)月。7儀器設(shè)備7.1試驗(yàn)裝置試驗(yàn)裝置可以提供室內(nèi)光照射來激活室內(nèi)光活性光催化劑以測(cè)定室內(nèi)光活性的光催化材料的抗病毒活性值。它包含了一個(gè)光源和一個(gè)裝有試樣的試驗(yàn)艙。測(cè)試裝置示意圖見圖1。9GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016圖1試驗(yàn)裝置示意圖7.2覆蓋膜所用的覆蓋膜應(yīng)是惰性的,不吸水的,具有良好的密封性能,在380nm至780nm范圍內(nèi),光學(xué)透明度超過85%薄膜應(yīng)剪成(40±2)mm×(40±2)mm片狀。7.3保濕玻璃板保濕玻璃由厚度小于1.1mm的玻璃組成,在380nm至780nm范圍內(nèi),光學(xué)透明度超過85%,其尺寸宜能完全覆蓋培養(yǎng)皿。7.4玻璃管或玻璃棒玻璃管或玻璃棒符合ISO27447的規(guī)定。宜通過將直徑約為4mm~6mm的玻璃棒或玻璃管切割成10cm~15cm長(zhǎng)度且彎成U形或V形制備。注:玻璃管或玻璃棒用于支撐培養(yǎng)皿中的試樣。7.5濾紙宜通過將纖維濾紙裁剪成直徑約85mm制備。注:根據(jù)其吸水能力,每個(gè)培養(yǎng)皿中需要(1~4)片圓形的纖維濾紙。7.6光源室內(nèi)光照條件的光源要符合ISO14605的規(guī)定。應(yīng)使用色溫3800K~4500K的鹵代磷酸鹽熒光燈作為光源。如不能獲得鹵代磷酸鹽熒光燈,建議使用色溫3800K~4500K、顯色指數(shù)(Ra)高于80的三波段熒光燈替代。7.7紫外濾光片GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016應(yīng)使用ISO14605規(guī)定的紫外濾光片攔截紫外線。7.7.1條件A(400nm攔截條件下)ISO14605規(guī)定的A型紫外濾光片。7.7.2條件B(380nm攔截條件下)ISO14605規(guī)定的B型UV攔截過濾片。紫外過濾片應(yīng)直接安裝在燈的下方。7.8照度計(jì)照度計(jì)符合ISO14605的規(guī)定。光照強(qiáng)度應(yīng)使用經(jīng)校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)的照度計(jì)進(jìn)行測(cè)量,單位為照度(lx),且必須保持與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的可追溯性。使用經(jīng)過校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)的照度計(jì),必須保持與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的可追溯性。7.9離心機(jī)離心機(jī)應(yīng)能在(4±2)℃,離心力10000g使用。7.10無菌過濾器含聚醚砜(PES)膜或聚偏氟乙烯(PVDF)膜的無菌過濾器(孔徑0.2μm~0.45μm)。8試樣試樣的制備要求如下:a)從材料的平整部分裁剪(50±2)mm×(50±2)mm,厚度宜超過10mm,將其作為標(biāo)準(zhǔn)形狀的試樣;b)制備9片未經(jīng)處理的試樣和6片經(jīng)室內(nèi)光激發(fā)的光催化處理的試樣。當(dāng)不能提供未經(jīng)處理的試樣時(shí),可以使用玻璃片代替。需特別注意避免發(fā)生微生物污染或者試樣之間的交叉污染。當(dāng)試樣尺寸減小時(shí),應(yīng)減小薄膜尺寸。薄膜的尺寸不得小于800mm2,覆蓋膜的邊緣應(yīng)在試樣邊緣內(nèi)側(cè)2.5mm至5.0mm之間。9測(cè)試程序9.1通則試驗(yàn)方法的流程如圖2所示。GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016圖2貼膜法測(cè)試流程9.2菌懸液的制備程序菌懸液的制備程序如下:a)使用鉑接種環(huán)將儲(chǔ)存菌種(見6.1.2)轉(zhuǎn)移到3mL含鈣LB培養(yǎng)基中;b)在(37±1)℃培養(yǎng)16h~24h;c)取約1/1000體積的b)中培養(yǎng)物到含鈣LB培養(yǎng)基中;注:含鈣LB培養(yǎng)基的體積取決于培養(yǎng)皿的數(shù)量[見9.6g)]。d)在(37±1)℃培養(yǎng)至細(xì)菌濃度至5.0×108cfu/mL~2.0×109cfu/mL。宜重復(fù)此步驟多次,以建立濁度與細(xì)菌濃度之間的關(guān)系。如果已獲得充足的數(shù)據(jù),此后可以只測(cè)試濁度。9.3試驗(yàn)噬菌體溶液的制備試驗(yàn)噬菌體溶液的制備程序如下:a)使用1/500NB稀釋噬菌體儲(chǔ)備液(見6.1.3),調(diào)整滴度為1.0×107pfu/mL~4.0×107pfu/mL;注:含鈣的LB的體積取決于培養(yǎng)皿的數(shù)量[見9.6g)]。此步驟不宜使用渦旋混合器混勻。b)如果制備的噬菌體溶液不立即使用,可儲(chǔ)存于0℃并在2h內(nèi)使用。9.4室內(nèi)光照激發(fā)的光催化抗病毒活性測(cè)試程序室內(nèi)光照激發(fā)的光催化抗病毒火星測(cè)試程序如下:a)在培養(yǎng)皿底部放置無菌的保濕濾紙,加入足量的無菌水。在濾紙上放置玻璃棒或玻璃管,以避免試樣與濾紙接觸,并將試樣放置在其上,使室內(nèi)光激發(fā)的光催化處理表面向上。對(duì)試驗(yàn)中使用的室內(nèi)光激發(fā)的光催化處理試樣和未經(jīng)處理的試樣(前者6片,后者9片)均按此步驟重復(fù)放置;注1:為防止保濕玻璃片起霧,往培養(yǎng)皿中加入4mLb)使用無菌移液管吸取0.15mL試噬驗(yàn)菌體溶液并將其滴加到每一個(gè)試片上,在液滴上貼覆蓋膜然后輕推使噬菌體溶液均勻分散至整個(gè)膜表面。小心操作勿使液體溢出膜外。如果試樣尺寸不規(guī)則試樣[見8b)注1],則按比例調(diào)整噬菌體懸液接種體積以適應(yīng)覆蓋膜尺寸(見7.2);注2:常規(guī)接種體積可能會(huì)造成噬菌體溶液從膜邊緣溢出或者不能均勻分布。這時(shí),可以減半或加倍接種體積。然GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016而,如果噬菌體溶液的接種量改變了,每片試樣上接種的噬菌體的數(shù)量應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)尺寸試樣保持相同,控制在此步驟不宜使用渦旋混合器以免造成噬菌體感染力的喪失。推薦使用手振蕩混合。c)將保濕玻璃板放置于培養(yǎng)皿頂部;d)除3片未經(jīng)處理的試樣接種后立即測(cè)定噬菌體滴度外(見9.6),其余試樣進(jìn)行光照試驗(yàn)(見9.5);e)取3片接種噬菌體懸液后的未經(jīng)處理試樣(接種噬菌體溶液后試樣使用無菌鑷子將其覆蓋膜和未經(jīng)處理的試樣放入均質(zhì)袋內(nèi),小心操作勿使噬菌體溶液從覆蓋膜或試樣上泄漏。加入10mLSCDLP,在袋外用手充分搓洗試樣和覆蓋膜,以洗出噬菌體溶液??焖賹?duì)洗出液進(jìn)行噬菌體滴度測(cè)試(見9.6)。如果能證明可以達(dá)到相同的結(jié)果,則可以使用其他器具替代均質(zhì)袋。9.5室內(nèi)光照條件9.5.1根據(jù)使用室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑材料的實(shí)際情況,從7.7所述的兩種條件中選擇紫外攔截條件。9.5.4與9.5.5試驗(yàn)時(shí)間段的試樣置于(25±5)℃條件下。9.5.2將照度計(jì)放置在照明裝置的底部,將覆蓋膜和玻璃板放在感應(yīng)器上方。9.5.3調(diào)整燈的強(qiáng)度,使試件表面照度為(1000±50)lx??紤]到有效使用室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑材料的實(shí)際情況,照度可以在(100±5)lx和(3000±150)lx之間改變。9.5.4將含有細(xì)菌懸浮液試樣(3個(gè)未經(jīng)處理的試樣和3個(gè)室內(nèi)光激發(fā)的催化處理試樣)的培養(yǎng)皿在光下照射4h。根據(jù)室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑材料有效使用的實(shí)際條件,可以在2h~8h之間選擇光照時(shí)間。9.5.5將裝有已經(jīng)接種了噬菌體溶液的試樣(3片未經(jīng)處理的試樣和3片室內(nèi)光激發(fā)的催化處理的試樣)和細(xì)菌懸液的培養(yǎng)皿置于黑暗處,時(shí)間與9.5.4相同。9.5.6對(duì)于9.5.4和9.5.5中的試樣,按9.4e)中的方法進(jìn)行洗脫。9.6噬菌體滴度的測(cè)試噬菌體滴度的測(cè)試步驟如下:a)熔解瓶?jī)?nèi)的頂層瓊脂,冷卻至約50℃后分裝2mL至帶蓋的試管內(nèi),于(45±1)℃水??;b)底層瓊脂在(37±1)℃預(yù)熱;c)使用無菌移液管吸取1mL洗脫液[或儲(chǔ)備液,見9.3a)]。加入含有(9±0.1)mL蛋白胨生理鹽水的試管中。輕輕拍打使之充分混勻,不應(yīng)使用渦旋器;此步驟不宜使用渦旋混合器以免造成噬菌體感染力的喪失,推薦使用手振蕩混勻。d)使用新的無菌移液管吸取c)中的1mL液體,放入含有(9±0.1)mL蛋白胨生理鹽水的試管中,輕輕拍打以充分混勻;e)使用10倍稀釋法得到系列稀釋液;f)在(37±1)℃條件下預(yù)熱溶液[洗脫液c)、d)和e)10min;g)吸取0.1mL菌懸液[見9.2d)]至a)中的培養(yǎng)基試管中,輕輕混勻,不應(yīng)使用渦旋混合器。此步驟不宜使用渦旋混合器以免造成噬菌體感染力的喪失。推薦用手振蕩混勻;h)取f)中的1mL液體加到a)中的培養(yǎng)基試管中,輕輕混勻,不得使用渦旋混合器;此步驟不已使用渦旋混合器以免造成噬菌體感染力的喪失,推薦用手振蕩混勻。i)將h)中的混合物傾注到預(yù)熱的底層平板上[b)],每個(gè)洗脫液或稀釋液都做兩個(gè)平行試驗(yàn);j)在室溫放置15min~30min;k)待頂層瓊脂凝固后,將培養(yǎng)皿置于(37±1)℃培養(yǎng)(18±2)h;GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016l)培養(yǎng)結(jié)束后,選取出現(xiàn)(30~300)個(gè)噬菌斑的培養(yǎng)皿進(jìn)行計(jì)數(shù)。10結(jié)果計(jì)算10.1通則測(cè)試結(jié)果按下列方法計(jì)算。根據(jù)ISO80000-1的規(guī)定,宜將結(jié)果計(jì)算值修約至小數(shù)點(diǎn)后第二位。10.2試驗(yàn)有效性的要求使用公式(1)計(jì)算噬菌體的滴度。N——噬菌體滴度,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu);Z——兩個(gè)平行培養(yǎng)皿上噬菌體的平均數(shù),單位為噬菌斑形成單位數(shù)每毫升(pfu/mL);DF——稀釋倍數(shù);當(dāng)含有1mL洗脫液的培養(yǎng)皿上噬菌斑數(shù)小于30時(shí),使用平均數(shù)來計(jì)算噬菌斑數(shù)量。當(dāng)含有1mL洗脫液的培養(yǎng)皿上噬菌斑數(shù)量小于1時(shí),平均數(shù)計(jì)為1。滿足以下4個(gè)條件試驗(yàn)有效。如果其中一條或多條不滿足,則試驗(yàn)無效,應(yīng)重新進(jìn)行測(cè)試。a)接種后3片未處理試樣上的噬菌體滴度對(duì)數(shù)平均值滿足公式(2)。Logmean——3個(gè)試樣上噬菌體滴度b)接種后未處理試樣上的噬菌體滴度應(yīng)在1.0×106pfu~4.0×106pfu范圍內(nèi);c)經(jīng)過光照后未處理試樣的噬菌體滴度均應(yīng)大于1.0×104pfu。但是,如果使用玻璃板作為未處理試樣時(shí),經(jīng)光照后的噬菌體滴度均應(yīng)大于1.0×105pfu;d)當(dāng)放置于暗條件后,未處理試樣的噬菌體滴度均應(yīng)大于1.0×104pfu。但是,如果使用玻璃板作為未處理試樣時(shí),噬菌體滴度應(yīng)大于1.0×105pfu。10.3室內(nèi)光照激發(fā)的光催化劑抗病毒活性值計(jì)算試驗(yàn)結(jié)束后使用公式(3)和公式(4)來計(jì)算室內(nèi)光激發(fā)的光催化劑抗病毒活性值。);L——室內(nèi)光照強(qiáng)度,單位為勒克斯(lx);A——接種后未處理試樣的立即洗脫的噬菌體平均滴度,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu);BF-L——經(jīng)室內(nèi)光照強(qiáng)度F-L照射后未經(jīng)處理試樣的噬菌體平均滴度,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu);GB/TXXXXX—XXXX/ISO18071:2016CF-L——經(jīng)室內(nèi)光照強(qiáng)度F-L照射后光催化試樣的噬菌體平均滴度,單位為噬菌斑形成單位數(shù)ΔV=log[BF?L/CF?L?log(BD/A)?log(CD/A)]=log[BF?L/CF?L?log[BD/CD·········(2)ΔV——室內(nèi)光激活的光催化劑抗病毒活性值;BD——暗條件放置后,未經(jīng)處理試樣的噬菌體平均滴度,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu);CD——暗條件放置后,光催化處理試樣的噬菌體平均滴度,單位為噬10.4無室內(nèi)光活性催化劑抗病毒活性值計(jì)算在包括不含室內(nèi)光活性催化劑的情況下,測(cè)試結(jié)束后使用公式(5)計(jì)算不含室內(nèi)光活性催化抗病毒活性值。VD——暗條件下放置后,不含光催化劑的試樣的抗病毒活性值;BD——暗條件放置后,未經(jīng)處理試樣的噬菌體滴度得平均值,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu);CD——暗條件放置后,室內(nèi)光活性催化處理的試樣的噬菌體滴度的平均值,單位為噬菌斑形成單位數(shù)(pfu)。11試驗(yàn)報(bào)告試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包含如下信息:

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