血液細(xì)菌培養(yǎng)課件

血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)

血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)操作指南培訓(xùn)考核題

1、血培養(yǎng)的臨床指征有哪些？2、血培養(yǎng)的次數(shù)要求3、嬰幼兒患者，需要同時(shí)采集幾次(不同部位)血培養(yǎng)標(biāo)本？4、血培養(yǎng)的采血量要求5、血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送要求？血液細(xì)菌培養(yǎng)-血液細(xì)菌培養(yǎng)-2-3sets(4-6bottles)/episode9,000-10,000bottles/month100,000bottles/year臺(tái)大醫(yī)院—BACTEC924018臺(tái)血液細(xì)菌培養(yǎng)-臺(tái)灣長(zhǎng)庚醫(yī)院—BACTEC924023臺(tái)血液細(xì)菌培養(yǎng)-臺(tái)灣長(zhǎng)庚醫(yī)院—BACTEC924023臺(tái)血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的臨床指征患者出現(xiàn)以下一種或同時(shí)具備幾種臨床表現(xiàn)時(shí)可作為血培養(yǎng)的重要指征①發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃)；②寒戰(zhàn)；③白細(xì)胞增多（特別是有“核左移”時(shí)）；④粒細(xì)胞減少⑤血小板減少⑥皮膚、黏膜出血，常見(jiàn)于溶血性鏈球菌感染的菌血癥，傷寒病人，斑疹傷寒；⑦昏迷；⑧多器官衰竭；⑨血壓降低；⑩呼吸加快;

血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的臨床指征以及肝脾腫大；關(guān)節(jié)疼痛；C反應(yīng)蛋白、內(nèi)毒素、降鈣素原升高等。對(duì)新生兒可疑菌血癥,還應(yīng)同時(shí)做尿液和腦脊液培養(yǎng)。老年菌血癥患者可能不發(fā)熱或體溫不低，如伴有身體不適、肌痛或卒中，可能是感染性心內(nèi)膜炎的重要指征。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的標(biāo)本采集時(shí)機(jī)血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的次數(shù)要求對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的成人患者，同時(shí)或短時(shí)間間隔（10分鐘內(nèi)）從不同部位采集2～3套血培養(yǎng)標(biāo)本，做到“雙瓶雙側(cè)”。如有必要，可同時(shí)或短時(shí)間間隔內(nèi)從下肢靜脈采血接種第三套培養(yǎng)瓶。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的次數(shù)要求在采集血培養(yǎng)后2至5天內(nèi)，不需要重復(fù)采集血培養(yǎng)，只有在疑似感染性心內(nèi)膜炎或?qū)Ч芟嚓P(guān)性感染患者的連續(xù)性菌血癥時(shí)在不同時(shí)間點(diǎn)采血才有必要。嬰幼兒患者，需要同時(shí)采集2次(不同部位)血培養(yǎng)標(biāo)本

血液細(xì)菌培養(yǎng)-AnswerCLSI要求每次采集2-3套標(biāo)本,每套應(yīng)包括一個(gè)需氧培養(yǎng)瓶,一個(gè)厭氧培養(yǎng)瓶成年病人不能只采1瓶血培養(yǎng)標(biāo)本，采血量不足和只做1套血培養(yǎng)所得得結(jié)果是很難正確解釋的Cockrill2004年報(bào)告:163位病人,血培養(yǎng)儀采血套數(shù)及血量1套(20ml)2套(40ml)3套(60ml)檢出率65%80%96%血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的采血量要求成年患者推薦的采血量為20~30ml,每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。嬰幼兒患者推薦的采血量應(yīng)少于患兒總血容量的1%，每瓶不少于2ml。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的采血量說(shuō)明1、成人采血量在2～30ml之間時(shí)，病原菌檢出率與采血量成正比。2、兒童患者檢出率與血培養(yǎng)的采血量成正相關(guān)，但由于兒童患者血液中病原菌濃度較高，標(biāo)本量無(wú)需等同于成人。3、兒童也可能發(fā)生低水平的菌血癥，血培養(yǎng)采血量要根據(jù)患兒的血容量和年齡確定。血液細(xì)菌培養(yǎng)-Answer兒童厭氧菌感染極少，建議只采用兒童瓶厭氧培養(yǎng)只考慮針對(duì)特殊的高危兒童對(duì)于嬰幼兒患者，采血量不超過(guò)患者總血量的1％

<1月:≥

0.5mL

1月

–36月:≥

1.0mL

≥36月:≥

4.0mLConnellTG.Pediatrics2007;119(5):891.血液細(xì)菌培養(yǎng)-血標(biāo)本在需氧瓶和厭氧瓶中的分配以一個(gè)需氧瓶和一個(gè)厭氧瓶為一套血培養(yǎng)，作為常規(guī)血培養(yǎng)的組合。當(dāng)采血量不夠推薦的采血量時(shí)，應(yīng)首先滿足需氧瓶，剩余標(biāo)本再接種入?yún)捬跗?。血液?xì)菌培養(yǎng)-報(bào)告時(shí)間提前出現(xiàn)陽(yáng)性時(shí)間：需氧瓶有9%比厭氧瓶早1天報(bào)告結(jié)果厭氧瓶有5%比需氧瓶早1天報(bào)告結(jié)果因此,只做需氧菌不做厭氧菌培養(yǎng),將有19%的菌株不能發(fā)現(xiàn),另有5%的血培養(yǎng)延遲1天報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果

KhannaP,CollignonP.Anaerobicbottlesarestillimportantinbloodculturesets.EurJClinMicrobiolInfectDis,2001,20:217-219血液細(xì)菌培養(yǎng)-血標(biāo)本分配說(shuō)明采用一個(gè)需氧瓶和一個(gè)厭氧瓶的血培養(yǎng)組合與采用2個(gè)需氧瓶的組合相比，可檢出更多的葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌和厭氧菌。真菌和嚴(yán)格的需氧菌（如假單胞菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌）幾乎全部只能從需氧瓶中分離到。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)標(biāo)本的采集1、皮膚消毒使用碘伏、碘酊、次氯酸或洗必泰作為血培養(yǎng)的皮膚消毒劑，碘酊的作用時(shí)間不能少于30秒，碘伏的作用時(shí)間則需要1.5～2分鐘。年齡小于2個(gè)月的新生兒，需使用70%的異丙基乙醇進(jìn)行皮膚消毒,消毒劑需要有足夠的作用時(shí)間以保證消毒效果。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)標(biāo)本的采集2、標(biāo)本采集部位從兩側(cè)上肢靜脈采血，“雙瓶雙側(cè)”采血培養(yǎng)。必要時(shí)從下肢靜脈采血做第三套血培養(yǎng)。不建議采集動(dòng)脈血，增加了抽血污染的機(jī)會(huì)。盡量避免從靜脈留置導(dǎo)管采血培養(yǎng)，因其常伴有高污染率。血液細(xì)菌培養(yǎng)-減少血培養(yǎng)污染的注意事項(xiàng)1.采血之前，血培養(yǎng)瓶的橡皮塞需使用70%異丙醇/酒精消毒并干燥，然后再進(jìn)行穿刺部位的皮膚消毒。2.嚴(yán)格按照皮膚消毒方法操作，并等待足夠消毒時(shí)間。嚴(yán)格無(wú)菌操作。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送1.采血后應(yīng)該立即送檢。如不能立即送檢，需室溫保存，切勿冷藏。標(biāo)本接種到培養(yǎng)瓶后,需輕輕顛倒混勻以防血液凝固。2.血培養(yǎng)瓶在接種前后均不得冷藏或冷凍，否則會(huì)導(dǎo)致某些病原微生物死亡。接種后的培養(yǎng)瓶最好立即送到實(shí)驗(yàn)室，最遲不能超過(guò)2小時(shí)。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn)血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)的培養(yǎng)周期1.傳統(tǒng)手工血培養(yǎng)方法一般孵育7天。2.自動(dòng)化血培養(yǎng)系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)血培養(yǎng)周期為5天。對(duì)懷疑為感染性心內(nèi)膜炎患者的血培養(yǎng)也不必延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-分枝桿菌血培養(yǎng)必須用特殊的商品化分枝桿菌血培養(yǎng)瓶。所有培養(yǎng)都必須孵育至少4周。培養(yǎng)溫度為25~30℃。血液細(xì)菌培養(yǎng)-分枝桿菌血培養(yǎng)說(shuō)明2.快速生長(zhǎng)的分枝桿菌所致菌血癥則大多與長(zhǎng)時(shí)間留置靜脈導(dǎo)管污染有關(guān)血液細(xì)菌培養(yǎng)-CRBSI是醫(yī)源性感染最常見(jiàn)的原因之一美國(guó)每年有25萬(wàn)例CRBSI發(fā)生死亡率12-35%CRBSI患者常常局部無(wú)感染跡象，抗菌藥物治療無(wú)效，但拔出導(dǎo)管病情即好轉(zhuǎn)

導(dǎo)管相關(guān)性的血流感染

Catheter-RelatedBloodStreamInfections（CRBSI）血液細(xì)菌培養(yǎng)-CLSI對(duì)非隧道式和隧道式的中心靜脈導(dǎo)管和輸液港(VenousAccessPorts,VAP)推薦的培養(yǎng)方法目標(biāo)人群:攜帶深靜脈導(dǎo)管超過(guò)48小時(shí),出現(xiàn)原因不明的發(fā)熱、低血壓的患者，兒童患者出現(xiàn)低體溫者送檢方法：首先判斷導(dǎo)管是否有保留的必要性，按導(dǎo)管保留與否分別采取不同的送檢方法血液細(xì)菌培養(yǎng)-Answer1、導(dǎo)管仍需留置

導(dǎo)管采血1套+外周靜脈采血1-2套(2個(gè)位置采血時(shí)間應(yīng)該接近，在培養(yǎng)瓶上標(biāo)注采血時(shí)間和部位“導(dǎo)管”“或外周靜脈”)2、導(dǎo)管可拔出兩個(gè)部位采集外周靜脈血各1套+導(dǎo)管半定量培養(yǎng)（導(dǎo)管尖端5cm）血液細(xì)菌培養(yǎng)-

Maki半定量培養(yǎng)法Maki半定量培養(yǎng)法:即查導(dǎo)管表面的定植菌引起的感染.將5cn長(zhǎng)的導(dǎo)管尖在血平板上全程滾動(dòng),培養(yǎng)過(guò)夜,計(jì)數(shù)菌落,大于等于15CFU/平皿有意義

血液細(xì)菌培養(yǎng)-血液細(xì)菌培養(yǎng)-短期外周導(dǎo)管Maki半定量法先用75%酒精清潔導(dǎo)管周圍皮膚，然后無(wú)菌移動(dòng)導(dǎo)管，剪取導(dǎo)管末端5cm置于無(wú)菌容器中，立即送至實(shí)驗(yàn)室（為防止干燥，常規(guī)培養(yǎng)送檢時(shí)間不得超過(guò)15min，4℃保存不得超過(guò)2小時(shí)）。將接種后的培養(yǎng)基置CO2孵箱35℃過(guò)夜培養(yǎng)，平板上菌落數(shù)不少于15個(gè)為陽(yáng)性。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血液細(xì)菌培養(yǎng)-血液細(xì)菌培養(yǎng)-血液細(xì)菌培養(yǎng)-培養(yǎng)結(jié)果的解釋1.如果一套或多套血培養(yǎng)陽(yáng)性，導(dǎo)管片段培養(yǎng)也是陽(yáng)性（半定量≥15個(gè)菌落），并且為同一種菌：提示導(dǎo)管相關(guān)血流感染。2.如果一套或多套血培養(yǎng)陽(yáng)性，而導(dǎo)管片段培養(yǎng)陰性：不能確定為CRBSI；但如果培養(yǎng)出的是金黃色葡萄球菌或假絲酵母菌，而且能排除其他來(lái)源的感染，則提示CRBSI。血液細(xì)菌培養(yǎng)-培養(yǎng)結(jié)果的解釋3.如果血培養(yǎng)陰性，而導(dǎo)管片段培養(yǎng)陽(yáng)性，提示是微生物在導(dǎo)管表面定植而非CRBSI。4.如果血培養(yǎng)陰性，導(dǎo)管片段培養(yǎng)也是陰性，則不可能是CRBSI。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血培養(yǎng)結(jié)果對(duì)感染性心內(nèi)膜炎的診斷和治療非常重要。如果采用較理想的血培養(yǎng)技術(shù)，90%以上感染性心內(nèi)膜炎患者能獲得陽(yáng)性血培養(yǎng)結(jié)果。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血培養(yǎng)的采集時(shí)機(jī)1.急性感染性心內(nèi)膜炎：要求：在經(jīng)驗(yàn)性抗生素治療前30min之內(nèi)采血培養(yǎng)（1~2小時(shí)內(nèi)操作完畢）。說(shuō)明：對(duì)于疑似或已知高毒力病原菌（如金葡菌）所致感染性心內(nèi)膜炎患者，需要在第一時(shí)間立即采血培養(yǎng)以避免治療上不必要的延誤。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血培養(yǎng)的采集時(shí)機(jī)2.亞急性感染性心內(nèi)膜炎：

要求：每隔15min左右收集血液，采集數(shù)套血培養(yǎng)。

說(shuō)明：適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔有助于證明為持續(xù)性菌血癥，尤其是當(dāng)心電圖正?；蚰＠鈨煽蓵r(shí)具有更高的臨床價(jià)值。對(duì)疑似病人，不一定必須在經(jīng)驗(yàn)性抗生素治療前采血培養(yǎng)，嘗試確定微生物學(xué)診斷更為重要。由于大多數(shù)感染性心內(nèi)膜炎患者菌血癥持續(xù)存在，使血培養(yǎng)的時(shí)間選擇相對(duì)不是那么重要。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎需要的血培養(yǎng)數(shù)量要求：先采集3套血培養(yǎng)。如果這些血培養(yǎng)在24小時(shí)內(nèi)均為陰性，則需再采集2套血培養(yǎng)，總共需采集5套血培養(yǎng)。不同患者最合適的血培養(yǎng)數(shù)量可以有所不同，但很清楚，只有一個(gè)血培養(yǎng)是一定不夠的。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎造成感染性心內(nèi)膜炎“培養(yǎng)陰性”的另一個(gè)可能原因是由于“營(yíng)養(yǎng)變異鏈球菌”（NVS）存在，它們生長(zhǎng)需要維生素B6或半胱氨酸。目前商品化血培養(yǎng)瓶中都已經(jīng)添加了這些物質(zhì)。如果血培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)種時(shí)符合鏈球菌的特征，但在羊血瓊脂平板上不生長(zhǎng)，則可能存在營(yíng)養(yǎng)變異鏈球菌。血液細(xì)菌培養(yǎng)-感染性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎血培養(yǎng)所需孵育時(shí)間全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)的孵育時(shí)間為5天。如果所有5套血培養(yǎng)結(jié)果均為陰性，但臨床仍懷疑為感染性心內(nèi)膜炎，則需從所有培養(yǎng)瓶中抽取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種巧克力瓊脂平板，并涂片染色鏡檢。血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式血培養(yǎng)無(wú)論是陰性還是陽(yáng)性結(jié)果,都對(duì)患者的診斷和治療非常重要!尤其是血培養(yǎng)的陽(yáng)性結(jié)果要納入危機(jī)值報(bào)告的范疇。血液細(xì)菌培養(yǎng)-陽(yáng)性血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告制度1.初步報(bào)告血培養(yǎng)陽(yáng)性報(bào)警后，應(yīng)立即抽取培養(yǎng)液進(jìn)行涂片、革蘭染色、顯微鏡鏡檢，并將結(jié)果向臨床主管醫(yī)生進(jìn)行緊急報(bào)告。血液細(xì)菌培養(yǎng)-陽(yáng)性血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告制度2.二級(jí)報(bào)告陽(yáng)性報(bào)警的血培養(yǎng)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)基培養(yǎng)16~18小時(shí)后，觀察培養(yǎng)基上菌落形態(tài)、革蘭染色后菌體形態(tài)以及某些試驗(yàn)結(jié)果，盡可能通知臨床初步鑒定結(jié)果和某些耐藥特征。血液細(xì)菌培養(yǎng)-陽(yáng)性血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告制度3.最終（書(shū)面）報(bào)告報(bào)告最終菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-污染問(wèn)題及其鑒別要求

為了將血培養(yǎng)污染最小化，必須具有以下措施：1.注重血培養(yǎng)標(biāo)本采集技術(shù)的培訓(xùn)提高，減少污染的發(fā)生2.采集合適的血培養(yǎng)套數(shù)以便有效檢出病原微生物，并能正確區(qū)分血培養(yǎng)污染；3.結(jié)合醫(yī)院血培養(yǎng)開(kāi)展?fàn)顩r，建立能客觀、準(zhǔn)確評(píng)估血培養(yǎng)陽(yáng)性菌株是病原菌還是污染菌的標(biāo)準(zhǔn)化程序。

血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)污染的鑒別a.48小時(shí)內(nèi)僅有這一瓶血培養(yǎng)，則實(shí)驗(yàn)室人員需調(diào)取患者資料(電話聯(lián)系)并與臨床醫(yī)生討論可能的臨床價(jià)值：病原菌、污染菌不能確定。除非臨床要求，不做藥敏試驗(yàn)。b.48小時(shí)內(nèi)還有另一套或另一瓶血培養(yǎng)，但結(jié)果為陰性，則作為污染菌通知臨床，除非臨床要求，不做藥敏試驗(yàn)。血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)污染的鑒別c.48小時(shí)內(nèi)還有另一套或另一瓶血培養(yǎng)，結(jié)果為陽(yáng)性，鑒定結(jié)果為草綠色鏈球菌，則認(rèn)為是病原菌，做藥敏試驗(yàn)并將結(jié)果報(bào)告臨床；如果鑒定結(jié)果為同一種其他潛在污染菌，則其臨床意義不能確定，需與臨床醫(yī)生討論其可能的臨床價(jià)值：病原菌、污染菌不能確定。除非臨床要求，不做藥敏試驗(yàn)。血液細(xì)菌培養(yǎng)-菌種鑒定對(duì)判斷血培養(yǎng)污染的價(jià)值當(dāng)分離出的微生物為金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌以及其他腸桿菌科細(xì)菌、銅綠假單胞菌、白色假絲酵母菌時(shí)，90%以上是血流感染病原菌。血液細(xì)菌培養(yǎng)-菌種鑒定對(duì)判斷血培養(yǎng)污染的價(jià)值分離出化膿性鏈球菌、無(wú)乳鏈球菌、產(chǎn)單核李斯特菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、其它假絲酵母菌和新型隱球菌時(shí)污染的可能性更低。相反，棒狀桿菌、微球菌、氣球菌、芽胞桿菌、丙酸桿菌、草綠色鏈球菌和凝固酶陰性葡萄球菌等很少是菌血癥的病原菌。血液細(xì)菌培養(yǎng)-主要內(nèi)容血培養(yǎng)的污染問(wèn)題及其鑒別4標(biāo)本的采集和運(yùn)送1幾種特殊要求的血培養(yǎng)2血培養(yǎng)結(jié)果的報(bào)告方式3血培養(yǎng)的質(zhì)量控制5血液細(xì)菌培養(yǎng)-血培養(yǎng)分析前質(zhì)量控制包括：病人評(píng)估、檢測(cè)項(xiàng)目的選擇和申請(qǐng)、樣本采集、樣本運(yùn)送、樣本接收和處理。在申請(qǐng)單注明，有助于實(shí)驗(yàn)室選擇合適培養(yǎng)基提高陽(yáng)性率。血液細(xì)菌培養(yǎng)-樣本采集要求實(shí)驗(yàn)室定期統(tǒng)計(jì)以下數(shù)據(jù)，作為QA指標(biāo)：1.血培養(yǎng)污染率(應(yīng)低于3%)2.低于建議采血量的血培養(yǎng)所占比例3.單瓶血培養(yǎng)所占比例4.被拒收血培養(yǎng)所占比例血液細(xì)菌培養(yǎng)-樣本采集要求靜脈穿刺點(diǎn)選定后，去除血培養(yǎng)瓶的瓶帽，